胃癌組織中PVT1基因水平與胃癌細胞生物學行為及化療藥物對胃癌組織抑制率的關系

喬超鋒 靳 磊 寧 濤 杜信岡

胃癌是起源于胃黏膜上皮的常見惡性腫瘤,流行病學調查顯示[1],胃癌在我國的各類惡性腫瘤疾病的發病中居于首位,同時其發病率及死亡率呈現逐年上升的趨勢。而在臨床治療中,目前針對胃癌患者主要采取手術以及放化療進行治療。但是在對患者的化學治療中,化療的耐藥性在一定程度上降低了患者對化療的敏感性[2]。近年來的研究已經證實,漿細胞瘤可變易位1(IncRNA-plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)基因在胃癌的疾病進展中呈現顯著的表達異常[3],本研究主要分析胃癌腫瘤組織中PVT1基因水平與胃癌細胞生物學行為及化療藥物對胃癌組織抑制率的關系,為臨床治療提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

本研究采取前瞻性研究,以我院2015年9月到2021年2月收治的胃癌患者120例作為研究對象,其中男性患者56例,女性患者64例;年齡29～55歲,平均年齡為(41.22±3.54)歲;體重指數平均為(24.34±3.20)kg/m2;TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期患者89例,Ⅲ～Ⅳ期患者31例;分化程度:高分化46例,中分化39例,低分化35例。所有患者均簽署知情同意書。本研究經倫理委員會論證通過。

納入標準:①所有患者均符合胃癌診斷標準[4];②所有患者的病理分期為Ⅰ～Ⅳ期;③在本次研究前,所有患者均未開展放化療以及手術治療;④患者的預期生存時間在3個月以上。排除標準:①嚴重的肝腎功能障礙患者;②合并其他腫瘤疾病患者;③消化道穿孔以及嚴重營養不良患者。

1.2 研究方法

治療措施:所有患者均采取內徑黏膜剝離術(ESD)、開腹手術治療,術中,患者全身麻醉后,行氣管插管。癌前病變或者病變局限于黏膜內的早期癌,在對患者的病灶部位進行有效確認后,對患者的病變邊緣0.5 cm處進行針形刀(OLYMPUS KD-10Q-1)環周標記,黏膜下進行生理鹽水注射,使患者的外側緣明顯隆起,使用針形刀沿著外側緣進行環形切開,在沿著患者的切開緣側進行黏膜下層分離,最后將整片病變部位進行切除。其他患者則采取腹腔鏡胃癌根治術:對患者進行全身麻醉以及氣管插管后,保持患者心電、呼吸等監護措施,患者取截石位,完成氣腹后,在腹腔鏡的輔助下,對患者患病部位腫瘤進行探查,明確患者的腫瘤大小以及位置,使用超聲刀對患者的胃結腸韌帶以及脾胃韌帶進行離斷,同時對胃大網膜和肝胃韌帶進行橫斷,同時對切除胃體的動脈和靜脈進行切斷,止血,對周圍淋巴結進行清掃,腹腔鏡手術完成后,于上腹部進行縱向切口,打開腹腔,荷包包埋處理患者的十二指腸殘端,對患者進行胃的遠端切除,將殘留胃體于患者相鄰的空腸進行Billroth Ⅱ式重建,術后對患者的整體腹腔進行清洗,在確保患者的腹腔狀況良好同時留置管完成后,關閉腹腔。

Ⅲ～Ⅳ期患者行術前SOX方案新輔助化療2周期,第1天奧沙利鉑靜脈滴注130 mg/m2,滴注時間為3 h,第1～14天每天兩次口服替吉奧40～60 mg/m2,后休息7天,以21天作為1個療程。Ⅰ～Ⅱ期患者術前無需輔助化療。2組患者術后均進行化療,化療方案與上述一致,治療6～8個療程[5]。

所有患者入組后,分別對患者的癌癥組織以及癌旁組織進行提取,研磨后使用總RNA提取液1 ml混勻后,-80 ℃ 冷凍保存待檢。患者Notch1、ASB2 mRNA的表達情況采用western blotting方法進行,對上述細胞進行擴增后,分別使用方正掃描儀對電泳結果進行掃描,同時quantity one軟件對患者的電泳結果進行灰度計算,以患者PVT1條帶的相對吸光度值對患者的PVT1水平進行評估。基因擴增采用real-time PCR擴增技術,PVT1上游引物為5'CGACGCACAAGGTCTGTCTTCCA3',下游引物為5'CGGACTTGCCCAGGTCATCTAC 3',179 bp,試劑盒采用GREEN QPCR Mix試劑盒進行擴增,基因的相對表達量以2-ΔΔct表示[6]。

1.3 觀察指標

1.3.1 癌癥組織以及癌旁組織的PVT1水平比較 分別對癌癥組織以及癌旁組織的PVT1水平進行比較。

1.3.2 不同病理特征患者的癌癥組織PVT1水平比較 分別對Ⅰ～Ⅱ期以及Ⅲ～Ⅳ期及低分化、中分化以及高分化患者的PVT1水平進行比較。

1.3.3 不同生物行為患者的PVT1水平比較 分別對深肌層浸潤與非深肌層浸潤、脈管浸潤與非脈管浸潤、侵犯轉移與非侵犯轉移患者的PVT1水平比較。

1.3.4 不同抑癌率患者的PVT1水平比較 所有患者入組后,將患者的癌癥組織分成兩份,分別為試驗組以及對照組。每組患者設置12孔,共計設定24孔,試驗組采取含有化療藥物的培養液進行培養,加入的培養液以不使組織漂浮為準,在37 ℃下進行培養1周,在培養過程中更換培養液1次,培養結束后,向培養皿中加入100 μL的MTT溶液(5 mg/L)以及100 μL的膠原酶溶液(0.1 mg/L),反應8 h后,棄去上述液體,加入400 μL的DMSO對結晶紫進行溶解,使用酶標儀對吸光度進行檢測,波長設定為540 nm。藥物的抑癌率=(1-試驗組吸光度/對照組吸光度)[7]。對抑癌率分別為30%以下、30%～40%以及40%以上的患者的PVT1水平進行比較。

1.4 統計學方法

采用 SPSS19.0 軟件包進行統計學分析,計量數據以平均值±標準差表示,采用t檢驗進行比較。計數數據采用[(n)%]表示,采用χ2檢驗,當P<0.05時,認為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 癌癥組織以及癌旁組織的PVT1水平比較

癌癥組織的PVT1水平為(2.16±1.07),顯著高于癌旁組織的(0.12±0.05),差異有統計學意義(t=126.112,P=0.000)。

2.2 不同病理特征患者的癌癥組織PVT1水平比較

Ⅰ～Ⅱ期的PVT1水平顯著低于Ⅲ～Ⅳ期患者(t=4.919,P=0.000)。不同分化程度患者的癌癥組織PVT1水平之間的差異存在統計學意義(F=11.023,P=0.000),見表1。

表1 不同病理特征患者的癌癥組織PVT1水平比較

2.3 不同生物行為患者的PVT1水平比較

不同肌層浸潤、脈管浸潤與否、侵犯轉移與否患者的PVT1水平差異均有統計學意義(t=10.986,10.462,3.174,P=0.000),見表2。

表2 不同生物行為患者的PVT1水平比較

2.4 藥物對癌癥不同抑制率患者的PVT1水平比較

藥物對癌癥的不同抑制率患者的PVT1水平之間的差異存在統計學意義(F=15.381,P=0.000),通過兩兩比較,PVT1水平從高到低依次為抑制率30%以下、30%～40%以及40%以上,見表3。

表3 不同抑癌率患者的PVT1水平比較

3 討論

近年來,腫瘤性疾病與化療藥物的耐藥性之間的關系研究成為熱點。多數的研究認為,lncRNA的異常性表達在一定程度上促進了患者對于化療藥物的耐藥性,在以往的研究中已經證實[8],某些lncRNA的表達異常是治療效果不佳或者患者預后不良的重要分子標志物。國內的研究顯示[9],尿路上皮癌相關1基因對患者的Mir-27b存在顯著性的調節作用,從而影響化療藥物阿霉素以及順鉑的耐藥性。目前關于lncRNA PVT1對于腫瘤藥物的化療藥物的敏感性的研究較少,近年來的研究發現,lncRNA PVT1基因的表達水平與結直腸癌以及胰腺癌的耐藥情況呈現顯著的相關性。國內的研究顯示,在順鉑耐藥的胃癌患者的病灶組織中發現,lncRNA PVT1呈現顯著的上升水平,提示,lncRNA PVT1水平的異常升高,對于患者的順鉑耐藥具有顯著的預測價值[10]。

在本研究中,通過對患者的lncRNA PVT1基因表達水平與耐藥以及生物學行為的研究顯示,隨著患者的疾病進展,患者的lncRNA PVT1呈現顯著上升,同時通過對治療效果與lncRNA PVT1水平的相關性分析,隨著抑癌率的顯著下降,患者的lncRNA PVT1呈現顯著上升水平。細胞學的實驗已經證實[11],在腫瘤細胞的培養中,lncRNA PVT1基因的沉默作用,可進一步組織腫瘤細胞的增殖活性,同時將腫瘤細胞的增殖活動阻滯到G1期[12],進一步促進腫瘤細胞的凋亡,提示在臨床治療中,通過對患者的lncRNA PVT1基因的沉默作用,顯著提升化療的敏感性。同時也有研究顯示,lncRNA PVT1可通過對患者的COP1的顯著性干擾作用,進一步提升STAT3泛素化的降解作用[13],同時患者的OTC4的轉錄激活蛋白的表達水平顯著升高,而OTC4是腫瘤細胞的重要轉錄因子,lncRNA PVT1通過對患者的COP1/STAT3/OTC4的顯著性調節作用,進一步促進癌細胞的轉移。王冰等[14]通過對機體的lncRNA PVT1水平與化療的敏感性分析,隨著患者的lncRNA PVT1水平的上升,患者的化療敏感性顯著下降。在細胞學的研究中,過表達的lncRNA PVT1對于胃癌細胞的遷移能力顯著升高,同時lncRNA PVT1還可通過對NO水平的顯著提升作用,進一步刺激局部病灶部位的炎性反應以及氧化應激反應,對于患者的腫瘤細胞的進展具有顯著的意義[15]。

但是本研究還存在一定的局限性,由于納入本研究的樣本量較小,同時對于患者的癌癥組織以及癌旁組織的選材位置難以形成統一的標準,結果可能存在一定的選擇性偏倚。

綜上所述,胃癌腫瘤組織中PVT1基因水平與化療藥物對胃癌組織抑制率及胃癌細胞生物學行為呈現顯著的相關性,可作為日后治療的重要靶點。