Nn6HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸病變?cè)缙诤Y查中的應(yīng)用價(jià)值分析

劉 娜 孫 夏 曹付梅 趙 蕾

宮頸癌的發(fā)病率較高,致病機(jī)理較為明晰,主要原因在于患者長(zhǎng)期受到人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的持續(xù)感染[1],其中E6、E7是主要的致癌基因,宮頸上皮內(nèi)瘤變是宮頸癌前病變的主要過(guò)程,一般需要經(jīng)過(guò)5年以上的時(shí)間發(fā)展至癌癥,因此選擇合適的早期篩查方式并給予患者針對(duì)性治療,可有效防控宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展,對(duì)提高患者的預(yù)后水平也具有重要意義[2-3]。目前臨床上常采用宮頸組織活檢作為診斷宮頸疾病的依據(jù),但在診斷過(guò)程中易出現(xiàn)漏診現(xiàn)象,因此具有一定的局限性[4]。隨著實(shí)驗(yàn)室診斷水平的不斷進(jìn)步,HPV基因檢測(cè)的應(yīng)用逐漸廣泛,HPV DNA檢測(cè)常與病理活檢聯(lián)合診斷HPV感染宮頸細(xì)胞程度,敏感性較高,但有研究[5]結(jié)果顯示,HPV DNA檢測(cè)結(jié)果無(wú)法反映患者的宮頸細(xì)胞受到HPV感染后的活性狀態(tài)。既往研究表明[6],HPV E6/E7腫瘤蛋白的過(guò)表達(dá)會(huì)加速宮頸病變的進(jìn)程,造成宮頸組織持續(xù)受到HPV感染,能夠作為篩查宮頸癌早期病變的指標(biāo)之一。本研究對(duì)90例患者進(jìn)行HPV 兩種基因檢測(cè),以病理活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),比較兩種方法對(duì)早期宮頸病變的篩查價(jià)值,以期為臨床診斷提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2019年5月至2022年6月在我院行宮頸病變篩查的患者90例。納入標(biāo)準(zhǔn):①年齡在21～55歲;②近期未接受過(guò)宮頸癌篩查;③患者對(duì)本研究方案充分了解后簽署相關(guān)同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):①具有宮頸手術(shù)史;②伴有其他腫瘤病變;③處于妊娠期或哺乳期;④近期使用過(guò)激素治療。以病理活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),將患者分成宮頸炎癥組、CIN1組、CIN2組、CIN3組以及宮頸癌組,其中宮頸炎癥組患者24例,年齡21～54歲,平均年齡(40.39±5.38)歲,CIN1組患者25例,年齡23～55歲,平均年齡(41.49±5.96)歲,CIN2組患者17例,年齡22～53歲,平均年齡(40.94±6.16)歲,CIN3組患者13例,年齡23～50歲,平均年齡(41.15±6.56)歲,宮頸癌組患者11例,年齡21～54歲,平均年齡(40.39±5.38)歲,5組患者的年齡經(jīng)比較,差異不顯著(P>0.05)。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集方法 采集樣本時(shí)應(yīng)避開(kāi)患者的月經(jīng)期,采樣前5 d內(nèi)患者未進(jìn)行陰道沖洗及上藥等,并于24 h內(nèi)未進(jìn)行性生活。使用宮頸專(zhuān)用刷于患者的宮頸處旋轉(zhuǎn)5～8圈后,將收集的上皮細(xì)胞放置于保存液評(píng)中備用待測(cè)。

He doesn’t study as/so hard as his brother.他學(xué)習(xí)不如他弟弟努力。

1.2.2 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)方法 加入標(biāo)記的熒光物質(zhì)及采用DNA信號(hào)放大技術(shù)后的底物,應(yīng)用冷光儀檢測(cè),超過(guò)發(fā)光閾值判斷為陽(yáng)性。

天津?yàn)I海新區(qū)位于渤海灣，河與海的交匯孕育了獨(dú)具特色的碼頭文化。天津因此被稱(chēng)為“通俗小說(shuō)北方創(chuàng)作中心”。碼頭文化具有平民性與親和力，擁有廣泛的群眾基礎(chǔ)，碼頭文化屬于俗文化范疇。曾有這樣一種說(shuō)法：具有俚俗特色的天津文化可稱(chēng)之為“衛(wèi)派”文化，與“京派”文化、“海派”文化形成鼎足之勢(shì)。碼頭文化是民俗文化的基礎(chǔ)，碼頭文化促進(jìn)了南北文化的交融，也為天津成為北方最大的商貿(mào)中心奠定了基礎(chǔ)。

陳振豪[32]等結(jié)合上海地區(qū)實(shí)行的峰谷電費(fèi)差價(jià)政策，提出了一套適用于空氣源熱泵熱水器的控制方案。該控制方案采用多模式流程控制，用戶(hù)可以根據(jù)需求不同和季節(jié)變化自行選擇不同的工作模式。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該流程控制方案可以顯著地提高系統(tǒng)的能效比和經(jīng)濟(jì)性，具有推廣價(jià)值。

1.2.3 HPV DNA檢測(cè)方法 采集的樣本經(jīng)提取核酸、PCR擴(kuò)增并雜交后,采用流式熒光法檢測(cè)信號(hào),當(dāng)檢測(cè)結(jié)果超過(guò)150時(shí)判斷為陽(yáng)性。

①比較不同年齡段患者的陽(yáng)性檢出率。②比較不同病變程度患者的陽(yáng)性檢出率。

1.3 觀察指標(biāo)

但事實(shí)究竟是否如這些傳記、方志所說(shuō)的那樣呢？顧公燮《丹午筆記》中《湯文正治吳》這條中的記載，其實(shí)并未明言徐枋逃遁秦余山堅(jiān)拒不見(jiàn)，倒反在其書(shū)之《闡忠錄》中作有一篇徐枋的小傳，其中說(shuō)到一個(gè)細(xì)節(jié)，著實(shí)頗耐人尋味：

③比較兩種檢測(cè)方法對(duì)早期宮頸病變的篩查價(jià)值,其中以CIN2及以上病變程度為癌變相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)。

以CIN2及以上病變程度為癌變相對(duì)標(biāo)準(zhǔn),HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的靈敏性與陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均顯著高于HPV DNA檢測(cè)(P<0.05),特異性略高于HPV DNA檢測(cè),但差異不顯著(P>0.05),見(jiàn)表3。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

患者年齡<40歲時(shí),HPV DNA陽(yáng)性檢出率略高于HPV E6/E7 mRNA檢測(cè),但兩種檢測(cè)方法差異不顯著(P>0.05),當(dāng)年齡超過(guò)40歲時(shí),HPV E6/E7 mRNA的陽(yáng)性檢出率顯著高于HPV DNA檢測(cè)(P<0.05),見(jiàn)表1。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段患者陽(yáng)性檢出率比較

1.2.4 組織病理活檢方法 將患者的宮頸暴露充分后,于整個(gè)宮頸及其周?chē)磕ù姿崛芤?對(duì)宮頸組織進(jìn)行全面觀察結(jié)束后涂抹碘液,對(duì)于宮頸處的白色病變、血管呈點(diǎn)狀等可疑病變部位處進(jìn)行多處取樣。將采集的活檢組織經(jīng)過(guò)固定、脫水、包埋、切片以及染色等一系列處理后,由兩位病例醫(yī)生進(jìn)行獨(dú)立閱片診斷,診斷結(jié)果可分為宮頸炎癥、CIN1、CIN2、CIN3以及宮頸癌[7]。

2.2 不同病變程度患者陽(yáng)性檢出率比較

宮頸炎癥組、CIN1組與CIN2組中,HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性檢出率略低于HPV DNA檢測(cè),但兩種檢測(cè)方法差異不顯著(P>0.05)。CIN3組與宮頸癌組采用HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的陽(yáng)性檢出率顯著高于HPV DNA檢測(cè)(P<0.05),見(jiàn)表2。

2.3 早期宮頸病變的篩查價(jià)值比較

④比較不同病變程度患者的 HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)。

2.4 不同病變程度患者的HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)比較

隨著病變程度的加深,HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)顯著增多,各組差異顯著(P<0.05),見(jiàn)表4。

表4 不同病變程度患者的HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)的比較

3 討論

超過(guò)70%的婦女在一生中均會(huì)受到HPV的感染,但大部分的感染能通過(guò)機(jī)體內(nèi)的免疫系統(tǒng)進(jìn)行清除,剩下約10%左右會(huì)持續(xù)感染[8]。當(dāng)病情發(fā)展為持續(xù)感染后,病毒基因會(huì)自發(fā)整合到患者的宿主細(xì)胞中,使得E6與E7等致癌基因被激活,在宿主細(xì)胞的作用下轉(zhuǎn)錄出大量的mRNA,并進(jìn)行相關(guān)致癌蛋白的過(guò)表達(dá)[9]。臨床上對(duì)于宮頸病變的管理是按相關(guān)級(jí)別進(jìn)行操作,避免治療的不足與過(guò)度,對(duì)于CIN1患者由于感染后自發(fā)消退率較高,因此一般不做治療,對(duì)于CIN2及以上級(jí)別的患者應(yīng)及時(shí)予以針對(duì)性治療,減少發(fā)展為宮頸癌的可能性[10-11]。HPV DNA檢測(cè)中以L1基因?yàn)榘邢?容易增加患者生理方面的痛苦[12],HPV E6/E7 mRNA則是以mRNA為靶向,檢測(cè)結(jié)果能直接反映出患者機(jī)體內(nèi)致癌基因的活躍性,更好地預(yù)測(cè)癌變的風(fēng)險(xiǎn)[13]。由于宮頸癌前病變所需的時(shí)間較長(zhǎng),因此篩查早期宮頸病變具有較大的可行性,選擇準(zhǔn)確的篩查方式對(duì)于提高診斷效率以及提高宮頸癌的預(yù)防措施水平意義較大。

1.做好“算術(shù)數(shù)”與“有理數(shù)”的過(guò)渡。從小學(xué)到初中，數(shù)的概念在“算術(shù)數(shù)”的基礎(chǔ)上擴(kuò)充到實(shí)數(shù)，運(yùn)算關(guān)系也由四則運(yùn)算引入了乘方、開(kāi)方運(yùn)算。因此，要抓住兩個(gè)方面：一是引導(dǎo)學(xué)生真正理解負(fù)數(shù)的意義；二是要加強(qiáng)對(duì)符號(hào)法則的教學(xué)。對(duì)那些容易混淆的概念，常出錯(cuò)的計(jì)算，要反復(fù)練習(xí)。以便使學(xué)生盡快掌握并熟練地運(yùn)用之。

本研究結(jié)果顯示,患者年齡超過(guò)40歲時(shí),HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性檢出率高于HPV DNA(P<0.05),提示40歲以上的患者發(fā)生宮頸病變的風(fēng)險(xiǎn)較大,對(duì)其使用HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)較可靠。這是由于部分年齡小于40歲的患者感染HPV后能通過(guò)自身免疫系統(tǒng)進(jìn)行清除,使之自然消退,從而表現(xiàn)為HPV E6/E7 mRNA與HPV DNA陽(yáng)性檢出率均較低。宮頸炎癥組、CIN1組與CIN2組中,HPV E6/E7 mRNA陽(yáng)性檢出率略低于HPV DNA檢測(cè),但兩種檢測(cè)方法之間的差異不顯著(P>0.05)。CIN3組與宮頸癌組采用HPV E6/E7 mRNA時(shí)陽(yáng)性檢出率高于HPV DNA檢測(cè)(P<0.05),說(shuō)明進(jìn)行早期高級(jí)別宮頸病變的篩查時(shí)使用HPV E6/E7 mRNA價(jià)值更好。主要原因在于低級(jí)別宮頸病變患者的病毒基因還未整合到宿主細(xì)胞中或整合尚未完成,因此使得檢測(cè)呈現(xiàn)陰性,表明無(wú)惡變轉(zhuǎn)換的風(fēng)險(xiǎn)。而對(duì)于高級(jí)別宮頸病變的篩查時(shí),由于HPV DNA可能會(huì)發(fā)生L1靶基因的丟失,另外HPV DNA檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到血液標(biāo)本的影響,因此表現(xiàn)為HPV DNA檢測(cè)高級(jí)別宮頸病變樣本時(shí)陽(yáng)性檢出率低于HPV E6/E7 mRNA。采用HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)的靈敏性與陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均顯著高于HPV DNA檢測(cè)(P<0.05),也證實(shí) HPV E6/E7 mRNA能夠成為宮頸篩查的有效手段之一,對(duì)于宮頸癌的治療具有指導(dǎo)意義。另外隨著病變程度的加深,HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)顯著增多(P<0.05),提示HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)與宮頸病變程度密切相關(guān),這與林曉紅等[14]的研究結(jié)果一致。這是由于HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)能直接反映患者機(jī)體致癌基因的表達(dá),拷貝數(shù)值與惡變風(fēng)險(xiǎn)呈現(xiàn)正相關(guān),因此對(duì)于HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)較高判斷患者病情為病變高風(fēng)險(xiǎn)時(shí),應(yīng)及時(shí)采取相關(guān)治療措施,阻斷宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展。

綜上所述,HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)早期高級(jí)別宮頸病變的篩查價(jià)值高于HPV DNA檢測(cè),同時(shí)其拷貝數(shù)與患者宮頸病變程度密切相關(guān),建議臨床予以重點(diǎn)關(guān)注。