2型糖尿病合并橋本甲狀腺炎患者血清微小RNA-22-5p和25羥維生素D水平變化及其預測價值研究

孫莉萍,孟 軍,張 毅,黃艷麗,萬 君

(1.國藥葛洲壩中心醫院內分泌科,湖北 宜昌 443002;2.國藥葛洲壩中心醫院心內科,湖北 宜昌 443002;3.國藥葛洲壩中心醫院三甲辦,湖北 宜昌 443002;4.國藥葛洲壩中心醫院核醫學科,湖北 宜昌 443002)

2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)及橋本甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)的發病機制均與自身免疫損傷有關。研究[1-2]發現,T2DM患者HT的發生風險顯著升高,故探討T2DM合并HT的預測標志物具有重要意義。25羥維生素D可調控T淋巴細胞而抑制免疫反應,與HT的發生、發展及轉歸密切相關[3-4]。微小RNA(microRNA,miR)參與多種自身免疫性疾病的發病機制,其中miR-22-5p可調控惡性腫瘤細胞生物學行為及免疫功能[5]。研究[6]發現,HT患者血清miR-22-5p水平顯著升高,且與抗甲狀腺過氧化物酶抗體(Anti-thyroid peroxidase antibodies,TPOAb)和抗甲狀腺球蛋白(Antithyroglobulin,TGAb)顯著相關。因此,本研究探討T2DM合并HT患者miR-22-5p和25羥維生素D水平變化及其預測價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2018年1月至2022年1月我院收治的T2DM患者96例,根據是否合并HT分為T2DM組(50例)和T2DM+HT組(46例)。病例納入標準:根據中華醫學會糖尿病分會《中國2型糖尿病防治指南(2017年版)》診斷標準[7]確診為T2DM;根據《中國甲狀腺疾病診治指南——甲狀腺炎》中HT診斷標準[8]確診為HT;首次確診T2DM及HT;有完整的臨床資料;患者或家屬簽署知情同意書。排除標準:近6個月內使用過抗生素或糖皮質激素等影響免疫功能、甲狀腺功能、血糖及維生素D的藥物;合并嚴重心、腦、肺血管疾病,惡性腫瘤以及1型糖尿病;合并甲狀腺危象、酮癥酸中毒及意識障礙;合并其他自身免疫性疾病或內分泌系統疾病。另選擇同期體檢健康者40例為對照組。本研究經本院醫學倫理委員會審批。

1.2 研究方法

1.2.1 資料收集:包括性別、年齡、吸煙史、飲酒史、高血壓病史以及體重指數(BMI)。

1.2.2 生化指標檢測:采用全自動生化檢測儀檢測空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)和甲功五項[游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)、甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)、甲狀腺球蛋白抗體(TGAb)]。采用酶聯免疫吸附法檢測25羥維生素D(試劑盒批號:20181023,上海碧云天公司)以及血清炎癥因子,包括高敏C反應蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和IL-10(試劑盒批號:20181211、20181224、20180256、20183582,武漢博士德公司)。

1.2.3 miR-22-5p表達檢測:采用實時熒光定量PCR檢測miR-22-5p表達(試劑盒批號:2019025,大連寶生物工程公司)。引物序列設計參考文獻[6],以U6為內參,計算miR-22-5p相對表達量。

2 結 果

2.1 三組一般資料比較 見表1。三組性別、年齡、吸煙史、飲酒史、高血壓病史以及BMI比較差異無統計學意義(均P>0.05)。

表1 三組一般資料比較

2.2 三組FBG、HbA1c、甲功五項、血清炎癥因子、25羥維生素D及miR-22-5p比較 見表2。與對照組比較,T2DM組FBG、HbA1c、hs-CRP、TNF-α、IL-6和miR-22-5p升高,25羥維生素D降低(均P<0.05);T2DM+HT組FBG、HbA1c、FT3、FT4、TSH、TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6和miR-22-5p升高,IL-10和25羥維生素D降低(均P<0.05)。與T2DM組比較,T2DM+HT組FT3、FT4、TSH、TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6和miR-22-5p升高(均P<0.05),25羥維生素D降低(P<0.05)。

表2 三組FBG、HbA1c、甲功五項、血清炎癥因子、25羥維生素D及miR-22-5p比較

2.3 T2DM組和T2DM+HT組甲功五項、血清炎癥因子與miR-22-5p以及25羥維生素D的相關性 見表3。T2DM組FT3、FT4、TSH、TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-10與miR-22-5p、25羥維生素D無相關性(均P>0.05)。T2DM+HT組FT3、FT4、TSH、IL-10與miR-22-5p、25羥維生素D無相關性(均P>0.05),TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6與25羥維生素D呈負相關(均P<0.05),與miR-22-5p呈正相關(均P<0.05)。

表3 T2DM組和T2DM+HT組甲功五項、血清炎癥因子與miR-22-5p以及25羥維生素D的相關性

2.4 miR-22-5p、25羥維生素D對T2DM合并HT的預測價值 見表4。25羥維生素D、miR-22-5p以及兩者聯合檢測預測T2DM合并HT的曲線下面積(AUC)分別為0.774、0.842、0.915,聯合檢測的預測價值較高。

表4 miR-22-5p、25羥維生素D對T2DM合并HT的預測價值

3 討 論

T2DM的發病機制與自身免疫密切相關,營養及能量攝入與消耗失衡時可誘導機體產生炎癥反應,導致胰腺細胞和組織內炎癥因子過度表達、免疫細胞浸潤及下游信號通路激活,最終產生代謝性炎癥反應[9-10]。持續激活的炎癥反應可導致胰島素敏感組織產生胰島素抵抗,細胞免疫及體液免疫激活后可抑制胰島素下游信號通路,誘發胰腺細胞損傷和凋亡,胰島素分泌不足和胰島素抵抗最終導致T2DM的發生[11]。HT為慢性淋巴細胞性甲狀腺炎,其血清學特征主要為TPOAb、TGAb顯著升高,其發病機制與自身免疫功能紊亂有關[12-13]。研究[14-15]發現,抗原提呈細胞將甲狀腺特異性抗原提呈至T細胞后可誘導甲狀腺自我攻擊及損傷,刺激B細胞來源的漿細胞產生自身免疫性抗體并刺激炎癥細胞產生炎癥因子。本研究中,T2DM組和T2DM+HT組血清hs-CRP、TNF-α、IL-6高于對照組,且T2DM+HT組高于T2DM組,證實T2DM及HT發病機制與炎癥反應有關,T2DM患者合并HT時hs-CRP、TNF-α、IL-6水平均升高。

維生素D在體內代謝后可轉變為活性25羥維生素D,能夠調控鈣磷代謝、免疫功能及炎癥反應等。研究[1-2]發現,維生素D在糖尿病患者中水平降低,通過抑制CRP、TNF-α及IL等炎癥因子釋放以及激活而緩解糖尿病患者胰島素抵抗狀態。在T2DM小鼠模型中發現,維生素D受體為炎癥和胰島β細胞存活的重要調節因子,維生素D與靶組織中的維生素D受體特異性結合后,通過調控基因表達、抑制炎癥反應以及改善胰島β細胞的功能而降低血糖水平[16]。研究[17]發現,維生素D水平與糖尿病患病率呈負相關,T2DM患者補充維生素D后,隨著血清25羥維生素D水平的升高,HbA1c、FBG、胰島素抵抗指數顯著降低。研究發現,25羥維生素D可抑制HT的炎癥反應,25羥維生素D水平下降可導致HT加重。本研究中,T2DM組及T2DM+HT組25羥維生素D低于對照組,且T2DM+HT組低于T2DM組。25羥維生素D預測T2DM合并HT的AUC、敏感度和特異度分別為0.774、61.75%、73.34%,表明T2DM合并HT時25羥維生素D水平更低,25羥維生素D對T2DM合并HT具有預測價值。

miR-22-5p是具有調控細胞增殖、遷移及侵襲等生物學行為的片段RNA。Lv等[18]研究發現,miR-22-5p通過靶向調控EZH2基因調節精原干細胞的自我更新。Li等[19]研究發現,miR-22-5p在急性心肌梗死患者中表達顯著升高,可作為心肌梗死病情及預后評估的標志物。有研究[20]發現,miR-22-5p/RAP1/ERK信號通路可通過降低心肌細胞凋亡及修復而降低吡柔比星對心肌的損傷作用。研究[6]發現,miR-22-5p對免疫功能相關的IL-1、IL-12、IL-13、IL-17、IL-23 以及 IFN-γ存在相互作用。本研究中,T2DM+HT組miR-22-5p高于T2DM組和對照組。T2DM+HT組TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6與miR-22-5p呈正相關。miR-22-5p預測T2DM合并HT的AUC、敏感度和特異度分別為0.842、68.71%、76.78%,表明miR-22-5p在HT中表達升高,且與炎癥反應和甲狀腺自身抗體呈正相關,提示miR-22-5p與HT的發病機制有關。miR-22-5p可預測T2DM合并HT。

綜上所述,T2DM合并HT患者25羥維生素D水平降低,miR-22-5p表達升高,兩者與TPOAb、TGAb、hs-CRP、TNF-α、IL-6具有相關性,對T2DM合并HT具有較好的預測價值。