SOX21-AS1及SOX21在宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

呂 淼 徐貴紅 程 珂

宮頸癌屬于常見惡性腫瘤,早期無明顯癥狀,但腫瘤體積的不斷增大,會(huì)壓迫及侵犯周圍器官組織,誘發(fā)相應(yīng)癥狀[1-2]。當(dāng)宮頸癌臨床癥狀表現(xiàn)較為嚴(yán)重時(shí),多已進(jìn)展至中晚期,甚至喪失手術(shù)治療機(jī)會(huì),導(dǎo)致患者預(yù)后較差。臨床對(duì)于宮頸癌多以早確診、早治療為原則,早期可通過手術(shù)治療,切除病灶組織,阻止腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,提高整體生存率,故尋找一種精確診斷早期宮頸癌的方法對(duì)防治宮頸癌具有重要意義。HPV檢查及宮頸液基細(xì)胞檢查為當(dāng)前宮頸癌早期診斷的重要方式,但診斷精確度有待提升,存在一定局限性[3-4]。隨著臨床對(duì)惡性腫瘤的深入研究發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)鏈非編碼核糖核苷酸(In-cRNA)被發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤中起到分子生物學(xué)調(diào)控作用,或可作為診斷惡性腫瘤的潛在生物學(xué)標(biāo)志物[5-6]。當(dāng)前臨床對(duì)于SOX21-AS1、SOX21在宮頸癌內(nèi)的表達(dá)及具體臨床意義還未能明確,仍需進(jìn)一步深入研究。鑒于此,本研究旨在分析SOX21-AS1、SOX21在宮頸癌中的臨床價(jià)值,為宮頸癌診治提供重要參考。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2021年5月于我院行宮頸液基細(xì)胞檢查的患者60例作為研究對(duì)象,其中將細(xì)胞學(xué)診斷正常及HPV檢測(cè)為陰性的33例患者納入正常組,將細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)均診斷為宮頸鱗癌的27例患者納入癌癥組。研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。癌癥組年齡28～63歲,平均年齡(47.86±4.32)歲;體質(zhì)量指數(shù)18～28 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(24.26±1.57)kg/m2;孕次1～6次,平均孕次(2.85±0.42)次;產(chǎn)次1～4次,平均產(chǎn)次(1.45±0.23)次;文化程度:5例高中及以上,13例初中,9例小學(xué)。正常組年齡29～65歲,平均年齡(47.93±4.35)歲;體質(zhì)量指數(shù)18～28 kg/m2,平均體質(zhì)量指數(shù)(24.31±1.64)kg/m2;孕次1～6次,平均孕次(2.91±0.45)次;產(chǎn)次1～4次,平均產(chǎn)次(1.49±0.21)次;文化程度:6例高中及以上,16例初中,11例小學(xué)。2組基礎(chǔ)資料相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 方法

所有患者均接受宮頸液基細(xì)胞檢查及HPV檢測(cè),待收集所有患者細(xì)胞學(xué)標(biāo)本后經(jīng)處理液行密度梯度離心,去除白細(xì)胞干擾,之后將分離出的宮頸上皮細(xì)胞置于液氮罐內(nèi)保存待測(cè)。實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng):先進(jìn)行引物設(shè)計(jì),SOX21擴(kuò)增前引物:GCTGCT-TGTGTCATTCGTTTC;后引物:GGTTGGGAGTTCT-GCTTGAG。SOX21-AS1擴(kuò)增前引物:CCTAAC-CCTTCACAACCAAAGA;后引物:CTCAACCAGAT-TCAGGCAAGA。以GAPDH為校準(zhǔn)的內(nèi)參基因。RNA提取:以Trizol提取總RNA,并在NanoDrop ND-2000分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度,并以反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行cDNA合成。實(shí)時(shí)定量PCR:qRT-PCR以熒光定量PCR試劑盒在儀器上嚴(yán)格按照操作要求進(jìn)行,取20 μL反應(yīng)混合液,包括正向引物、1×PCR Master Mix、反向引物、模板及水;先以95℃預(yù)熱1 min,之后分別以95 ℃、60 ℃、72 ℃預(yù)熱15 s、15 s、45 s,共行40個(gè)循環(huán),之后熔融曲線對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物特異性進(jìn)行驗(yàn)證。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)SOX21-AS1、SOX21表達(dá):比較2組SOX21-AS1、SOX21表達(dá)。(2)SOX21-AS1、SOX21表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系:分析宮頸癌患者SOX21-AS1、SOX21表達(dá)與年齡、腫瘤大小、體質(zhì)量指數(shù)、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期及宮頸浸潤(rùn)深度等的關(guān)系。(3)診斷價(jià)值:繪制ROC曲線分析SOX21-AS1、SOX21對(duì)宮頸癌的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 SOX21-AS1、SOX21表達(dá)

宮頸癌患者SOX21-AS1、SOX21表達(dá)高于正常組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組SOX21-AS1、SOX21表達(dá)對(duì)比

2.2 SOX21-AS1、SOX21表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期Ⅱb～Ⅲa、宮頸癌浸潤(rùn)深度≥2/3患者SOX21-AS1、SOX21表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期Ⅰb～Ⅱa、宮頸浸潤(rùn)深度<2/3患者,腫瘤大小≥4.0 cm患者SOX21-AS1表達(dá)高于腫瘤大小<4.0 cm患者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 SOX21-AS1、SOX21表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 診斷效能

繪制ROC曲線結(jié)果顯示,SOX21-AS1、SOX21診斷宮頸癌的線下面積分別為:0.935、0.955,均具有較高診斷價(jià)值。見表3、圖1。

圖1 診斷宮頸癌的ROC曲線

表3 SOX21-AS1、SOX21的診斷效能分析

3 討論

宮頸癌病因復(fù)雜,臨床至今仍未完全明確,普遍認(rèn)為HPV感染是誘發(fā)疾病的重要原因。在機(jī)體免疫下降、性生活活躍等影響下,HPV感染極易發(fā)生,并持續(xù)侵襲宮頸上皮組織,促使宮頸上皮組織產(chǎn)生鱗狀增殖,引起宮頸癌前病變[7-8]。而宮頸癌前病變進(jìn)展為宮頸癌過程漫長(zhǎng),若能于進(jìn)展期間及時(shí)發(fā)現(xiàn)病變,則可盡早干預(yù),阻止宮頸癌發(fā)生,且宮頸癌早期若能及時(shí)發(fā)現(xiàn)病變,也可行手術(shù)切除治療避免癌細(xì)胞擴(kuò)散或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,以提高患者生存率,故尋找一種診斷效能較高的宮頸癌標(biāo)志物對(duì)宮頸癌早期診治尤為重要[9-10]。

宮頸液基細(xì)胞檢查為當(dāng)前常用篩查手段,檢測(cè)采集宮頸部位脫落細(xì)胞,有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞,提高宮頸癌早期檢出率。但臨床長(zhǎng)期應(yīng)用發(fā)現(xiàn),該檢查亦存在一定假陰性率,導(dǎo)致漏診事件發(fā)生。而宮頸活檢雖為診斷宮頸癌的金標(biāo)準(zhǔn),但存在一定創(chuàng)傷性,不適用于早期篩查[11-12]。In-cRNA則是一種轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度超200個(gè)核苷酸的RNA分子,屬于基因程度內(nèi)細(xì)胞分化及功能調(diào)節(jié)的重要部分。近年來隨著臨床對(duì)癌癥的深入發(fā)現(xiàn),In-cRNA能調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后及表觀遺傳,與癌癥的發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)。相關(guān)研究顯示,In-cRNA可能對(duì)HPV致癌過程具有調(diào)控作用,參與宮頸癌發(fā)病,且在宮頸癌變的分子基礎(chǔ)上存在重要作用[13]。本研究結(jié)果顯示,宮頸癌患者SOX21-AS1、SOX21表達(dá)高于正常組;有淋巴轉(zhuǎn)移、FIGO分期Ⅱb～Ⅲa、宮頸癌浸潤(rùn)深度≥2/3患者SOX21-AS1、SOX21表達(dá)高于無淋巴轉(zhuǎn)移、FIGO分期Ⅰb～Ⅱa、宮頸浸潤(rùn)深度<2/3患者,腫瘤大小≥4.0 cm患者SOX21-AS1表達(dá)高于腫瘤大小<4.0 cm患者;繪制ROC曲線結(jié)果顯示,SOX21-AS1、SOX21診斷宮頸癌的線下面積分別為:0.935、0.955,均具有較高診斷價(jià)值。表明SOX21-AS1、SOX21表達(dá)與宮頸癌密切相關(guān),可為宮頸癌診斷提供重要參考,值得臨床重視。其原因?yàn)?SOX21-AS1為SOX21反義基因,位于人類13號(hào)染色體常3230 bp的In-cRNA,其基因上存在CpG富集區(qū),為DNA甲基化潛在靶點(diǎn),且深入發(fā)現(xiàn)其啟動(dòng)子區(qū)的1個(gè)CpG位點(diǎn)處于低甲基化,且SOX21-AS1、SOX21共用1個(gè)啟動(dòng)子,故基因啟動(dòng)子區(qū)低甲基化可能為兩者在宮頸癌內(nèi)上調(diào)基因表達(dá)的重要因素,且兩者均參與宮頸癌進(jìn)程[14]。同時(shí),In-cRNA屬于效應(yīng)分子,其表達(dá)或可對(duì)腫瘤的本質(zhì)特性起到反映作用,故其在腫瘤診斷方面可能優(yōu)于當(dāng)前mRNA診斷,臨床還需加以重視,且SOX21-AS1、SOX21檢測(cè)標(biāo)本為宮頸脫落細(xì)胞,取材簡(jiǎn)單便捷、無創(chuàng)傷,可于細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的同時(shí)進(jìn)行相應(yīng)檢查,將其作為宮頸癌診斷及監(jiān)測(cè)的新一代生物標(biāo)志物,不僅便于早期診斷,還可為細(xì)胞學(xué)不確定患者提供進(jìn)一步定性依據(jù)。

綜上所述,SOX21-AS1、SOX21在宮頸癌患者體內(nèi)呈高表達(dá)狀態(tài),且與宮頸癌病理分期、轉(zhuǎn)移情況等關(guān)系密切,可作為早期診斷的重要生物學(xué)指標(biāo)。