子宮內(nèi)膜癌組織中l(wèi)ncRNA HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的表達(dá)與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系*

曾 艷,馮 丹,倪俊曉,楊 梅

涼山彝族自治州第二人民醫(yī)院:1.婦科; 2.病理科,四川涼山 615000

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一,發(fā)病率僅次于宮頸癌,且近年來發(fā)病率與病死率呈上升趨勢[1-3]。子宮內(nèi)膜癌患者初期會(huì)出現(xiàn)陰道出血、陣發(fā)性腹部疼痛等癥狀[4],遺傳、肥胖、雌激素長期且持續(xù)的刺激均與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關(guān)[5]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是一種長度在200 nt以上的RNA分子,廣泛存在于各組織、器官中,LncRNA可通過調(diào)控表觀遺傳基因、轉(zhuǎn)錄和翻譯等過程參與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程[6]。相關(guān)研究表明,lncRNA HOXA-AS2在多種惡性腫瘤中異常表達(dá),與惡性腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展有關(guān)[7]。lncRNA FOXD2-AS1與lncRNA CRNDE也分別與骨肉瘤細(xì)胞、口腔鱗癌、膀胱癌等癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲密切相關(guān)[8-10]。基于此,本研究分析子宮內(nèi)膜癌患者的癌組織中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的表達(dá)與患者臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年10月至2020年2月于本院住院手術(shù)的119例子宮內(nèi)膜癌患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)患者均行宮腔鏡刮宮取材,經(jīng)病理檢查符合子宮內(nèi)膜癌的診斷標(biāo)準(zhǔn),確診為子宮內(nèi)膜癌[11];(2)患者臨床資料及隨訪資料完整;(3)患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他惡性腫瘤;(2)有其他手術(shù)或藥物治療史;(3)合并心、肝、腎等臟器功能不全;(4)合并免疫系統(tǒng)疾病;(5)合并急慢性感染。收集術(shù)中切除子宮內(nèi)膜癌患者的癌組織標(biāo)本及癌旁組織標(biāo)本,并收集整理子宮內(nèi)膜癌患者的年齡、體重指數(shù)(BMI)、腫瘤最大徑、國際婦產(chǎn)科學(xué)聯(lián)合會(huì)(FIGO)分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、分化程度、病理類型等臨床資料。年齡40～65歲,平均(55.14±5.71)歲,平均BMI(23.79±3.66)kg/m2,均根據(jù)患者病情及自身身體狀況進(jìn)行了放療、化療、激素治療等治療。研究組臨床資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批后嚴(yán)格按照規(guī)定程序執(zhí)行。

1.2儀器與試劑 7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購于美國ABI公司。Trizol試劑購于上海文韌生物科技有限公司;PrimeScript miRNA cDNA Synthesis反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于日本TaKaRa公司;ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix試劑盒購于Takara公司;SYBR Green Master Mix(2×)購于北京伊塔生物科技有限公司。

1.3方法

1.3.1子宮內(nèi)膜癌患者癌組織及癌旁組織中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE表達(dá)水平測定 所有患者均行根治性/改良根治子宮切除術(shù)加雙側(cè)輸卵管和卵巢切除手術(shù),術(shù)中收集子宮內(nèi)膜癌患者癌組織和癌旁組織,癌組織取自病變處,癌旁組織取自癌組織遠(yuǎn)端3 cm以外處正常組織。將所取組織投入液氮中保存,之后迅速轉(zhuǎn)移至—80 ℃冰箱保存待測。按照Trizol試劑操作步驟分離提取組織總RNA,并測定其濃度和純度。采用PrimeScript miRNA cDNA Synthesis反轉(zhuǎn)錄試劑盒以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,按照ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix試劑盒說明進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系共20.0 μL:cDNA(50.0 ng/μL)2.0 μL,SYBR Green Master Mix(2×)10.0 μL,PCR上下游引物(10.0 μmol/L)各0.5 μL,加ddH2O至20.0 μL,PCR反應(yīng)條件為95 ℃、1 min變性,95 ℃、15 s,60 ℃退火1 min,40個(gè)循環(huán),以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參,進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,使用2-ΔΔCt方法計(jì)算HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的相對(duì)表達(dá)水平。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3.2隨訪 以電話及門診復(fù)查的方式對(duì)納入研究的子宮內(nèi)膜癌患者進(jìn)行為期3年的隨訪(隨訪截止至2023年2月),每2個(gè)月隨訪1次,記錄患者的生存狀況,當(dāng)患者出現(xiàn)癌因死亡時(shí)則隨訪結(jié)束。

2 結(jié) 果

2.1子宮內(nèi)膜癌患者癌組織及癌旁組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平比較 子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平均高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 子宮內(nèi)膜癌患者癌組織及癌旁組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平比較

2.2子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1和CRNDE相對(duì)表達(dá)水平的相關(guān)性分析 子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平兩兩之間均呈正相關(guān)(rHOXA-AS2 vs. FOXD2-AS1=0.384,P=0.001;rHOXA-AS2 vs. CRNDE=0.576,P<0.001;rFOXD2-AS1 vs. CRNDE=0.326,P=0.003)。

2.3子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系 以子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平的中位數(shù)為臨界值,將患者分為HOXA-AS2高表達(dá)組、HOXA-AS2低表達(dá)組,FOXD2-AS1高表達(dá)組、FOXD2-AS1低表達(dá)組,CRNDE高表達(dá)組、CRNDE低表達(dá)組,分析子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系,結(jié)果顯示,不同年齡、BMI、腫瘤最大徑、病理類型的子宮內(nèi)膜癌患者HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE高表達(dá)組中FIGO分期為Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為深層、分化程度為低分化的患者所占比例高于低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.4子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 采用Kaplan-Meier法分析子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系,結(jié)果顯示,子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2低表達(dá)組3年生存率(52/60,86.67%)高于子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2高表達(dá)組(40/59,67.79%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.039,P<0.05);子宮內(nèi)膜癌患者癌組織FOXD2-AS1低表達(dá)組3年生存率(53/59,89.83%)高于子宮內(nèi)膜癌患者癌組織FOXD2-AS1高表達(dá)組(39/60,65.00%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.456,P<0.05);子宮內(nèi)膜癌患者癌組織CRNDE低表達(dá)組3年生存率(51/60,85.00%)高于子宮內(nèi)膜癌患者癌組織CRNDE高表達(dá)組(41/59,69.49%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.079,P<0.05)。見圖1～3。

圖1 子宮內(nèi)膜癌患者癌組織HOXA-AS2表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

圖2 子宮內(nèi)膜癌患者癌組織FOXD2-AS1表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

圖3 子宮內(nèi)膜癌患者癌組織CRNDE表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

2.5多因素Cox回歸分析影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的相關(guān)因素 以子宮內(nèi)膜癌患者3年內(nèi)是否死亡為因變量(是=1,否=0),以癌組織HOXA-AS2(高表達(dá)=1,低表達(dá)=0)、癌組織FOXD2-AS1(高表達(dá)=1,低表達(dá)=0)、癌組織CRNDE(高表達(dá)=1,低表達(dá)=0)為自變量進(jìn)行多因素Cox回歸分析,結(jié)果顯示,癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE是子宮內(nèi)膜癌患者死亡的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表4。

表4 多因素Cox回歸分析子宮內(nèi)膜癌影響患者預(yù)后的相關(guān)因素

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)于子宮內(nèi)膜上皮的惡性腫瘤疾病,據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,其發(fā)病率約占女性所有惡性腫瘤的8%,絕經(jīng)后婦女是子宮內(nèi)膜癌的高發(fā)人群[12]。目前常采用子宮內(nèi)膜活檢配合影像學(xué)檢查對(duì)其進(jìn)行診斷,但此操作過程常對(duì)患者造成創(chuàng)傷及痛苦[13],因此尋找簡單、便捷且具有較高準(zhǔn)確性的診斷指標(biāo)具有重要意義。血清腫瘤標(biāo)志物檢測由于具有創(chuàng)傷小、操作簡便、花費(fèi)低等優(yōu)勢,成為了近年來的研究熱點(diǎn),常將其用于惡性腫瘤的早期診斷及預(yù)后評(píng)估[14]。基于此,本研究主要測定子宮內(nèi)膜癌的癌組織中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE相對(duì)表達(dá)水平,分析三者與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。HOXA-AS2在胃癌、胰腺癌、乳腺癌等癌組織中均呈現(xiàn)異常表達(dá)。謝德玲等[15]報(bào)道,下調(diào)HOXA-AS2能起到抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移的作用。本研究中,子宮內(nèi)膜癌的癌組織中HOXA-AS2表達(dá)水平高于癌旁組織。陳升陽等[16]研究結(jié)果顯示,在胰腺癌組織中HOXA-AS2相對(duì)表達(dá)水平高于癌旁組織,這與本研究結(jié)果一致。有學(xué)者推測HOXA-AS2主要是通過調(diào)控信號(hào)軸或通路來影響惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲過程,進(jìn)而影響惡性腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展及患者的預(yù)后狀態(tài)[17-18],此結(jié)果提示HOXA-AS2相對(duì)表達(dá)水平的升高能夠促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生,可能能夠作為預(yù)測子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后狀態(tài)的特異性指標(biāo)。FOXD2-AS1和CRNDE也與癌癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[19-20],本研究結(jié)果顯示,子宮內(nèi)膜癌的癌組織FOXD2-AS1和CRNDE相對(duì)表達(dá)水平均高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。李敏等[21]研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌組織FOXD2-AS1表達(dá)水平較正常組織升高,高峰[22]發(fā)現(xiàn),CRNDE與胰腺癌細(xì)胞的增殖、遷移有關(guān),這些報(bào)道結(jié)果均與本研究結(jié)果一致。結(jié)合相關(guān)性分析結(jié)果來看,HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE三者均對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生起到促進(jìn)作用。這可能是由于lncRNA HOXA-AS2、FOXD2-AS1及CRNDE能夠通過調(diào)控細(xì)胞的生長周期,對(duì)基因的轉(zhuǎn)錄起到促進(jìn)或抑制的作用,同時(shí)還能夠介導(dǎo)染色質(zhì)間的相互作用,對(duì)表觀遺傳進(jìn)行修飾,進(jìn)而達(dá)到影響腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的目的,并且LncRNAs的異常表達(dá)還能夠影響機(jī)體的腫瘤免疫及耐藥性,進(jìn)而對(duì)治療效果及患者的預(yù)后狀態(tài)產(chǎn)生影響[23]。本研究進(jìn)一步分析HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系,結(jié)果顯示HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE高表達(dá)組中FIGO分期為Ⅲ+Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為深層、低分化的患者所占比例高于低表達(dá)組,這表明HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE不僅與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關(guān),還能夠通過促使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度增加等,促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌發(fā)展。最后采用Kaplan-Meier法分析子宮內(nèi)膜癌的癌組織HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系,結(jié)果顯示HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE低表達(dá)患者3年生存率均高于高表達(dá)患者,并且HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE是影響子宮內(nèi)膜癌患者死亡的危險(xiǎn)因素,提示臨床檢測子宮內(nèi)膜癌的癌組織中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE表達(dá)水平,對(duì)患者預(yù)后具有重要意義。但是由于本研究取樣范圍較為單一,樣本量較少,結(jié)果可能存在一定偏倚,而且僅對(duì)子宮內(nèi)膜癌的癌組織及癌旁組織中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE進(jìn)行了定量分析,未進(jìn)行免疫組化染色及圖像觀察,后續(xù)會(huì)繼續(xù)增加樣本量進(jìn)行深入探究,進(jìn)一步驗(yàn)證本研究結(jié)果。本研究結(jié)果顯示,子宮內(nèi)膜癌的癌組織中HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE的表達(dá)與患者臨床病理特征及預(yù)后密切相關(guān)。然而,本研究納入的樣本量較少,后續(xù)仍需增加樣本量對(duì)本研究結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,且HOXA-AS2、FOXD2-AS1、CRNDE參與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。