高度宮頸病變與人乳頭瘤病毒感染及MicroRNA-196a、MicroRNA-200a相關性研究

王丹丹 李云龍

宮頸病變通常是指宮頸炎癥、宮頸腫瘤以及宮頸的子宮內膜異位癥等,又稱為子宮頸上皮內瘤變,該病變與子宮頸浸潤癌密切相關,大部分發生于25～35歲婦女,由于具有發展為癌癥的可能性,因此也稱為癌前病變[1]。人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸發生病變的一重大原因,臨床上可以通過HPV檢查來輔助宮頸病變的診斷[2]。有研究證明,病毒和宿主均可影響個體感染程度。微小RNA(microRNA)是非編碼RNA,具有19～25個堿基,可抑制基因的翻譯和表達,參與機體炎癥、腫瘤發生等多種病理過程。有研究發現,微小RNA-196a(microRNA-196a)、微小RNA-200a(microRNA-200a)在血清中的表達水平與宮頸病變的嚴重程度存在關系。所以本研究旨在進一步探究高度宮頸病變與人乳頭瘤病毒、MicroRNA-196a、MicroRNA-200a的相關性。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2020年1月至2021年3月收治的經宮頸薄層液基細胞學檢查(TCT)及陰道鏡下活檢組織病理學檢查確診的102例高度宮頸病變的婦女作為研究對象(n=102)。納入標準:①符合《宮頸上皮內瘤變(CIN)的臨床處理指南(ASCCP)》[3]診斷標準;②女性;③無妊娠反應;④知情并簽署同意書。排除標準:①子宮全切除;②盆腔經放射治療;③臨床病理不明確;④患者資料不完整。選取同期72例女性健康體檢者為對照組(n=72)。研究組患者,年齡25～62歲,平均年齡(35.72±10.23)歲,根據陰道鏡下活檢送病理組織學檢查的結果,宮頸癌患者11例,宮頸病變(CIN)患者91例。對照組患者,年齡23～65歲,平均年齡(33.62±9.51)歲。2組研究對象性別、年齡等資料無統計學差異,具有可比性(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 人乳頭瘤病毒檢測 對研究對象進行HPV檢測:采集研究對象生殖道的拭子標本,放入加有5 ml專用細胞保存液的取樣管中,低溫保存送檢。使用HPV分型檢測試劑盒(凱普Hybrimax公司),可檢測有21種病毒分型的HPV基因型。對采集的標本細胞進行DNA提取分離,再進行聚合酶鏈反應(PCR)擴增和膜雜交法。觀測結果,陽性出現藍紫色圓點,根據芯片上HPV分型分布的情況判斷HPV亞型,多點陽性即為多重感染。

1.2.2 陰道鏡下檢查及活檢 檢查前對患者進行醋酸實驗,使用3%的醋酸涂抹宮頸陰道位置,每3 min重復一次,最后涂抹復方碘液。采用雙目陰道鏡觀察病變區域,在病變嚴重處進行3、6、9、12點取組織進行活檢。病理學診斷分為:①正常/炎癥;②宮頸上皮內瘤變(CIN)分為CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ;③浸潤癌。

1.2.3 血清中microRNA-196a、microRNA-200a水平檢測 采集2組研究對象清晨空腹靜脈血5 ml,靜置35 min,以3000 r/min離心15 min后收集血清。采用Taq Man microRNA檢測試劑盒(AB公司,美國)檢測血清中microRNA-196a、microRNA-200a表達水平。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 宮頸癌組、CIN組及對照組的HPV陽性、miR-196a、miR-200a水平比較

經HPV檢測,宮頸癌組中陽性11例,陽性率為100%;CIN組中陽性68例,陽性率為74.73%;對照組中陽性8例,陽性率11.11%。miR-196a、miR-200a在血清中的表達從低到高均是對照組、CIN組、宮頸癌組,3組指標差異明顯(P<0.05)。見表1。

表1 3組研究對象HPV陽性、miR-196a、miR-200a水平比較

2.2 比較血清中miR-196a、miR-200a水平及HPV感染單獨及聯合診斷宮頸病變的價值

經ROC曲線可得,miR-196a、miR-200a、HPV感染診斷宮頸癌的AUC分別為0.818、0.893、0.842,miR-196a、miR-200a診斷的截斷值分別為2.76、1.56,將三者聯合診斷的AUC為0.975,大于三者的單獨診斷(P<0.05)。見表2,圖1。

圖1 診斷宮頸病變的ROC曲線

表2 血清中miR-196a、miR-200a水平及HPV陽性單獨及聯合診斷宮頸病變的價值

2.3 CIN亞型的HPV陽性、miR-196a、miR-200a水平比較

根據陰道鏡下活檢送病理組織學檢查的結果,將CIN患者分為3種亞型,CINⅠ21例、CINⅡ38例及CINⅢ 32例。CINⅠ組HPV陽性11例,陽性率52.38%;CINⅡ組陽性29例,陽性率76.32%;CINⅢ組陽性28例,陽性率87.5%。CINⅢ組HPV陽性率與CINⅠ組差異明顯(P<0.05),而與CINⅡ組無明顯差異(P>0.05),CINⅡ組與CINⅠ組HPV陽性率也無明顯差異(P>0.05)。經檢測,CINⅢ組的miR-196a、miR-200a表達水平明顯高于另外2組,CINⅡ組的表達高于CINⅠ組(P<0.05)。見表3。

表3 CIN亞型的HPV陽性、miR-196a、miR-200a水平比較

2.4 研究組患者宮頸病變情況與miR-196a、miR-200a的相關性分析

通過Pearson相關性分析得出:患者宮頸病變的嚴重程度與miR-196a、miR-200a呈正相關(P<0.05)。見表4。

表4 研究組患者宮頸病變情況與miR-196a、miR-200a的相關性分析

3 討論

宮頸癌是在子宮頸和宮頸陰道部發生的惡性腫瘤,其中發病率最高的是子宮頸鱗狀細胞癌。宮頸癌是排名第二的女性惡性腫瘤,每年宮頸癌的新發病例有三分之一來自于中國[4]。近年來,在全國范圍內開展了宮頸癌普查,同時篩查宮頸癌的技術也在不斷提高,所以宮頸癌前期病變能夠早期診斷和治療。高度的宮頸病變有發展為宮頸癌的潛能,及時發現宮頸病變,并及早對其進行治療,能夠有效避免宮頸病變發展為宮頸癌[5]。雖然宮頸癌近年的發病率在呈下降趨勢,死亡率也在不斷下降,但研究也發現宮頸癌年輕化的趨勢也十分明顯。

目前已有大量的流行病學研究表明,宮頸病變的發生與HPV感染有密切的關系[6]。目前發現HPV類型有200多種,根據分類:高危型HPV有15種;可能高危型HPV有3種;低危型HPV有12種[7]。對型別進行分析,其中HPV16型不管在CIN中,還是宮頸癌中,均占主導地位,其CINⅠ感染率為19.68%,CINⅡ感染率為33.25%,CINⅢ感染率為55.37%,而宮頸癌感染率為61.38%,患者宮頸病變程度越重,其感染率則越高[8]。HPV感染是一個全球關注的問題,有研究表明陰道癌、口腔癌、咽癌等多種惡性腫瘤的發生都與HPV病毒有關[9-10]。大量研究顯示,性生活活躍的女性,一生中感染HPV的幾率為50%～80%,最易發生感染的年齡在18～30歲之間,但大部分女性自身的免疫系統能夠清除HPV病毒,若不能清除,持續性地感染HPV,就有可能發生高度宮頸病變,進一步發展成為浸潤癌[11]。因此需增加我國女性HPV的檢測力度,對易致病變進展的HPV感染者給予重視,對早期病變患者,及時干預并治療,抑制病變進一步發展,有效降低宮頸癌的發生率和死亡率。近年來,有大量關于miRNA作為癌癥診斷和預后的指標的研究,說明miRNA是一種潛在的腫瘤標志物。miRNA在細胞的一系列生理過程中均有參與,若異常表達,則會導致多種惡性腫瘤類疾病發生[12]。miRNA的研究為腫瘤的發病機制提供新的方向,也為其診斷和治療提供新的方法。研究發現miR-196a在宮頸發生病變和發展為宮頸癌的病理過程中起促進作用,其可能與宮頸細胞異常轉化相關,還能對腫瘤的抑制基因發揮作用[13]。也有研究發現,miR-200a作為調節因子,能抑制細胞轉錄,在惡性腫瘤中呈高表達,并且與病變程度相關,在高度病變及腫瘤晚期中表達更高。同時,分析宮頸癌患者預后的miR-200a的表達水平發現,miR-200a還與宮頸癌患者的預后有關系。因此,檢測血清中miR-196a、miR-200a的水平,可以對于宮頸病變的初期診斷發揮輔助作用。

本次研究比較宮頸癌患者、CIN患者及對照組患者的HPV感染情況,發現宮頸癌患者均感染HPV,且大部分宮頸病變患者也感染,尤其是宮頸病變嚴重的患者,這說明HPV感染會增加宮頸病變的可能性。比較3組患者血清中miR-196a、miR-200a的表達水平,宮頸癌患者的兩個指標皆明顯高于CIN及對照組患者,其次是CIN患者,而對照組的表達則較低,表明高度宮頸病變的患者,miR-196a、miR-200a在血清中都有較高的表達,尤其是宮頸病變已轉化為宮頸癌時。比較血清中miR-196a、miR-200a指標及HPV感染情況單獨和聯合診斷診斷宮頸病變情況可知,將3個指標聯合診斷,可提高宮頸病變診斷的特異度及靈敏度。根據陰道鏡下活檢的結果顯示,可以將CIN分為3種亞型,CINⅠ組HPV陽性率52.38%;CINⅡ組陽性率76.32%;CINⅢ組陽性率87.5%,說明宮頸病變程度越重,HPV感染的可能性越大,并且CINⅢ組患者的miR-196a、miR-200a的表達也明顯比另外兩組患者高。根據Pearson相關性分析:患者宮頸病變的嚴重程度與miR-196a、miR-200a呈正相關。由此,檢測患者是否感染HPV,以及檢測患者血清中miR-196a、miR-200a表達情況,對宮頸病變的診斷具有指導作用。

綜上所述,宮頸癌患者均會感染HPV,而宮頸病變的程度越重,HPV的感染可能性就越高;血清中miR-196a、miR-200a水平越高,宮頸病變程度越重。