2021年上海市同型半胱氨酸項目正確度驗證結果分析

金中淦 居 漪 張素潔

（上海市臨床檢驗中心，上海 200126）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）每增加5 μmol/L，缺血性心臟病的風險會增加84%[1]。有研究發現，Hcy是腦卒中的獨立危險因素，高于10.50 μmol/L人群的卒中風險可增加4.2倍[2]；Hcy檢測結果準確與否，關系著臨床對患者病情的正確判斷。相關標準[3-4]要求用參考測量程序或參考物質驗證常規檢驗結果的準確性，實驗室應制定適宜的正確度驗證計劃，采用有證參考物質、正確度控制品等進行正確度驗證，或與參考方法進行結果比對，從而保證檢驗結果的計量學溯源性。通過參考測量程序賦值的正確度質控品，可將臨床實驗室的結果溯源到國際單位，實現臨床實驗室結果可比[5-6]。2021年，上海市臨床檢驗中心第1次開展Hcy正確度驗證計劃。本研究通過分析此次正確度驗證計劃數據，了解上海市臨床實驗室Hcy 檢驗質量。

1 材料和方法

1.1 樣本來源

收集上海中醫藥大學附屬龍華醫院無溶血和脂血臨床檢驗剩余新鮮血清樣本，離心、過濾后制備成高、低2個濃度水平正確度調查品，分別編號為HCY2021-A、HCY2021-B，每支0.45 mL。根據《能力驗證樣品均勻性和穩定性評價指南》[7]評估調查品的均一性和穩定性。本次Hcy正確度驗證計劃參加實驗室共87家，包括醫療機構臨床實驗室和部分企業醫學實驗室。

1.2 標準物質

1）參考方法賦值時采用的有證參考物質為美國國家標準技術研究院NIST SRM 1950和中國計量科學研究院GBW 09863，均于-70 ℃保存，室溫平衡后使用。2）Hcy純品物質購自上海甄準生物公司，純度為99.8%，不確定度為±2%，為參考測量程序賦值過程中使用的校準品；D4-Hcy標記物購自加拿大C/D/N ISOTopes公司，同位素豐度為98.6%。

1.3 儀器和試劑

API 5000三重四極桿質譜儀（美國AB sciex公司），Agilent 1290超高效液相色譜儀（美國Agilent公司），XP205天平（德國梅特勒-托利多公司），Thermo Reacti-Therm氮吹儀（美國賽默飛世爾科技公司）。乙腈（LC/MS級）、三氟乙酸等購自美國Fisher公司。

1.4 方法

1.4.1 正確度調查品的發放和數據回報

采用冷鏈（干冰）將正確度調查品送至87家參評實驗室，實驗室收到調查品（每個濃度水平各3支）后立即存放在-20 ℃冰箱中，按照各實驗室的標準操作規程測定，每個濃度調查品重復測定3次，連測3 d，共需回報18個數據。通過上海市臨床檢驗中心室間質量評價管理平臺回報檢測方法（原理）、試劑、儀器、結果等信息。

1.4.2 參考測量程序賦值

用上海市臨床檢驗中心參考實驗自建的同位素稀釋液相色譜串聯質譜參考測量程序[8]進行賦值。校準物、有證參考物質、樣本均進行3個批次重復前處理，每批次重復測定9次，以均值作為最終有效數據。

1.5 統計學方法和評價標準

通過上海市臨床檢驗中心室間質量評價管理平臺進行數據的統計處理，以樣本均值為統計值，分析各參評實驗室測定結果與靶值的偏移、實驗室內變異系數（coefficient of variation，CV）和按不同試劑分組后的偏移、實驗室內CV。以1/2允許總誤差（allowable total error，TEa）（≤10%）評價回報結果的合格率。

2 結果

2.1 調查品均勻性和穩定性

分裝完畢后，分別隨機挑選2個濃度水平調查品中的10支進行均勻性檢測，以s≤0.3σ為評價標準，HCY2021-A、HCY2021-B的不均勻s分別為0.12、0.16 μmol/L；正確度驗證調查品運輸過程均有溫度監控，評估HCY2021-A、HCY2021-B 2個濃度水平調查品-20 ℃存放1個月的穩定性檢驗結果分別為0.16、0.11 μmol/L，均低于相應0.3σ對應的0.37和0.62 μmol/L，滿足相關指南[7]對能力驗證樣品均勻性和穩定性的要求。

2.2 參考測量程序賦值結果

HCY2021-A和HCY2021-B參考測量程序賦值結果分別為（10.82±0.31）和（19.16±0.48）μmol/L。每個分析批同時測定了NIST SRM 1950（8.50±0.20）μmol/L，GBW 09863（17.9±0.7）μmol/L，測定結果均在靶值±不確定度范圍內。

2.3 參評實驗室回報結果分析

2.3.1 不同實驗室數據與靶值的相對偏移和實驗室內CV

2021HCY-A和2021HCY-B測定結果與靶值的偏移分別為-20.21%～31.39%和-29.66%～23.93%。2021HCY-A測定結果實驗室內CV為0.28%～9.44%，有14.9%（13/87）的實驗室CV＞1/3 TEa，有34.5%（30/87）的實驗室CV＞1/4 TEa；2021HCY-B測定結果實驗室內CV為0.25%～10.69%，有6.9%（6/87）的實驗室CV＞1/3 TEa，16.1%（14/87）的實驗室CV＞1/4 TEa。見圖1、圖2。

圖1 單個實驗室檢測結果與靶值的偏移

圖2 單個實驗室檢測結果的實驗室內CV

2.3.2 不同試劑組的偏移和組內不精密度

按試劑進行分組，2021HCY-A、2021HCY-B測定結果與靶值的偏移分別為-25.33%～20.27%、-18.41%～23.00%；見圖3。有20.59%（7/34）的試劑2個濃度調查品檢測結果與靶值的偏移均＞10%。試劑品牌超過5家的實驗室檢測結果顯示，同一品牌實驗室間CV為1.93%～12.91%，與靶值的偏移為1.01%～11.61%；見表1。

表1 不同試劑品牌檢測均值與靶值的偏移和CV

圖3 不同試劑組檢測結果均值與靶值的偏移

2.3.3 參評實驗室合格率

參評實驗室2個濃度水平調查品合格率分別為62.07%、65.52%。見表2。

表2 正確度調查合格率

3 討論

Hcy水平升高與多種疾病的發生、發展相關，如心腦血管疾病、腎臟疾病、老年癡呆、認知障礙、高血壓、糖尿病[9-10]。一項基于2018年我國腦卒中高危人群篩查項目的研究發現，我國≥40歲的居民中，近1.8億人有高Hcy血癥，高血壓伴高Hcy血癥者發生腦卒中的風險增加75.2%[10-11]。臨床研究的結論是基于實驗室的檢測結果，而臨床實驗室在采用不同測量原理、測量方法的商品化試劑盒測量相同檢驗指標時，不可避免地會帶來檢驗結果可比性問題。目前，Hcy檢測方法有乳膠增強散射比濁法、酶聯免疫法、熒光偏振免疫法、化學發光免疫分析法、色譜質譜法、循環酶法，臨床使用最廣泛的是循環酶法。因此，Hcy 的檢測質量值得關注。

相關實驗室質量管理文件和我國政府部門發布的檢驗結果互認的相關文件均要求臨床實驗室建立適當方法解決臨床檢驗結果的溯源性問題，其方法之一就是參加正確度驗證計劃。正確度驗證計劃相對常規室間質量評價而言是比較理想的一種質量評價方法，室間質量評價質控品制備時會加入一定的穩定劑，可能會存在一定的基質效應；正確度驗證計劃使用的調查品非常接近臨床樣本，分析靶值由參考測量程序測定，不易受基質效應、方法特異性等因素影響，且實驗室多次重復測定，可不考慮隨機誤差的影響。本實驗室建立的Hcy參考測量程序，近幾年參加國家參考實驗室網絡比對，均取得較好的成績，為開展正確度驗證計劃工作奠定了良好基礎。

本研究通過分析上海市臨床檢驗中心第1次Hcy正確度驗證計劃參評實驗室回報數據，發現2021HCY-A、2021HCY-B測定結果與靶值的偏移分別為-20.21%～31.39%、-29.66%～23.93%，總體情況均不理想。2011-2016年全國Hcy室內質量控制的調查結果顯示，如以1/3 TEa為標準，實驗室的通過率低于80%；以1/4 TEa為標準，實驗室通過率僅為52.9%～58.7%，表明Hcy項目正確度并不令人滿意[9]。本研究結果表明，就精密度而言，2021HCY-A測定結果實驗室內CV為0.28%～9.44%，有14.9%的實驗室CV＞1/3 TEa，有34.5%的實驗室CV＞1/4 TEa；2021HCY-B測定結果實驗室內CV為0.25%～10.69%，有6.9%的實驗室CV＞1/3 TEa，16.1%的實驗室CV＞1/4 TEa，精密度優于全國水平[12]。

本研究發現，8 7 家實驗室使用了3 4 種試劑，不同試劑品牌的檢測結果差異較大，2021HCY-A、2021HCY-B測定結果與靶值的偏移分別為-25.33%～20.27%、-18.41%～23.00%，有20.59%的試劑2個濃度水平調查品檢測結果與靶值的偏移均＞10%，正確度值得關注。本研究分析了使用同一品牌試劑超過5家的實驗室數據，發現用品牌3的實驗室均值與靶值的偏移＜10%，但是實驗室間CV均＞10%，表明某些品牌試劑組組內CV較大，后續在檢測結果一致性方面需要加強，只有提高了檢驗結果的一致性，正確度才有意義。值得注意的是，試劑品牌1實驗室均值與靶值的偏移、實驗室間CV＜5%，結果的正確度和試劑性能穩定性均表現較好。

本研究以參考方法定值結果為靶值，以1/2 TEa（≤10%）為評價標準，2個濃度水平調查品臨床實驗室的合格率分別為62.07%、65.52%，提示上海市Hcy項目正確度水平還需改進。實驗室加強全面質量管理是提高檢驗結果準確性的必要條件。本次調查中，部分實驗室測量結果的精密度較差，這可能會導致部分測量結果不能真實體現實驗室測量結果的正確度。保證正確度的前提是實驗室方法要有較好的精密度，解決了精密度問題后，實驗室應逐一排查，發現問題并加以改進，如校準品是否具有溯源性、校準品的定值是否可靠、檢驗方法的特異性，試劑的有效期、人員操作、儀器設備問題。另外，實驗室應盡可能選用經驗證、有溯源性的配套校準品，確保其使用的校準品可追溯到最高水平，以保證檢驗結果的準確、可靠。本研究使用無基質效應的血清樣本，可以更準確地反映不同系統間檢測結果的差異，為臨床實驗室提供參考[13]。為了提高Hcy檢驗結果的準確性和可比性，仍需要試劑廠商、臨床實驗室和質量監督管理機構的共同努力。

綜上所述，通過本次正確度驗證計劃參評實驗室回報數據可以看出，上海市臨床實驗室Hcy項目檢驗正確度還有待改進。