口腔鱗狀細胞癌組織中PTEN、VEGF表達及其臨床意義

陳 青 孫 強 冉 芳

口腔鱗狀細胞癌(OSCC)為頭頸部多發惡性腫瘤,浸潤性較強,易出現淋巴結轉移,給患者生命安全構成較多威脅[1-2]。近年隨著生活方式及飲食習慣等的變化,促使OSCC的發生率呈逐年上漲趨勢。臨床盡早對OSCC進行診斷,明確病情嚴重程度,指導臨床施行個體化治療措施,對于控制病情、改善患者預后至關重要[3-4]。蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)現已被臨床證實成抑制癌癥基因,該物質表達的缺乏與細胞死亡與遷移聯系緊密[5]。血管內皮生長因子(VEGF)存在特異性,其會極大程度的增加血管通透程度,加速血管內皮細胞分化[6]。但臨床關于PTEN、VEGF在OSCC中病情評估中的研究報道較為缺乏,還有待進一步研究?；诖?本研究以該院2019年9月至2021年9月收治的61例OSCC患者為研究對象,探究OSCC患者組織內PTEN、VEGF表達與臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取該院2019年9月至2021年9月收治的61例OSCC患者為研究對象。納入標準:所有患者均經病理學檢查確診為OSCC;患者病歷有關資料齊全;患者的納入遵循自愿原則,依從性較高,且簽署知情同意書。排除標準:伴有凝血功能異常者;伴有其他惡性腫瘤者;合并嚴重的腦器質性疾病者;存在精神疾患或語言、視聽障礙,難以配合進行研究者;合并血液系統疾病者;意識障礙,難以進行正常交流者;存有全身性感染者;合并心肝腎等重要臟器功能不全者;近期存在放化療者;既往伴有顱腦創傷、手術病史者;存有缺血性腦卒中者。所有患者中男性35例,女性26例;年齡34～75歲,平均年齡(56.29±6.34)歲;體重指數18.8～27.6 kg/m2,平均體重指數(23.75±0.64)kg/m2;分化程度:26例高分化,15例中分化,20例低分化;臨床分期:15例Ⅰ期,13例Ⅱ期,26例Ⅲ期,7例Ⅳ期;淋巴結轉移:36例未轉移,25例轉移;文化程度:小學7例,初高中19例,專科22例,本科及以上13例。

1.2 方法

標本采集:收集全部患者行手術時獲取的腫瘤組織標本(病灶組)與癌旁正常口腔黏膜組織標本(對照組),全部標本均由10%福爾馬林固定,常規石蠟包埋,切成4 μm切片,60 ℃烤片1 h,之后采用免疫組織化學法檢測PTEN與VEGF。試驗試劑:鼠抗人PTEN單克隆抗體,兔抗人VEGF單克隆抗體。檢測方法:經過濃度梯度二甲苯脫脂與酒精脫蠟、水化,高壓法修復抗原,冷卻至室溫后,行免疫組織化學染色;用3%過氧化氫(H2O2)室溫賦育10 min,阻斷內源性過氧化物酶作用,磷酸鹽緩沖液(PBS)浸洗3次;PTEN與VEGF滴加一抗過夜,PBS漂洗3次,二抗37 ℃孵育20 min,PBS漂洗3次;之后進行二氨基聯苯胺(DAB)染色7 min,蘇木精復染30 s,自來水沖洗返藍;以PBS代謝一抗孵育組織切片當做陰性對照。評價標準:根據陽性細胞數百分比與染色強度綜合評分;PTEN蛋白的陽性染色為黃色、棕黃色以及更深的顏色,VEGF蛋白的陽性染色為黃色、棕黃色以及更深的顏色。染色強度:將無色歸為0分;淡黃色歸為1分;棕黃色歸為2分;褐色或黑色歸為3分。陽性細胞占比:1分:占比區域在10%及以下;2分:占比區域在11%～50%;3分:占比區域在51%～75%;4分:占比范圍在75%以上。陽性染色評分與陽性細胞占比評分乘積為總分,陰性為總分在3分以下,陽性為3分及以上。

1.3 觀察指標

(1)兩組PTEN與VEGF陽性表達率對比。(2)PTEN、VEGF陽性表達與OSCC患者臨床病理特征關系。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 兩組PTEN與VEGF陽性表達情況對比

病灶組PTEN陽性表達率低于對照組,VEGF陽性表達率高于對照組,有統計學差異(P<0.05),見表1。

表1 兩組PTEN與VEGF陽性表達率對比(例,%)

2.2 PTEN、VEGF陽性表達與OSCC患者臨床病理特征的關系

PTEN、VEGF陽性表達與OSCC患者年齡、性別無關(P>0.05);PTEN、VEGF陽性表達與臨床分期、分化程度、淋巴結轉移有關(P<0.05),見表2。

表2 PTEN、VEGF陽性表達與OSCC患者臨床病理特征的關系(例,%)

3 討論

OSCC在臨床的患病率處于較高水平,占口腔惡性腫瘤總數的80%以上,嚴重危害患者健康[7-8]。OSCC早期會出現炎癥斑塊,但臨床癥狀多缺乏典型性,較易被忽視。OSCC多發于男性群體,存在較高水平的惡性程度,會朝區域淋巴結轉移,并表現出浸潤性成長,此類患者多數預后較差,故臨床需盡早采取合理規范的診治措施[9]。針對OSCC,臨床首選手術進行治療,可有效去除病變組織,然而會給患者咀嚼、發音能力造成較多危害,加之面部存在密集的神經,手術過后患者的生活質量會顯著下降。因而,在OSCC患病早期施行盡早的檢查,明確病情嚴重程度,指導臨床施行更為規范的診治手段,對于保障患者術后獲得良好預后,改善生活質量至關重要。

對于OSCC,以往臨床常通過體格檢查、影像學檢查、病理學檢查等進行診斷,但OSCC會沿血管與神經擴散,侵犯組織并表現為慢性炎癥反應,常規體格檢查、影像學檢查存有一定局限性,病理學檢查具有明顯創傷性,難以在短時間內多次進行。多項研究表明,OSCC發病過程多為正常口腔黏膜向癌變的轉換,其具有較為繁雜的發病機制,與原癌基因的激活與抑癌基因的失活聯系緊密,因而基因的轉變與該病癥的發生與發展密切相關[10]。隨著分子生物學的快速發展,基因靶點治療現已成為臨床OSCC的一個發展趨勢,故探尋新的基因有關指標尤為重要。PTEN為腫瘤抑癌基因,存在高度特異的磷酸酶活性,與腫瘤的發生發展關系緊密,且在細胞凋亡與遷移內扮演重要角色[11-12]。PTEN基因可編碼蛋白以此發揮脂質磷酸酶活性,繼而抑制細胞周期進程,進而使得細胞凋亡,還可通過各不相同的細胞傳導路徑對細胞的分化予以干擾,與腫瘤的發生、發展聯系緊密[13]。多項研究表明,腫瘤的產生多數依靠新生血管的形成,故機體內部各類細胞因子參與新生血管的形成,而VEGF為比較關鍵的刺激因子[14]。VEGF會增加血管通透性,使得腫瘤血管產生,繼而加速腫瘤細胞增殖速率[15]。VEGF可同相關的受體有效結合,繼而刺激血管內皮增殖,為腫瘤細胞提供營養、血液供給,最終加速腫瘤增長。因VEGF會加劇血管通透性,故會使得細胞產生血漿蛋白的外滲,為腫瘤提供關鍵基質。但臨床關于PTEN、VEGF與OSCC的關系尚未探明,還需進一步探究。本研究結果顯示,病灶組的PTEN陽性表達率低于對照組,VEGF陽性表達率高于對照組,提示PTEN、VEGF與OSCC的發生發展聯系緊密。其原因為PTEN為抑癌基因,參與腫瘤的抑制,當其蛋白表達缺失對P13K/Akt路徑的調節功效,將會增強缺血誘導因子-1對VEGF的誘導,提高VEGF水平。本研究結果顯示,OSCC患者的PTEN、VEGF陽性表達與臨床分期、分化程度、淋巴結轉移有關,表明PTEN、VEGF與OSCC患者病情嚴重程度有關,臨床需予以重視,及早檢測PTEN、VEGF水平,指導臨床及時施行個體化治療,以改善患者預后。但仍需注意的是,本次研究尚存在納入樣本量較少等不足,可能會在一定程度上影響本次研究結果的可信度及準確性。因此,后續臨床還需不斷的完善試驗設計,繼續擴大樣本量的納入,以進行更深層次的探究,為臨床提供更為可靠的參考。

綜上所述,OSCC組織內的PTEN、VEGF蛋白呈異常表達,PTEN、VEGF與OSCC的發生、發展密切相關,臨床需予以高度重視,加強其表達水平監測,為臨床后續治療提供參考。