腦膠質瘤患者血清lncRNA NEAT1表達與放療敏感性的關系

董正航 李洋洋 高亞楠

腦膠質瘤是大腦和脊髓膠質細胞癌變所產生的最常見的原發性顱內惡性腫瘤。據流行病學調查顯示[1],腦膠質瘤發病率占顱內腫瘤的35%～60%,且近年來呈現逐年升高的趨勢。現階段臨床上治療腦膠質瘤主要以手術切除為主,同時配合放、化療的綜合性治療來改善患者疾病癥狀。但臨床研究發現,即使腫瘤直徑、腫瘤數目等相同,癌癥患者放射治療仍存在較大差異,因而在放療前預測放療敏感性對臨床調整治療方案具有重要意義[2]。長鏈非編碼核糖核酸(ong noncoding RNA,lncRNA)是長度大于200堿基的非編碼RNA,最初被認為不具有生物學活性。但也有研究表明lncRNA在基因表達、核內運輸、細胞凋亡過程發揮重要作用[3]。核富集轉錄體(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)通過RNA聚合酶轉錄獲得。近年來,有較多研究指出lncRNA NEAT1與胃癌[4]、卵巢癌[5]、肝癌[6]等多種疾病的發生發展相關。基于此,本研究旨在探討腦膠質瘤患者血清lnc RNA NEAT1表達與放療敏感性的關系,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2019年9月至2022年9月收治的96例腦膠質瘤患者作為研究對象,入院患者年齡32～64歲,平均年齡(46.25±10.57)歲;男性44例,女性52例;體重指數19～25 kg/m2,平均體重指數(21.65±3.15)19～25 kg/m2;病理分級Ⅰ～Ⅱ級36例,Ⅲ～Ⅳ級60例;腫瘤直徑<4 cm 36例,≥4 cm 60例。納入標準:①符合《腦膠質瘤診療規范》[7]中診斷標準;②經病理檢查確診;③術前均未接受放療、化療等抗癌治療;④功能狀態評分>70分;⑤臨床資料完整。排除標準:①合并糖尿病等慢性疾病;②放療不耐受;③肝、腎功能障礙;④合并其他惡性腫瘤;⑤合并艾滋病等免疫缺陷疾病。本研究經我院倫理委員審核批準通過。

1.2 放療方法

通過CT斷層掃描采集解剖圖像,在相同的體位下融合MRI圖像,將重要器官和腫瘤靶區進行勾畫。使用磁共振T2 flair勾畫出大體腫瘤;GTV+2.5 cm,病灶靶體積外放2.5 cm,包括腫瘤周圍亞臨床病變;亞臨床病變外擴,CTV+0.3～0.5 cm。采用瑞典Elekta公司生產的Precise 1120直線加速器以220 cGy/min的劑量率對患者進行6MV X線治療,單次劑量1.8～2.2 Gy,隨后縮野至GTV+1.5 cm,1次/天,每周5次,連續治療4周。

1.3 觀察指標

(1)收集患者臨床資料,包括年齡、性別、體質量指數、病理分級、腫瘤直徑、腫瘤位置、腫瘤數目。(2)提取RNA及實時檢測NEAT1水平:采取Trizol法提取組織總RNA,在提取過程中保證吸光度值在1.9～2.0范圍。提取1 μl總RNA,根據逆轉錄試劑盒說明書進行逆轉錄為cDNA,完成后采用PCR檢測方法檢測NEAT1水平。將CAPDH基因作為參考基因,探針及引物序列:NEAT1引物正向5'-T TGGCTAGCTCAGGGCTTCAG-3',反向5'-TCTCCTTGCCAAGCTTCCTTC-3',CAPDH引物正向:5'-TGTTGCCATCAATGACCCCTT-3',反向 5'-CTC-CACGACGTACTCAGCG-3'。采用2-△△Ct法進行計算,得到NEAT1水平,試驗步驟至少重復3次。(3)敏感性參照WTO的RECIST標準評估[8]:①靶病灶消失,且持續時間>4周為完全緩解;②靶病灶體積縮小超過50%,且持續時間>4周為部分緩解;③靶病灶體積縮小<50%或增大<25%為疾病穩定;④靶病灶體積增大>25%,或出現新病灶為疾病進展。放療敏感為完全緩解+部分緩解,放療耐受為疾病穩定+疾病進展。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 2組標準根治術放療效果

96例腦膠質瘤患者中放療敏感78例,放療耐受18例,放療敏感率81.25%。

2.2 2組臨床資料比較

放療敏感組病理分級Ⅰ～Ⅱ級患者所占比高于放療耐受組(P<0.05);2組年齡、性別、體重指數、腫瘤直徑、腫瘤位置、腫瘤數目比較,無顯著差異(P>0.05),見表1。

表1 2組臨床資料比較

2.3 2組血清lnc RNA NEAT1水平比較

放療敏感組血清lnc RNA NEAT1為(2.04±0.69)、放療耐受組為(3.21±1.05),放療敏感組血清lnc RNA NEAT1低于放療耐受組,差異具有統計學意義(t=5.828,P<0.05)。見圖1。

圖1 2組血清lnc RNA NEAT1水平比較

2.4 腦膠質瘤發生放療耐受的多因素Logistic回歸分析

以放療是否敏感為因變量,以病理分級、血清lnc RNA NEAT1作為自變量,進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示血清lnc RNA NEAT1是腦膠質瘤患者放療耐受的影響因素(P<0.05),見表2。

表2 腦膠質瘤發生放療耐受的多因素Logistic回歸分析

3 討論

腦膠質瘤是34歲以下腫瘤患者的第2位死亡原因,是35～54歲患者的第3位死亡原因[9]。腦膠質瘤偏良性者生長緩慢,病程較長,但惡性者腫瘤體生長快,病程短,多數患者在確診1年內死亡,具有發病率高、死亡率高、復發率高及治愈率低的特點[10]。目前,腦膠質瘤以手術治療為主,但由于生長位置及侵襲性生長的特殊性,即使術中達到影像學全切除,但仍有部分腫瘤細胞殘余,造成預后較差,大部分患者需接受放射治療,但由于癌細胞的放射抗拒性會降低放療敏感性,導致治療失敗[11]。因此,在放療前有效評估放療敏感性對臨床治療方案的調整尤為重要。

采用精準放療治療腦膠質瘤患者放療敏感率為75%[12]。本組資料顯示,96例腦膠質瘤患者中放療敏感78例,放療敏感率81.25%,略高于上述文獻報道,可能是與本研究存在病理分級Ⅰ～Ⅱ級患者有關。目前,癌細胞的放射抗拒機制尚不明確,多數癌細胞處于不同周期,對放療敏感性也存在差異。WHO將腦膠質瘤Ⅰ～Ⅱ級為低等級膠質瘤,若早期能得到有效診斷和治療,預后相對較好;Ⅲ～Ⅳ級為高等級膠質瘤,生長速度快,預后較差[13]。 有研究發現[14],對于低級別的腦膠質瘤患者,盡可能全切腫瘤,術后輔以放療,其無進展生存時間及生活質量會得到顯著的提升。同時還有研究指出[15],病理分級是影響惡性腦膠質瘤患者術后的危險因素。本研究結果顯示,放療敏感組病理分級Ⅰ～Ⅱ級所占比均高于放療耐受組,表明低等級膠質瘤患者對放療較為敏感。lnc RNA屬于長鏈非編碼RNA,余永佳等[16]學者提出,lncRNA是一種新發現的RNA轉錄本,一些lncRNA異常表達與腦膠質瘤的復發相關,參與了腦膠質瘤的發生與發展。lncRNA NEAT1是核旁斑重要結構的組織部分,通過靶向上調下游癌基因(如RTCB)表達,促進腫瘤細胞的生長及遷移。同時還有學者提出[17],lncRNA NEAT1在人腦膠質瘤中表達水平升高,其表達水平與預后顯著相關,這一研究結果的提出為腦膠質瘤患者血清lncRNA NEAT1與放療敏感性的關系奠定了基礎。本研究結果顯示,放療敏感組血清lnc RNA NEAT1低于放療耐受組,提示血清lnc RNA NEAT1表達升高可能導致患者放療敏感性降低。Xufei F等[18]研究表明,血清lnc RNA NEAT1受到微小RNA-18a-5p在轉錄后水平上的抑制,RNA-18a-5p表達水平下調,使血清lnc RNA NEAT1穩定性增高,從而引起其水平的升高,提示腫瘤持續性生長,發生復發的風險較高,因而臨床療效較差,患者表現出對放療不敏感。我們進一步分析了腦膠質瘤患者血清lnc RNA NEAT1與放療敏感的關系,多因素Logistic回歸分析結果顯示,血清lnc RNA NEAT1高表達是腦膠質瘤患者放療耐受的影響因素,通過檢測血清lnc RNA NEAT1水平表達可為臨床腦膠質瘤早期制定放療方案提供參考。

綜上所述,腦膠質瘤患者血清lnc RNA NEAT1表達與放療敏感性密切相關,血清lnc RNA NEAT1高表達是腦膠質瘤患者發生放療耐受的危險因素。