人乳頭瘤病毒感染情況、陰道微環(huán)境指標與宮頸病變的相關性分析*

張林光,劉亞麗,董 濤

秦皇島市第一醫(yī)院體檢中心,河北秦皇島 066000

在過去的30年,由于國家宮頸癌篩查計劃的引入,高資源國家宮頸癌發(fā)病率一直在不斷下降。相比之下,在資源匱乏的國家,由于缺乏完善的篩查計劃,以及早期篩查覆蓋率較低,宮頸癌仍然是一個嚴重的健康問題。目前,我國宮頸癌的防治工作面臨嚴峻挑戰(zhàn),篩查覆蓋率也處于較低水平[1]。宮頸癌的主要原因被認為是人乳頭瘤病毒(HPV)持續(xù)感染,在已經(jīng)鑒定出的200多種HPV基因型中只有一小部分致癌或可能致癌,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型。根據(jù)HPV的感染型別和數(shù)目,可將其分為單一感染和多重感染。不同人感染HPV后的反應情況不同,大多數(shù)感染是短暫的,可以在免疫系統(tǒng)的攻擊下自行消散,而少數(shù)患者會出現(xiàn)HPV持續(xù)性感染狀態(tài),且隨著宮頸病變嚴重程度增加HPV轉陰的概率越低[2]。陰道是與外界相通的開放性通道,正常情況下乳酸桿菌作為優(yōu)勢菌寄居其中,陰道微環(huán)境失調會使優(yōu)勢菌群大量減少,導致宮頸生理及病理變化,因而,陰道微環(huán)境與宮頸病變的發(fā)生和發(fā)展可能存在密切關系[3-5]。本研究從HPV感染情況和陰道微環(huán)境改變2個方面對宮頸病變進行研究,現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2022年1月至2023年4月本院收治的307例宮頸病變患者作為研究對象,按照其病理檢查和液基細胞學檢查(TCT)結果分為低級別上皮內瘤變(LSIL)組169例、高級別上皮內瘤變(HSIL)組97例和宮頸癌組(SCC)41例;另選取同期本院200例TCT結果正常無宮頸病變的健康體檢者作為對照組。納入標準:(1)年齡20～70歲,均有性生活史且處于非孕期;(2)24 h內無性交、盆浴和陰道放藥史;(3)無其他惡性腫瘤;(4)具備完整的病歷資料且可供查閱。排除標準:(1)伴有嚴重肝、腎功能障礙;(2)合并其他婦科疾病;(3)孕期或哺乳期女性。所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審核批準(2023KZ054)。

1.2方法

1.2.1陰道微環(huán)境檢測 檢測方法:(1)采集標本,暴露宮頸,采用聚維酮碘消毒外陰,以干棉簽從陰道上1/3側壁刮取分泌物,置于試管內;(2)將試劑盒(青島華晶生物技術有限公司)于2～8 ℃環(huán)境取出,待恢復至室溫后將反應板置于卡片盒中;(3)取樣品管,加稀釋液6～8滴(約300 μL),充分涮洗后輕輕捏壓試管壁,進而將棉簽拭子吸附的液體盡量擠出,棄棉簽,得樣品液,將其按順序放置標本盤中,按儀器操作規(guī)則上機檢測。檢測指標:(1)干化學檢測,包括酸堿度(pH,范圍為3.8～5.0,顏色由橘黃色、綠色至藍色逐漸加深)、過氧化氫(H2O2,陰性為紅色或紫紅色,陽性為無色或近無色,弱陽性為淡粉色)、白細胞酯酶(LE,陰性為無色,陽性為藍色或深藍色,弱陽性為淺藍色);(2)有形成分檢測,包括乳酸桿菌樣菌、上皮細胞、白細胞、雜菌。評判標準:pH≤4.5為正常,>4.5為異常;H2O2陽性為正常,陰性為異常;LE陰性或弱陽性為正常,陽性為異常;陰道清潔度Ⅰ°～Ⅱ°為正常,Ⅲ°～Ⅳ°為異常(Ⅰ°:乳酸桿菌樣菌++++,上皮細胞++++,白細胞0～5/HP,雜菌陰性;Ⅱ°:乳酸桿菌樣菌++,上皮細胞++,白細胞5～15/HP,雜菌陰性;Ⅲ°:乳酸桿菌樣菌陰性,上皮細胞陰性,白細胞15～30/HP,雜菌++;Ⅳ°:乳酸桿菌樣菌陰性,上皮細胞陰性,白細胞>30/HP,雜菌++++)。評判標準參考《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第4版中的相關標準。

1.2.2HPV分型檢測 (1)采集標本,充分暴露宮頸,將標本刷在子宮頸和外口順時針旋轉15～20周,取材后置入細胞保存液瓶中,送檢進行宮頸HPV檢測;(2)采用PCR體外擴增和DNA反向點雜交相結合的基因檢測技術,依據(jù)雜交信號判斷是否有HPV基因存在。試劑盒購自艾康生物技術(杭州)有限公司,能夠檢測25種HPV基因型,包括15種高危型:HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、69、73型;3種疑似高危型:HPV26、53、66型;7種低危型:6、11、40、43、44、81、83型。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析處理。計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示,組間比較采用χ2檢驗;采用Spearman相關分析宮頸病變嚴重程度與年齡的相關性;采用多因素Logistic回歸分析發(fā)生宮頸病變的影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1各組年齡分布情況比較 各組年齡分布情況比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),對照組>30～40歲年齡段分布最高(40.00%),LSIL組>30～40年齡段患病率最高(34.91%),HSIL組>40～50歲年齡段患病率最高(31.96%),SCC組>40～50歲年齡段患病率最高(34.15%)。見表1。

表1 各組年齡分布情況比較[n(%)]

2.2宮頸病變嚴重程度與年齡的相關性 Spearman相關分析結果顯示,宮頸病變嚴重程度與年齡呈正相關(r=0.306,P<0.05)。

2.3HPV感染情況比較 在所研究樣本中,HPV感染型別分布以高危型為主,其中前4位分別是HPV16、52、58、53型。HPV多重感染包括高危型與高危型混合感染、高危型與低危型混合感染和低危型與低危型混合感染,其中以高危型混合其他型別感染為主。HSIL組HPV多重感染率為37.11%(36/97),SCC組為34.15%(14/41),LSIL組為24.85%(42/169),對照組為10.50%(21/200),各組HPV多重感染率比較,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=8.542,P=0.036)。LSIL組、HSIL組和SCC組HPV多重感染率均高于對照組,HSIL組和SCC組均高于LSIL組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05);SCC組HPV多重感染率與HSIL組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.4各組陰道微環(huán)境指標異常分布情況比較 陰道pH、H2O2、LE異常比例均為SCC組>HSIL組>LSIL組>對照組,且SCC組、LSIL組和HSIL組與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。陰道清潔度異常比例為SCC組>HSIL組>LSIL組>對照組,LSIL組陰道清潔度異常比例與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);HSIL和SCC組陰道清潔度異常比例與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組陰道微環(huán)境指標異常分布情況比較[n(%)]

2.5發(fā)生宮頸病變的多因素Logistic回歸分析 以是否發(fā)生宮頸病變(未發(fā)生=0,發(fā)生=1)作為因變量,以pH(≤4.5=0,>4.5=1)、H2O2(陰性=0,陽性=1)、LE(陰性或弱陽性=0,陽性=1)、陰道清潔度(Ⅰ°～Ⅱ°=0,Ⅲ°～Ⅳ°=1)作為自變量,進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,pH>4.5、H2O2陰性、LE陽性、陰道清潔度為Ⅲ°～Ⅳ°為發(fā)生宮頸病變的危險因素(P<0.05)。見表3。

3 討 論

近年來,我國采取了各項措施積極推進宮頸癌的篩查和預防,但并未使其發(fā)病率和病死率降到預期,且年齡分布也更趨于年輕化[6],所以,對影響其發(fā)生和發(fā)展因素的研究顯得尤為重要。本研究以307例宮頸病變患者作為研究對象,從年齡、HPV感染情況、陰道微環(huán)境改變3個方面進行分析,研究結果顯示,不同級別宮頸病變分布在不同年齡段,且通過Spearman相關分析可以看出,隨著年齡增長宮頸病變嚴重程度有增加趨勢。MARK等[7]研究結果表明,宮頸惡性病變患者年齡高峰期一般被認為是35～55歲。在DUAN等[8]的研究中,被確診為HPV相關的宮頸癌女性,有51.1%處于40～54歲,與本研究結果基本一致。

HPV感染在宮頸腫瘤及其前驅病變的病因學中起核心作用。本研究結果顯示,HPV感染型別分布以高危型為主,尤其以16、52、58、53型多見。國際癌癥研究協(xié)會的研究結果顯示,世界范圍內最常見的HPV感染亞型為16、18型[9],而我國以16、18、52、58、39型常見[10],其中長江以北地區(qū)的宮頸病變患者以HPV16、58、52型感染較常見[11],與本研究結果一致。有學者認為,HPV多重感染與宮頸病變進展有關[12-15],但也有學者指出二者相關性不明顯[16]。本研究結果顯示,HSIL組和SCC組HPV多重感染率均高于LSIL組和對照組,但這HSIL組和SCC組之間差異不明顯,可能需要擴大樣本量進一步分析。

本研究結果顯示,LSIL組、HSIL組和SCC組陰道pH、H2O2、LE及清潔度異常比例均高于對照組,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),與安娜等[17]研究結果一致。多因素Logistic回歸分析結果顯示,pH>4.5、H2O2陰性、LE陽性、陰道清潔度為Ⅲ°～Ⅳ°為發(fā)生宮頸病變的危險因素(P<0.05)。正常情況下陰道微環(huán)境呈酸性,pH為3.8～4.4,pH升高會促進雜菌繁殖,隨著陰道自凈能力變差,陰道清潔度變差,提升了HPV的易感性;同樣,在正常情況下乳酸桿菌與雜菌競爭營養(yǎng)與黏附作用,當陰道微生物群發(fā)生紊亂時也會使酸性環(huán)境發(fā)生改變,pH升高。H2O2情況與朱若曦等[18]研究結果一致,原因可能為乳酸桿菌為陰道內環(huán)境的優(yōu)勢菌群,可分泌H2O2等抑制雜菌生長,H2O2水平正常往往提示陰道內乳酸桿菌數(shù)量和活力處于正常狀態(tài),相反則可能提示菌群失調[19],通過檢測陰道微環(huán)境中H2O2可以反映乳酸桿菌的數(shù)量和功能。有研究表明,HPV感染者LE陽性率高于HPV陰性者[20]。LE為白細胞的細胞內酶,正常機體LE呈陰性,當有炎癥性改變時在吞噬病原微生物過程中導致白細胞發(fā)生破壞從而釋放LE。因此,陰道微環(huán)境改變不僅能增加HPV感染的風險,而且在感染后發(fā)展為宮頸癌的過程中起到推波助瀾的作用。

本研究將宮頸病變按病變嚴重程度分為LSIL、HSIL、SCC 3個組,以無宮頸病變的健康人群作為對照組,更細致、全面地分析了宮頸病變中HPV感染情況差異與陰道微環(huán)境的改變,期待為疾病的預防和臨床治療提供依據(jù)。