WISP2和Slug表達(dá)與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

李月霞 任艷霞 楊曉艷 李琨琨

子宮內(nèi)膜癌(Endometrial cancer)作為常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤,已呈現(xiàn)總體發(fā)病年齡提前和發(fā)病率穩(wěn)步上升的趨勢(shì)[1-2]。根據(jù)國(guó)家腫瘤中心的數(shù)據(jù)顯示,2015年中國(guó)新出現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌病例63 400例,死亡21 800例[3]。早期低危子宮內(nèi)膜癌預(yù)后較好,一般術(shù)后無(wú)需輔助治療,但仍有部分患者術(shù)后發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,預(yù)后較差[4]。尋找預(yù)測(cè)早期低危子宮內(nèi)膜癌未來(lái)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移可能性的生物學(xué)指標(biāo)成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。WISP-2是結(jié)締組織生長(zhǎng)因子/富含半胱氨酸的腎母細(xì)胞瘤過(guò)表達(dá)(CCN) 家族的分泌蛋白成員,也稱(chēng)為CCN5[5]。在多數(shù)研究中,WISP-2的表達(dá)與乳腺癌、胰腺癌和結(jié)腸癌的侵襲性呈負(fù)相關(guān),表明具有腫瘤抑制樣活性[6-7]。WISP-2表達(dá)由雌激素以及雌激素受體陽(yáng)性細(xì)胞中的表皮生長(zhǎng)因子和胰島素樣生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)[8]。Slug (Snail2) 是一種 C2H2 型鋅指轉(zhuǎn)錄因子,也是一種EMT標(biāo)志物,已在侵襲性癌癥中得到鑒定,并且與結(jié)腸癌和卵巢癌的較差臨床結(jié)果相關(guān)[9-10]。本研究采用免疫組化方法對(duì)早期低危子宮內(nèi)癌患者癌組織中的WISP2和Slug進(jìn)行了檢測(cè),探討其表達(dá)變化與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2013年2月至2018年2月于本院接受全面分期手術(shù)治療的早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者56例。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合《子宮內(nèi)膜癌診治規(guī)范》[11]中關(guān)于子宮內(nèi)膜樣腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn),術(shù)后病理診斷為子宮內(nèi)膜樣腺癌,且患者行手術(shù)治療;②患者術(shù)前未行放、化療等其他治療;③病理分期根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO,2009)子宮內(nèi)膜癌術(shù)后病理分期標(biāo)準(zhǔn)分為ⅠA期;④患者及家屬已簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并患有婦科炎癥患者;②合并其他惡性腫瘤;③合并處于妊娠狀態(tài)患者。

1.2 免疫組化分析WISP2和Slug水平

應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測(cè)WISP2和Slug表達(dá),以鼠抗人WISP2和Slug單克隆抗體為一抗,用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照,PBS代替一抗作陰性對(duì)照,用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核,參考文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)判斷,WISP2和Slug陽(yáng)性產(chǎn)物均位于細(xì)胞核,視野中出現(xiàn)粗細(xì)一致的棕黃色為陽(yáng)性染色,無(wú)棕色反應(yīng)為陰性染色。在陽(yáng)性顆粒密集部位隨機(jī)選取10個(gè)200倍視野,計(jì)數(shù)每個(gè)視野中細(xì)胞的染色情況,取平均值。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)對(duì)其進(jìn)行分級(jí),陰性為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%;陽(yáng)性為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)> 10% 。根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)將患者分為WISP2陽(yáng)性組(n=21)和WISP2陰性組(n=35);Slug陽(yáng)性組(n=25)和Slug陰性組(n=31)。

1.3 收集臨床資料以及隨訪(fǎng)資料

采用電話(huà)及門(mén)診或住院復(fù)查等方式進(jìn)行隨訪(fǎng)3年,隨訪(fǎng)至2021年2月,隨訪(fǎng)中的相關(guān)檢測(cè)包括婦科檢測(cè)、超聲、胸部X線(xiàn)片、陰道殘端細(xì)胞學(xué)檢查及血清CA125檢測(cè)等,根據(jù)是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(FIGO 分期Ⅳ期)分為兩組,無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(n=32)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(n=24)。了解患者生存情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 WISP2和Slug與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系

根據(jù)結(jié)果發(fā)現(xiàn),WISP2在無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者中陽(yáng)性表達(dá)率為53.13%(17/32),WISP2在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者中陽(yáng)性表達(dá)率為16.67%(4/24),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Slug在無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者中陽(yáng)性表達(dá)率為25.00%(8/32),Slug在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者中陽(yáng)性表達(dá)率為70.83%(17/24),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),具體見(jiàn)表1。

表1 WISP2和Slug與早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系/例

表2 生存組與死亡組WISP2和Slug表達(dá)情況比較/例

2.2 生存組與死亡組 WISP2和Slug表達(dá)情況比較

生存組WISP2表達(dá)水平明顯高于死亡組(P<0.05),生存組Slug表達(dá)水平明顯低于死亡組(P<0.05),見(jiàn)表 2。

2.3 影響早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者預(yù)后多因素logistic分析

多因素logistic回歸分析顯示,WISP2和Slug均為影響早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),見(jiàn)表3。

表3 影響早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者預(yù)后的多因素logistic分析

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是臨床常見(jiàn)的女性生殖道惡性腫瘤,發(fā)病率在近年來(lái)呈不斷上升的趨勢(shì),一般在50～70歲年齡段高發(fā),且有年輕化發(fā)展的趨勢(shì)[12]。在我國(guó),每年子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率為0.634%,病死率為0.218%[13]。手術(shù)為主的綜合治療可提高子宮內(nèi)膜癌患者生存率,但侵襲或轉(zhuǎn)移者仍預(yù)后不良[14]。癌癥的發(fā)生為多機(jī)制、多因素的復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng),子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生被認(rèn)為是一個(gè)多步驟的過(guò)程,涉及激素調(diào)節(jié)、基因突變、粘附分子和細(xì)胞凋亡的協(xié)調(diào)相互作用,但是目前子宮內(nèi)膜癌確切的病理機(jī)制尚未明確[15-16]。

WISP2是CCN蛋白家族的一員,該家族包括6個(gè)成員,包括CCN1(CYR61)、CCN2(CTGF)、CCN3(NOV)、CCN4(WISP1)、CCN5(WISP2)和 CCN6 (WISP3)[17]。先前的研究表明,CCN 在不同的組織、器官和腫瘤中表現(xiàn)出不同的表達(dá)譜和轉(zhuǎn)錄水平[18]。 CCN 成員與許多細(xì)胞功能以及病理狀況有關(guān)[19]。WISP2 是富含半胱氨酸的 CCN 細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)蛋白家族的成員[20]。在大多數(shù)研究中,WISP-2 的表達(dá)與乳腺癌、胰腺癌和結(jié)腸癌的侵襲性呈負(fù)相關(guān),表明具有腫瘤抑制樣活性[21-22]。WISP-2 在乳腺癌進(jìn)展過(guò)程中顯示出短暫升高的水平[23]。WISP-2 表達(dá)由雌激素以及雌激素受體陽(yáng)性細(xì)胞中的表皮生長(zhǎng)因子和胰島素樣生長(zhǎng)因子誘導(dǎo),WISP-2 是雌激素誘導(dǎo)和胰島素樣生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的增殖所必需的[24-25]。在癌癥中,WISP2 參與細(xì)胞增殖、遷移和轉(zhuǎn)移[26]。然而,WISP2 在子宮內(nèi)膜癌中的功能仍不清楚。Slug 在骨骼干/基質(zhì)細(xì)胞 (SSC) 中表達(dá)[27]。Slug 在 pro-B 細(xì)胞急性白血病中異常上調(diào),在正常造血祖細(xì)胞中起到抗凋亡因子的作用[28]。Slug 在癌癥中異常表達(dá),并調(diào)節(jié)包括細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等過(guò)程[29]。本研究中WISP2在無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者的陽(yáng)性表達(dá)率;Slug在無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者的陽(yáng)性表達(dá)率高于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者的陽(yáng)性表達(dá)率。WISP2在抑制子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的同時(shí)還可以減少淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移,Slug在誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌的同時(shí),還可以增強(qiáng)侵襲轉(zhuǎn)移,加快疾病的進(jìn)展。生存組的 WISP2表達(dá)水平明顯高于死亡組,生存組的 Slug表達(dá)水平明顯低于死亡組。 WISP2、Slug均為影響子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這提示其和子宮內(nèi)膜癌預(yù)后有一定關(guān)系,通過(guò)測(cè)定其表達(dá)情況能夠輔助預(yù)后的評(píng)價(jià)。

綜上所述,早期低危子宮內(nèi)膜腺癌患者癌組織中 WISP2陰性、Slug陽(yáng)性表達(dá)者容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,生存率更低,可作為子宮內(nèi)膜癌預(yù)后評(píng)價(jià)的輔助指標(biāo)。然而本研究存在偏移,首先是中心單一以及樣本量偏少,以及隨訪(fǎng)時(shí)間短,因此未來(lái)還需要多中心以及更大擴(kuò)大樣本量的前瞻性試驗(yàn)來(lái)證實(shí)此結(jié)果。