觸珠蛋白基因多態(tài)性與老年血管性癡呆患者病情嚴(yán)重程度及疾病易感性關(guān)系研究*

陳 晶,史文俊,安黎云,鄭運(yùn)周,徐冬梅,王縛鯤

中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八O醫(yī)院檢驗(yàn)科,河北石家莊 050082

血管性癡呆是一種主要因缺血性或出血性卒中引發(fā)的大腦低灌注,對神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生損傷,最終造成的認(rèn)知障礙綜合征[1]。血管性癡呆患者常出現(xiàn)記憶、注意力、語言等多項(xiàng)功能不全,嚴(yán)重影響其生存質(zhì)量。卒中后發(fā)生血管性癡呆的機(jī)制較復(fù)雜,可能與遺傳、基礎(chǔ)疾病等多種因素有關(guān),及早診斷和干預(yù)對改善患者預(yù)后具有重要意義[2]。觸珠蛋白又稱結(jié)合珠蛋白,是一種廣泛存在于哺乳動物體液中的急性實(shí)相蛋白,參與機(jī)體抗氧化、抗炎癥、免疫調(diào)節(jié)、促血管生成等多項(xiàng)生理過程[3]。還有研究顯示,觸珠蛋白基因多態(tài)性與阿爾茲海默癥(AD)、腦卒中等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生有關(guān),還有報(bào)道顯示其與糖尿病認(rèn)知損傷有關(guān),推測觸珠蛋白基因突變可能影響患者神經(jīng)功能[4]。基于此,本研究通過檢測本院收治的80例血管性癡呆患者觸珠蛋白基因多態(tài)性分布頻率,了解觸珠蛋白基因在血管性癡呆發(fā)病及進(jìn)展中的作用,旨在為臨床防治提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年2月至2023年2月本院收治的80例老年血管性癡呆患者作為血管性癡呆組,另選同期本院收治的80例非血管性癡呆腦卒中人群作為對照組。血管性癡呆組男49例,女31例,年齡38～84歲,平均(68.72±5.15)歲;對照組男52例,女28例,年齡37～87歲,平均(67.35±5.28)歲,兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)兩組均符合文獻(xiàn)[5]中的卒中診斷標(biāo)準(zhǔn),血管性癡呆組符合美國國立神經(jīng)系統(tǒng)疾病和卒中研究所與瑞士研究科學(xué)研究國際協(xié)會關(guān)于血管性癡呆的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],血管性癡呆組簡易精神狀態(tài)量表(MMSE)[7]評分≤24分,缺血指數(shù)量表(HIS)[8]評分≥7分;(2)兩組卒中時間均≥3個月;(3)年齡≥18歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)既往存在認(rèn)知功能障礙、精神疾病史;(2)心源性腦栓塞和其他癡呆類型疾病;(3)合并嚴(yán)重心肺腎功能異常、惡性腫瘤、全身嚴(yán)重感染。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn),患者或家屬簽署知情同意書。

1.2臨床資料收集與血液標(biāo)本檢測 采用調(diào)查問卷方式收集患者性別、年齡、體重指數(shù)(BMI)、飲酒史、吸煙史、受教育年限、獨(dú)居、既往疾病史(高血壓史、高脂血癥史、糖尿病史、冠心病史、糖尿病史、貧血史、心梗史、心律失常史),采集患者空腹靜脈血,采用全自動生化儀檢測患者血尿酸(UA)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平。

1.3聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物(PCR-SSP)法測定其觸珠蛋白基因位點(diǎn)基因型及等位基因分布頻率 采用DNA提取試劑盒提取兩組納入對象血液中基因組DNA,然后采用PCR-SSP法測定其觸珠蛋白基因分型:在反應(yīng)體系包括100 ng DNA、0.5 μL 10 μmol/L上下游引物、10 μL 2×Rapid Tap Master Mix,隨后加入ddH2O將反應(yīng)體系補(bǔ)充到20 μL。引物A序列5′-GAGGGGAGCTTGCCTTTCCATTG-3′,1 757 bp;引物B序列5′-GAGATTTTTGAGCCCTGGCTGGT-3′,3 481 bp;引物C序列5′-CCTGCCTCGTATTAACTGCACCAT-3′,349 bp;引物D 序列5′-CCGAGTGCTCCACATAGCCATGT-3′,349 bp,其中引物A、B為觸珠蛋白1等位基因序列,引物C、D為觸珠蛋白2等位基因序列。反應(yīng)條件:預(yù)變性95 ℃ 2 min,變性95 ℃ 1 min,退火65 ℃ 2 min(A/B引物)或65 ℃ 1 min(C/D引物),72 ℃ 2 min,共33個循環(huán),延伸72 ℃ 7 min,獲得產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳中成像,并記錄其表達(dá)量。

1.4血管性癡呆患者病情嚴(yán)重程度評價 采用MMSE評分評價血管性癡呆患者的認(rèn)知功能,該量表包括定向力、瞬時記憶力、注意力與計(jì)算力、回憶、語言共5個維度,總分30分,得分越低患者認(rèn)知障礙越嚴(yán)重,其中MMSE評分:<10分為重度癡呆,10～20分為中度癡呆,21～26分為輕度癡呆,≥27分為正常。采用HIS評分評價患者病情,HIS評分包括急性疾病、階梯惡化、病程、抑郁心理等共13項(xiàng),總分18分,分?jǐn)?shù)越高提示腦缺血越嚴(yán)重。

2 結(jié) 果

2.1血管性癡呆組和對照組臨床資料比較 兩組性別、年齡、BMI、飲酒史、獨(dú)居、高血壓史、冠心病史、貧血史、心梗史、心律失常史占比及UA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而血管性癡呆組高脂血癥史、糖尿病史占比和TC、TG水平高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 血管性癡呆組和對照組臨床資料比較 [n/n或或n(%)]

2.2兩組觸珠蛋白等位基因及基因型頻率比較 采用PCR-SSP法測定了兩組觸珠蛋白基因型,各基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),血管性癡呆組觸珠蛋白2-2基因型頻率、觸珠蛋白2等位基因頻率高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),未檢測到觸珠蛋白等位基因缺失型。見表2、圖1。

注:A表示對照組,B表示血管性癡呆組。

表2 兩組觸珠蛋白等位基因及基因型頻率比較[n(%)]

2.3不同觸珠蛋白基因型血管性癡呆患者M(jìn)MSE評分和HIS評分比較 不同觸珠蛋白基因型血管性癡呆患者M(jìn)MSE評分和HIS評分比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中觸珠蛋白2-2基因型患者M(jìn)MSE評分低于觸珠蛋白2-1基因型和觸珠蛋白1-1基因型患者,觸珠蛋白2-2基因型患者HIS評分高于觸珠蛋白2-1基因型和觸珠蛋白1-1基因型患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同觸珠蛋白基因型血管性癡呆患者M(jìn)MSE評分和HIS評分比較分)

2.4影響血管性癡呆發(fā)生的多因素Logistic回歸分析 多因素Logistic回歸分析顯示,攜帶觸珠蛋白2-2基因型、攜帶觸珠蛋白2等位基因是影響血管性癡呆發(fā)生的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響血管性癡呆發(fā)生的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

觸珠蛋白基因位于人體16號染色體上、包含觸珠蛋白1、觸珠蛋白2兩個等位基因,可組成觸珠蛋白1-1、觸珠蛋白2-2、觸珠蛋白2-1這3種基因型,其中觸珠蛋白1-1、觸珠蛋白2-2分別是相對分子質(zhì)量為100×103的二聚體和(200～400)×103的多聚體[9-10]。觸珠蛋白基因型分布存在一定的區(qū)域性和種族差異,本研究發(fā)現(xiàn),對照組患者觸珠蛋白1-1、觸珠蛋白2-1、觸珠蛋白2-2基因型頻率分別為7.5%、28.75%、63.75%,與相關(guān)研究中觸珠蛋白基因型頻率均不同,可能與不同地區(qū)及本研究納入均為腦卒中患者有關(guān)[11-12]。

觸珠蛋白作為一種急性蛋白,具有抗炎癥反應(yīng)及抗氧化作用,而二者一直被認(rèn)為是認(rèn)知損傷的發(fā)病機(jī)制之一[13]。有學(xué)者納入了121例AD患者,發(fā)現(xiàn)其血清觸珠蛋白水平明顯高于健康人群,且與AD患者認(rèn)知損傷程度呈正相關(guān),提示觸珠蛋白表達(dá)異常與認(rèn)知損傷有關(guān)[14]。還有研究認(rèn)為,人體體液中觸珠蛋白水平受到患者性別、年齡、病程等多種因素影響,單純檢測其在血清或者腦脊液中表達(dá)對疾病評估存在一定誤差[15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),血管性癡呆組觸珠蛋白2-2基因型頻率、觸珠蛋白2等位基因頻率高于對照組,提示觸珠蛋白基因變化可能參與了腦卒中后血管性癡呆的發(fā)生。缺血性腦卒中后腦組織炎癥因子可大量釋放、氧化應(yīng)激水平明顯升高,破壞血腦屏障和誘發(fā)腦水腫,加重神經(jīng)功能損傷[16];相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)機(jī)體發(fā)生血管內(nèi)溶血時,觸珠蛋白能與血液中大量游離血紅蛋白結(jié)合形成復(fù)合物,并與巨噬細(xì)胞表面CD163結(jié)合后內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)分解,減輕血紅蛋白釋放在血液中的毒性反應(yīng),從而起到抗氧化及腦組織保護(hù)作用[17]。而有研究顯示,不同基因型觸珠蛋白對機(jī)體保護(hù)作用明顯不同,其中觸珠蛋白2-2基因型對腦組織抗氧化保護(hù)作用最弱[18],推測可能是血管性癡呆組觸珠蛋白2-2基因型頻率、觸珠蛋白2等位基因頻率更高的原因。本次研究還發(fā)現(xiàn),觸珠蛋白2-2基因型患者M(jìn)MSE評分低于觸珠蛋白2-1基因型和觸珠蛋白1-1基因型患者,而HIS評分高于觸珠蛋白2-1基因型和觸珠蛋白1-1基因型患者,說明觸珠蛋白2-2基因型患者認(rèn)知功能更差、腦組織缺血程度更嚴(yán)重,提示攜帶觸珠蛋白2-2基因更高患者可能存在更長的卒中病程及更嚴(yán)重的腦組織損傷,對病情評估具有一定指導(dǎo)意義[19]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn),血管性癡呆組高脂血癥史、糖尿病史占比及TC、TG水平高于對照組,而進(jìn)行多因素Logistic回歸分析顯示,攜帶觸珠蛋白2-2基因型、攜帶觸珠蛋白2等位基因是影響血管性癡呆發(fā)生的獨(dú)立危險因素(P<0.05),提示攜帶觸珠蛋白2-2基因型、攜帶觸珠蛋白2等位基因是影響卒中患者發(fā)生血管性癡呆的獨(dú)立因素。有研究報(bào)道51例AD患者及43例血管性癡呆患者腦脊液中觸珠蛋白表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)其觸珠蛋白2-2表達(dá)的α2鏈水平明顯升高,提示擁有觸珠蛋白2基因患者認(rèn)知功能更容易發(fā)生損傷[20]。

綜上所述,觸珠蛋白2-2基因型、觸珠蛋白2等位基因分布頻率與卒中后血管性癡呆發(fā)生有關(guān),且觸珠蛋白2-2基因型、觸珠蛋白2等位基因分布頻率較高者病情更為嚴(yán)重,可為血管性癡呆的早期識別及病情評估提供參考。但本研究尚有不足之處,一是為小樣本、單中心研究,二是對觸珠蛋白基因影響血管性癡呆發(fā)生的內(nèi)在機(jī)制并不完全清楚,需進(jìn)一步深入研究,找到觸珠蛋白基因多態(tài)性與血管性癡呆發(fā)生的內(nèi)在聯(lián)系,為血管性癡呆早期識別及基因調(diào)控治療提供可靠參考。