曹 磊, 查天柱, 王利昕

(1烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院軟傷科, 烏魯木齊 830002; 2新疆醫(yī)科大學(xué)第七附屬醫(yī)院康復(fù)科, 烏魯木齊 830000)

肌筋膜疼痛綜合征(Myofascial pain syndrome, MPS)又稱為肌筋膜炎,是臨床中最常見的軟組織疼痛性疾病之一,是指筋膜的病理性改變,與肌肉拉緊壓縮帶引起的局部骨骼肌損傷、缺血性反應(yīng)有關(guān),可以發(fā)生在全身各個部位,引起機(jī)體肌肉筋膜各種不適的表現(xiàn),比如疼痛、肌肉緊張或無力、肌肉痙攣、皮膚麻木、運(yùn)動障礙等[1]。查體觸摸疼痛部位時,有可能觸摸到較硬的腫塊或條索狀結(jié)節(jié),觸摸、按壓時可引起疼痛加重。肌筋膜是人體中連結(jié)肌肉和骨骼的結(jié)締組織,具有彈性、控制過度伸縮及保護(hù)肌肉骨骼的作用[2]。在肌肉過度使用或受到損傷容易發(fā)生牽拉、攣縮、痙攣等異常形態(tài)學(xué)改變,造成疼痛伴功能受限癥狀。肌筋膜損傷性的疼痛通常出現(xiàn)在頸部、肩部、背部和下肢等區(qū)域,如若長時間未合理治療可導(dǎo)致慢性疼痛而經(jīng)久難愈,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[3]。滯針原為針灸治療過程中的不良反應(yīng),是指進(jìn)針后或行針時針下感覺非常沉重、緊澀,甚至捻轉(zhuǎn)不動,進(jìn)退困難[4]。產(chǎn)生原因多由患者精神過度緊張或疼痛致局部肌肉用力或痙攣,留針時間過長,行針不當(dāng),向單一方向捻轉(zhuǎn)太過,以致肌肉組織纏繞針體所致[5]。肌筋膜疼痛綜合征是一種以存在肌筋膜扳機(jī)點(diǎn)為特征的局部肌肉疼痛綜合征,雖其病理生理機(jī)制尚不清楚,但肌筋膜扳機(jī)點(diǎn)多位于受累骨骼肌的條索或硬結(jié)上[6-7]。有研究[8]觀察到TNF-a、IL-6在MPS患者血清中及MTrPs部位細(xì)胞外增加,但沒有明確其位于肌細(xì)胞內(nèi)的變化。本研究采用肌筋膜疼痛綜合征大鼠模型,研究滯針對肌筋膜痛大鼠扳機(jī)點(diǎn)骨骼肌病理形態(tài)的影響,現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物SPF級健康SD雄性大鼠30只,6～8周齡,體重(225±25)g,由新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供(動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(新)2018-0002)。實(shí)驗(yàn)于新疆醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心SPF級動物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行(許可證號:SYXK(新)2018-0003),室溫(22±2)℃,相對濕度60%～80%,晝夜節(jié)律,自由進(jìn)食、飲水。

1.2 試劑舒泰50(法國維克公司);鹽酸賽拉嗪注射液注射液(圣達(dá)動物藥品有限公司);甲醛(上海麥克林生化有限公司);生理鹽水注射液(河南雙鶴華利藥業(yè)有限公司);磷酸鹽緩沖液、檸檬酸粉劑、蘇木素染液、DAB顯色試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司);免疫組化染色試劑盒、抗體稀釋液、中性樹膠(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);二甲苯、無水乙醇、H2O2(天津市富宇精細(xì)化工有限公司);Anti-IL-6 Antibody、Anti-TNF Antibody(武漢博士德生物有限公司)。

1.3 儀器DY15K型電子天平(上海菁海儀器有限公司);FA2004N型精密電子天平(上海菁海儀器有限公司);SF-TDL-5C型臺式低速離心機(jī)(上海菲恰爾分析儀器有限公司);DNP-9272型恒溫箱、DHG型恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 混合麻醉劑的配置 將舒泰50和鹽酸賽拉嗪注射液分別稀釋至5 mg/mL,按體積比4∶1混合,備用。

1.4.2 模型建立 取20只SD雄性大鼠仰臥固定,用自制打擊器(1.2 kg)從20 cm的高度自由下落,打擊大鼠右側(cè)股內(nèi)側(cè)肌,造成局部鈍挫傷。打擊接觸面積約為1 cm2,皮膚無破損,第2、3天將大鼠放置于-16°電動跑臺上進(jìn)行連續(xù)下坡跑(速度16 m/min)持續(xù)90 min,休息4 d,以此方法連續(xù)干預(yù)28 d,建立肌筋膜痛扳機(jī)點(diǎn)模型。模型建立標(biāo)準(zhǔn):(1)觸診局部有肌緊張帶或結(jié)節(jié)出現(xiàn);(2)股內(nèi)側(cè)肌病理HE染色有炎性浸潤、肌纖維收縮(攣縮)結(jié)節(jié)、纖維増生或肌纖維寬度不等現(xiàn)象。

1.4.3 分組與干預(yù) 將建模成功的20只大鼠隨機(jī)分為模型組和滯針組。模型組大鼠肌肉注射麻醉后固定于固定板上,不進(jìn)行干預(yù);滯針組大鼠肌肉注射麻醉后固定于固定板上,給予滯針(將針迅速刺入板機(jī)點(diǎn),達(dá)一定深度,然后將針穩(wěn)定于該處,用右手拇指向前、食指向后的力量,輕輕將針柄向同一方向捻轉(zhuǎn)3～5轉(zhuǎn),至肌肉纏針、針體不動,出現(xiàn)滯針現(xiàn)象)治療,每天1次,連續(xù)7 d。另取10只正常大鼠為對照組,肌肉注射麻醉后固定于固定板上,不進(jìn)行干預(yù)。

1.4.4 指標(biāo)的測定 (1)HE染色實(shí)驗(yàn):將各組大鼠取血后以脊髓脫臼法處死,解剖分離股內(nèi)側(cè)肌,在肌筋膜痛扳機(jī)點(diǎn)局部取下1 cm3的肌組織塊,用生理鹽水漂洗3次,投入40 g/L的多聚甲醛4℃下固定24 h。將固定好的組織常規(guī)脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,制成4 μm的切片,用蘇木精-伊紅染色,光學(xué)顯微鏡下觀察股內(nèi)側(cè)肌肌筋膜痛扳機(jī)點(diǎn)局部組織形態(tài)及病理變化。(2)免疫組化實(shí)驗(yàn):將各組大鼠取血后以脊髓脫臼法處死,解剖分離股內(nèi)側(cè)肌,在肌筋膜痛扳機(jī)點(diǎn)局部取下1 cm3的肌組織塊,用生理鹽水漂洗3次,投入40 g/L的多聚甲醛4℃下固定24 h。將固定好的組織常規(guī)脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,制成4 μm的切片,置于檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液(pH=6.0)中進(jìn)行抗原修復(fù),加入3%雙氧水溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,滴加3%BSA均勻覆蓋組織,室溫封閉30 min,加入一抗(Anti-IL-6 Antibody,1∶100)和二抗(Anti-TNF Antibody,1∶100),經(jīng)DAB顯色,蘇木素復(fù)染脫水封片,拍攝并觀察。結(jié)果參照文獻(xiàn)[9-10]的方法進(jìn)行評分:在光學(xué)顯微鏡下觀察組織切片,(1)按染色強(qiáng)度進(jìn)行評分(未著色計0分、淡黃色計1分、淺褐色計2分、深褐色計3分);按陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分(無陽性細(xì)胞計0分、1%～25%計1分、26%～50%計2分、51%～75%計3分、76%～100%計4分),將兩評分得分相乘進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

2.1 HE染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果對照組骨骼肌橫切面觀察可見肌細(xì)胞呈多邊形,細(xì)胞飽滿,細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則,細(xì)胞質(zhì)染色均勻;縱切面觀察可見肌纖維排列緊密、均勻,骨骼肌未見明顯異常。與對照組比較,模型組骨骼肌橫切面觀察可見肌細(xì)胞水腫,炎癥細(xì)胞浸潤,可見較多核固縮?？v切面觀察可見肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂,部分肌纖維扭曲、萎縮或斷裂,部分肌纖維之間界限模糊,部分肌纖維間隙增大,肌細(xì)胞水腫,可見較多核固縮,細(xì)胞質(zhì)染色不均,間質(zhì)散在較多炎細(xì)胞浸潤。與模型組相比,滯針組肌纖維紊亂程度降低,扭曲、萎縮或斷裂明顯減少,肌細(xì)胞水腫程度降低,核固縮及炎細(xì)胞浸潤減少,見圖1、2。

組名40×100×400×對照組模型組滯針組

組名40×100×400×對照組模型組滯針組

2.2 免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果與對照組比較,模型組和滯針組骨骼肌纖維IL-6及TNF-α蛋白陽性表達(dá)率均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,滯針組骨骼肌纖維IL-6及TNF-α蛋白陽性表達(dá)率均降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見圖3、4,表1。

表1 各組大鼠骨骼肌纖維IL-6及TNF-α蛋白陽性表達(dá)量評分比較 分)

組名40×100×400×對照組橫切縱切模型組橫切縱切滯針組橫切縱切

組名40×100×400×對照組橫切縱切模型組橫切縱切滯針組橫切縱切

3 討論

本研究大鼠查體時可觸及腫塊或條索樣結(jié)節(jié),多為局部多發(fā)肌細(xì)胞水腫,炎癥細(xì)胞浸潤,肌間隙變寬同時伴有肌纖維結(jié)構(gòu)紊亂,部分肌纖維扭曲、萎縮或斷裂。由于損傷及病理改變,局部亦可形成缺血性改變或循環(huán)障礙,進(jìn)一步出現(xiàn)缺血乏氧狀態(tài)[11]。本實(shí)驗(yàn)采用滯針手法,直接作用于損傷或病理改變組織,通過微觀擠壓、旋轉(zhuǎn)、穿刺,為正常組織中的修復(fù)因子、富氧血供進(jìn)入病理組織建立了通道,同時便于病理組織中的炎癥因子和疼痛因子循環(huán)代謝,為加速修復(fù)創(chuàng)造了條件。本研究鏡下可見滯針組肌纖維紊亂程度降低,扭曲、萎縮、斷裂明顯減少,肌細(xì)胞水腫程度降低,炎細(xì)胞浸潤減少。

滯針手法亦是一種創(chuàng)傷,通過改變肌肉纖維的微觀結(jié)構(gòu),糾正至其再平衡的同時再次激發(fā)創(chuàng)傷應(yīng)激反應(yīng),激發(fā)機(jī)體再修復(fù)過程,達(dá)到加速愈合的效果[12-14]。本研究通過人工讀片,以陽性細(xì)胞百分率和染色強(qiáng)度作為最終判定標(biāo)準(zhǔn),通過表達(dá)量評分比較可見,滯針治療手法對肌筋膜疼痛綜合征大鼠扳機(jī)點(diǎn)骨骼肌形態(tài)影響較大,可使骨骼肌纖維IL-6及TNF-α蛋白表達(dá)量顯著降低,為滯針治療肌筋膜疼痛綜合征的臨床研究提供科學(xué)依據(jù)。