CCR7、FAM96A蛋白在肝癌組織中的表達及臨床意義

孫正路 王航宇 張艷停

原發性肝癌屬于常見惡性腫瘤,目前在惡性腫瘤中排名第4位,且是第2位腫瘤致死病因[1-2]。原發性肝癌有肝細胞癌、肝內膽管癌、混合型肝細胞癌-膽管癌,病理學類型不同,發病機制、生物學行為、組織病理學等也不同,其中肝細胞癌占比較高[3-4]。肝癌患者早期臨床癥狀比較隱匿,大多數患者癥狀明顯時便已發展至中晚期階段,延誤最佳手術治療時機[5-6]。另外也有研究稱,肝癌患者5年存活力僅為10%,其中預后差、復發轉移均是導致肝癌患者存活率低的關鍵原因[7]。由此,進一步了解肝癌復發轉移存在的分子機制,積極尋找具有特異性腫瘤標志物具有重要意義。趨化因子屬于一類小分子蛋白質,其與腫瘤侵襲轉移存在關系[8]。CCR7是7次跨膜受體G蛋白歐聯受體,多項研究均報道[9-10],CCR7可參與腫瘤細胞多種生物學行為,如增殖、遷移、血管形成等,并在其中發揮了重要作用。96序列相似的家庭成員(FAM96)A屬于一類凋亡激活蛋白,主要存在于有絲分裂[11]。研究報道[12-13],FAM96可參與細胞增殖、凋亡等過程,且其表達水平與肝癌進展有關。本次研究主要探討CCR7、FAM96A蛋白在肝癌患者中的表達及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究對象 收集2019年9月至2023年1月在本院就診的肝癌患者76例,其中男性50例,女性26例,年齡30～72歲,平均年齡(48.31±10.52)歲,腫瘤大小≤5 cm 32例,>5 cm 44例,腫瘤數目:單發46例,多發30例,乙肝陽性55例,陰性21例,肝硬化52例,血清AFP水平(25.35±8.27)ng/mL,門靜脈癌栓27例,肝外轉移陽性22例,陰性54例,Child分級:A級53例,B級23例,TNM分期:早期42例,中晚期34例。

1.1.2 入選標準 納入標準:經手術病理、影像學等相關檢查確診;入院資料完整;既往未予以其他抗腫瘤治療;年齡>20歲;同意采用腹腔鏡肝癌根治術。排除標準:合并神經系統疾病、其他惡性腫瘤疾病等;合并繼發性肝癌或肝膿腫血管瘤等;心、肝、腎等重要臟器功能異常;無法正常交流;正在參與其他臨床研究;中途退出本研究。

1.2 研究方法

1.2.1 主要材料 兔抗人CCR7、FAM96A單克隆抗體以及二抗抗體均來源于Abcam公司,總蛋白抽提試劑盒及蛋白濃度監測試劑盒來源于Invitrogen公司,0.05%胰蛋白酶來源于Sigma公司。

1.2.2 免疫蛋白印跡實驗(Western blot,WB)檢測CCR7、FAM96A蛋白表達 稱取0.04 g肝癌組織和0.04 g癌旁組織,加入800 μL全蛋白提取液,進行蛋白定量,獲取120 μg上樣,再予以5.0%濃縮膠、15%分離膠,采用SDS-PAGE電泳,轉移蛋白于聚偏氟乙烯(PVDF)膜,予以5%脫脂奶粉稀釋后的CCR7、FAM96A、一抗抗體,并進行孵育處理,于4 ℃環境下過夜,采用辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)標記二抗抗體,37 ℃環境下孵育,化學發光法顯影,條帶灰度值經灰度掃描儀分析獲取。

1.3 觀察指標

統計CCR7、FAM96A蛋白在肝癌及癌旁組織中的表達,及CCR7、FAM96A蛋白與肝癌臨床病理特征的關系。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 CCR7、FAM96A蛋白在肝癌及癌旁組織中的表達比較

肝癌組織中CCR7蛋白表達量顯著高于癌旁組織,FAM96A蛋白表達量顯著低于癌旁組織,差異均具有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 CCR7、FAM96A蛋白在肝癌及癌旁組織中的表達比較

2.2 CCR7、FAM96A蛋白表達量與肝癌臨床病理特征的關系

肝癌組織中CCR7、FAM96A蛋白表達與腫瘤大小、門靜脈癌栓、肝外轉移、Child分級、TNM分期有關(P<0.05),與患者性別、年齡、腫瘤數目、乙肝、肝硬化、血清AFP水平無關(P>0.05),見表2。

表2 CCR7、FAM96A蛋白表達量與肝癌臨床病理特征的關系

2.3 肝癌組織中CCR7、FAM96A蛋白表達的關系

相關性分析顯示,CCR7蛋白表達與FAM96A蛋白無明顯相關性,相關性系數γ=0.053,P>0.05。

3 討論

臨床常采用手術、放化療、介入手術等用于治療肝癌[14-15]。研究報道[16],手術治療早期肝癌患者1年存活率可達到80%,5年存活率僅僅達到50%。但目前臨床主要面對肝癌早期診治難度、復發轉移等問題。由此,積極尋找有效手段判斷肝癌病情具有重要意義。近年來,隨著研究深入,關于肝癌分子機制受到越來越多研究學者的關注。

趨化因子屬于一類分泌型小分子蛋白質,能夠促進細胞發生趨化運動,其受體是可結合趨化因子的7次跨膜G蛋白偶聯受體[17]。CCR7屬于CC類趨化因子受體成員之一。多項研究均表示[18-20],CCR7可參與多種腫瘤疾病發生和發展,如非小細胞肺癌、乳腺癌及黑色素瘤等,且還與腫瘤細胞轉移、侵襲等有關。癌組織與癌旁組織差異表達屬于進一步分析基因與腫瘤疾病關系的關鍵,差異表達的基因在腫瘤發生和發展中具有重要作用,常作為潛在的控制腫瘤細胞的標志物。本次研究發現,CCR7在肝癌組織以及癌旁組織中存在差異表達,且在肝癌組織中表達明顯更高。肝癌疾病的進展與原癌基因、抑癌基因異常表達有關。此項研究結果說明,CCR7在肝癌進展中發揮重要作用,可能屬于癌基因,經多種間接作用促進肝癌進展。為進一步分析CCR7在肝癌中的分子機制,分析其與肝癌組織病理特征的關系。結果發現,CCR7與腫瘤大小、門靜脈癌栓、肝外轉移、Child分級、TNM分期有關。這一結果與目前相關研究報道具有一致性[21]。AFP水平常用于作為肝癌診斷、治療及預后評估指標。但僅僅60%左右肝癌患者表現為AFP水平上升,因此,以AFP水平用于診斷漏診率高[22]。由此提示CCR7可成為肝癌標志物。

研究稱[23],FAM96A可與甲基磺酸敏感性基因19、著色性干皮病基因D組成蛋白復合物,參與腫瘤疾病進展。研究報道,FAM96A可參與有絲分裂過程,進而調節腫瘤細胞生物學行為。另外也有研究表示[24],FAM96A可作為抑癌基因控制肝癌進展。一項基礎實驗研究稱[25],FAM96A可抑制腫瘤細胞增殖,并誘導其凋亡。本次研究結果顯示肝癌組織FAM96A蛋白表達明顯高于癌旁組織,表明FAM96A可能參與肝癌進展。結果還發現,FAM96A與腫瘤大小、門靜脈癌栓、肝外轉移、Child分級、TNM分期有關。進一步說明FAM96A異常表達可能參與肝癌疾病的發生和發展。分析其原因,FAM96A可能調控有絲分裂過程,誘導細胞凋亡,而當FAM96A表達異常下降,肝細胞分裂水平上升,腫瘤細胞的惡性程度增加。另外也有研究稱[26],FAM96A基因表達沉默也可影響肝癌細胞生物學行為。

CCR7、FAM96A均參與肝癌的發生和發展,但是經相關性分析發現,兩者并無明顯相關關系。分析原因可能與樣本量少有關。但通過檢測CCR7、FAM96A水平可判斷肝癌疾病嚴重程度。

綜上所述,CCR7蛋白在肝癌組織呈現高表達,FAM96A蛋白在肝癌組織呈現低表達,兩者水平均與肝癌發生和發展密切相關。本研究存在一些局限性,尚未觀察肝癌患者預后情況,CCR7、FAM96A蛋白表達與預后復發的關系有待進一步探討。