平壩區鵝養殖場細菌感染情況調查

申茂恒,蒲 齡,田程程,代國滔,田宇杰,陳浩林*

（1.安順市動物衛生監督所,貴州 安順 561000；2.貴州省畜牧獸醫研究所,貴州 貴陽 550005）

平壩區位于貴州省中部地區，地勢平坦，水資源豐富，適合發展水禽產業，當地以平壩灰鵝、三花鵝、獅頭鵝等品種為主，逐步形成了養殖、加工、銷售的產業鏈［1］，成為該縣實現鄉村振興的重要產業。隨著肉鵝養殖密度的增加，免疫程序、消毒措施、糞污處理方式不當等因素，導致養殖場常見細菌如大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、魏氏梭菌、金黃色葡萄球菌等滋生，而前期對平壩區細菌感染情況的調查較少，導致養殖場盲目使用抗生素，病鵝產生細菌耐藥性，給養殖場細菌病的防控帶來極大困難。為平壩區養殖戶的細菌病防控提供理論依據，收集2021年平壩區不同養殖場發病鵝的組織樣品，開展細菌感染情況調查，明確平壩區細菌感染的感染率、不同細菌的分布情況等。

1 材料與方法

1.1 樣品收集

2021年從貴州省安順市平壩區采集76份發病鵝組織樣品，包括鵝的腦組織、肝臟、腸道等，樣品送至貴州省畜牧獸醫研究所畜禽疫病研究室進行病原的分離和鑒定。

1.2 主要試劑

TSA 固體培養基、TSB 液體培養基、麥康凱培養基、甘露醇鹽瓊脂培養基、伊紅美藍培養基、沙門氏菌二代鑒別培養基等，購自青島海博生物技術有限公司；新生牛血清，購自浙江天杭微生物科技股份有限公司；DNA 提取試劑盒、2×Pfu MasterMix，購自北京世紀康為生物科技有限公司；Puc57 克隆載體、DH5α、DNA Marker，購自寶生物工程有限公司。

1.3 樣品的初步分離

組織樣品在超凈工作臺內打開，用酒精棉擦拭組織樣本外側并灼燒，灼燒后的鑷子將深層組織暴露。使用一次性醫用棉簽蘸取深層組織涂布于含0.5%酵母提取物和5%牛血清的TSA 培養基上，在含5% CO2培養箱內倒置培養，37 ℃培養16～32h后觀察菌落形態，挑取單菌落傳代培養對樣品進行純化。腸道內容物用一次性醫用棉簽蘸取，在BPW 培養基震蕩培養48 h 后，取50 μL 接種至TTB 液體培養基中，震蕩培養48 h 后平板劃線至沙門氏菌二代鑒別培養基上，進行初步鑒定。經純化后的菌落分別接種至麥康凱培養基、甘露醇鹽瓊脂培養基、伊紅美藍培養基、沙門氏菌二代鑒別培養基，鴨疫里氏桿菌和巴氏桿菌在含0.5%酵母提取物和5%牛血清的TSA 培養基上為圓潤光滑的菌落，在無血清或無全血的培養基上不生長。大腸桿菌在麥康凱培養基上呈玫紅色，在伊紅美藍培養基上呈黑色并帶有金屬光澤；沙門氏菌在沙門氏菌二代鑒別培養基上呈紫色圓形菌落；金黃色葡萄球菌在甘露醇鹽培養基上呈含淡黃色暈環的金黃色菌落。根據不同細菌在不同培養基上的生長情況對其進行初步鑒定。

1.4 菌株的PCR鑒定

將初步鑒定的細菌擴大培養后，采用水煮法提取細菌DNA，采用表1 的引物對樣品進行擴增，將PCR 鑒定后的菌株使用甘油肉湯液體培養基于－40 ℃保存。

2 結果與分析

2.1 鵝細菌感染的檢測結果

對收集的76 份樣品進行細菌分離鑒定，從表2可知，61份樣品中分離出細菌94株，15份樣品未分離出細菌，分離率80.3%。其中分離大腸桿菌41 株，分離率最高，為43.6%；鴨疫里氏桿菌30 株，分離率次之，為31.9%；分離沙門氏菌16 株，分離率17.0%；金黃色葡萄球菌7 株，分離率7.4%；未分離到巴氏桿菌。

表2 樣品中不同細菌分離情況

2.2 鵝細菌的多重感染情況

從表3 可知平壩區的鵝細菌感染情況。76 份樣品中，有33 份樣品為單一細菌感染，單一感染大腸桿菌占比25.0%、單一感染鴨疫里氏桿菌占比11.8%，單一感染金黃色葡萄球菌占比3.9%，單一感染沙門氏菌占比2.6%。有28 份樣品同時檢出2 種以上細菌，其中大腸桿菌和鴨疫里氏桿菌混合感染占比14.5%，大腸桿菌和沙門氏菌混合感染占比6.6%，沙門氏菌和鴨疫里氏桿菌混合感染占比3.9%；大腸桿菌和金黃色葡萄球菌混合感染占比2.6%。有6 份樣品同時檢出大腸桿菌、沙門氏菌、鴨疫里氏桿菌3種細菌感染，占比7.9%。

表3 樣品的細菌感染情況

續表3

3 討論與結論

對平壩區2021年的病料進行收集和檢測表明，大腸桿菌、鴨疫里氏桿菌、沙門氏菌是危害鵝場的主要病原細菌，臨床感染致病性大腸桿菌的鵝關節腫大，跛行，有氣囊炎、腹膜炎、心包炎、輸卵管炎等，2 個月以內的鵝易感［2］。20日齡左右的雛鵝感染疫里氏桿菌概率極高，病死率居高不下，剖檢最典型的癥狀是心臟、肝臟、氣囊的纖維素性炎癥［3］。沙門氏菌主要引起雛鵝的腹瀉、糊肛以及腸外感染，鼠傷寒沙門氏菌是主要流行血清型［4］。葡萄球菌引起鵝內臟器官、肌肉出血［5］，發病率低。試驗未檢出巴氏桿菌，與采集樣品為30日齡以內的鵝為主，而巴氏桿菌主要感染成年鵝和產蛋鵝，因此檢出率低。試驗中，單一細菌感染占比僅為43.3%，混合感染占比36.8%，提示細菌病感染情況復雜，應關注多種細菌的混合感染，加強細菌的流行病學監測，優化疫病防控措施，控制混合感染和繼發感染，以減少細菌病的發生。