非小細(xì)胞肺癌患者Ezrin和Moesin表達(dá)及其臨床意義

宋 璐 李紅燕 王少芳

肺癌為常見惡性腫瘤疾病之一,發(fā)病率高、死亡率高,屬于腫瘤死亡的主要原因之一[1-2]。其中非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中常見的疾病類型之一,主要特點為腫瘤細(xì)胞分裂及轉(zhuǎn)移較晚,早期階段癥狀不具有特異性,待確診后大部分患者處于中晚期階段[3-4]。目前主要采用手術(shù)、放化療等方式治療,但是臨床實踐發(fā)現(xiàn),此類患者總生存率較低。因此,積極加強對NSCLC疾病標(biāo)志物的研究對于制定相應(yīng)治療方案尤為重要。膜突蛋白(Ezrin)屬于一類膜細(xì)胞骨架連接蛋白,主要通過與細(xì)胞表面相關(guān)受體或者黏附分子等相互結(jié)合,進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附性,最終調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的侵襲以及轉(zhuǎn)移程度[5]。膜結(jié)構(gòu)伸展刺突蛋白(membrane structure stretched spike protein,Moesin)屬于ezrin-radixin-moesin(ERM)家族中關(guān)鍵成員之一,主要功能為連接肌動蛋白細(xì)胞骨架及跨膜受體[6]。Moesin、Ezrin在多種腫瘤細(xì)胞中存在異常表達(dá)現(xiàn)象,主要參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、浸潤等,屬于關(guān)鍵潛在靶分子。本次研究主要探討NSCLC患者Ezrin、Moesin表達(dá)及其臨床意義,為此類疾病患者預(yù)后及治療提供指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 研究對象

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 均符合《NCCN 2008年非小細(xì)胞肺癌臨床實踐指南更新》中關(guān)于NSCLC的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7];均以術(shù)后病理學(xué)檢查作為金標(biāo)準(zhǔn);年齡18～60歲;均無放化療治療史;均無其他合并癥;可見轉(zhuǎn)移灶(≥2 cm)。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 全身性感染性疾病;嚴(yán)重肝臟、腎臟類重要臟器功能障礙;長時間免疫抑制劑的患者;其他惡性腫瘤疾病史者;入院資料不完整。

1.1.3 研究對象 獲取2017年1月至2020年12月在我院就診的NSCLC患者120例為研究對象,所有研究對象均同意術(shù)中留取病灶組織標(biāo)本及癌旁組織。其中男性88例,女性32例;年齡≥55歲66例,年齡<55歲54例;組織學(xué)類型:腺癌92例,鱗狀細(xì)胞癌28例;臨床分期:Ⅰ期20例,Ⅱ期76例,Ⅲ期24例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:有96例,無24例;吸煙史:有吸煙史77例,無吸煙史43例;分化程度:未分化+低分化患者76例,高分化患者44例。

1.2 研究方法

1.2.1 主要試劑來源 抗Ezrin蛋白單克隆抗體(生產(chǎn)廠家:福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司,型號:MAB-0351);抗Moesin蛋白單克隆抗體(生產(chǎn)廠家:上海億欣生物科技有限公司,型號:MRM-009);DAB底物試劑盒(生產(chǎn)廠家:上海炎熙生物科技有限公司,規(guī)格:500 ml)。

1.2.2 免疫組織化學(xué)染色法 獲取上述NSCLC組織、癌旁組織標(biāo)本,予以石蠟包埋,切片厚度為3 m,60 ℃烤片,1 h后脫水處理,加EDTA修復(fù),再分別予以蒸餾水、10%過氧化氫溶液,孵育半小時后,再予以PBS溶液清洗,3次×3 min,分別加入Ezrin單克隆抗體(1∶50)及Moesin蛋白單克隆抗體(1∶200),37 ℃環(huán)境下孵育,1 h后,加入PBS溶液清洗,3次×3 min,再加入二抗抗體(1∶2000),37 ℃環(huán)境下孵育,20 min后再加PBS溶液清洗,復(fù)染、脫水。

結(jié)果判定[8]:結(jié)果判定:選取5個視野,每個視野包括100個細(xì)胞,記錄陽性細(xì)胞占比,根據(jù)著色細(xì)胞比例計分,陽性細(xì)胞占比低于5%記為0分,陽性細(xì)胞占比為5%～25%記為1分,陽性細(xì)胞占比為26%～50%記為2分,陽性細(xì)胞占比超過50%記為3分。根據(jù)著色的強度計分,不著色記為0分,淺黃色記為1分,棕黃色記為2分,棕褐色記為3分。陰性表達(dá)表示著色細(xì)胞占比與著色強度的乘積得分低于4分;陽性表達(dá)表示著色細(xì)胞占比與著色強度的乘積得分超過4分。

1.2.3 隨訪 采用電話的形式進(jìn)行隨訪,術(shù)后每3個月隨訪1次,共隨訪1年,隨訪過程中無失訪的患者。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 Ezrin、Moesin在NSCLC組織及癌旁組織中的表達(dá)

NSCLC組織Ezrin、Moesin陽性表達(dá)率均顯著高于癌旁組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=26.696,P=0.000;χ2=28.254,P=0.000),見表1。

表1 Ezrin、Moesin在NSCLC組織及癌旁組織中的表達(dá)(例,%)

2.2 Ezrin、Moesin陽性表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

Ezrin、Moesin在不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中進(jìn)行比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Ezrin、Moesin陽性表達(dá)在不同性別、年齡、組織學(xué)類型、分化程度方面比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),且Ezrin、Moesin陽性表達(dá)與吸煙史無關(guān)(P>0.05),見表2。

表2 Ezrin、Moesin陽性表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例,%)

2.3 Ezrin、Moesin表達(dá)間的關(guān)系

Ezrin、Moesin蛋白表達(dá)間呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.527,P=0.005),見表3。

表3 Ezrin、Moesin表達(dá)間的關(guān)系/例

2.4 隨訪12個月的生存情況

隨訪1年,Ezrin、Moesin陽性表達(dá)患者生存率均顯著低于對應(yīng)陰性表達(dá)(χ2=5.099,P=0.024;χ2=12.485,P=0.000),見表4、圖1、圖2。

圖1 Ezrin表達(dá)與NSCLC患者的生存曲線

圖2 Moesin表達(dá)與NSCLC患者的生存曲線

表4 隨訪1年的生存情況

3 討論

Ezrin屬于細(xì)胞骨架蛋白,主要功能為將細(xì)胞外信號分子傳遞至細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白的分子。多項研究均表示[9-10],Ezrin蛋白主要通過放大或者協(xié)同細(xì)胞表面轉(zhuǎn)移信號分子,信號轉(zhuǎn)導(dǎo)平衡受到影響,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移,最終參與細(xì)胞轉(zhuǎn)移。Ezrin蛋白異常高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,由此,其可能成為潛在分子靶點。本次研究發(fā)現(xiàn)與癌旁組織比較,NSCLC組織中Ezrin蛋白陽性表達(dá)均顯著更高。且還發(fā)現(xiàn)其與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)。另外在Lee等[11]研究中,研究也發(fā)現(xiàn)Ezrin在不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)異常上升,表明Ezrin與腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在關(guān)系,進(jìn)一步證實本研究結(jié)果。Ezrin陽性表達(dá)患者生存率明顯低于陰性表達(dá)者,表明Ezrin可作為預(yù)測NSCLC患者預(yù)后指標(biāo)。

Moesin在多種惡性腫瘤疾病中表達(dá)均異常,如胃癌、喉癌及肝癌等,其主要通過調(diào)節(jié)粘附分子表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤程度,最終對患者預(yù)后恢復(fù)產(chǎn)生不良影響[12]。本研究發(fā)現(xiàn)Moesin在NSCLC組織表達(dá)顯著高于癌旁組織,且還發(fā)現(xiàn)Moesin表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。表明Moesin參與了NSCLC疾病發(fā)生和發(fā)展,且與腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究結(jié)果與目前研究報道具有一致性。本次研究結(jié)果還顯示,Moesin陽性表達(dá)患者生存率明顯低于陰性表達(dá)者,表明臨床上可通過檢測Moesin水平評估患者預(yù)后恢復(fù)情況及治療效果。

國外一項研究稱[13],Moesin、Ezrin常共同表達(dá)在細(xì)胞膜表面,主要參與維持細(xì)胞形態(tài)及運動過程,且還表明Moesin、Ezrin表達(dá)存在較好的相關(guān)性,進(jìn)一步參與多種腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展。而本次研究研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn),Ezrin、Moesin蛋白表達(dá)之間呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(γ=0.527,P=0.005)。說明Ezrin和Moesin可能共同參與NSCLC進(jìn)展,但具體機制有待深入研究。

綜上所述,Ezrin和Moesin在NSCLC組織中均呈現(xiàn)高表達(dá),均與NSCLC臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在關(guān)系,通過聯(lián)合檢測上述指標(biāo)可用于預(yù)測患者預(yù)后,具有一定指導(dǎo)意義。但本研究也存在局限性,樣本量偏少,且Ezrin和Moesin蛋白在NSCLC中的具體分子機制還需深入探討。