維生素D、淋巴細胞亞群與2型糖尿病患者頸動脈斑塊的相關性研究

莊翠俠,季學磊,祝臘香,楊俊平,陳 燕,王 妍

(蕪湖市第二人民醫院 1.全科醫學科;2.內分泌科,安徽 蕪湖 241000)

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一種代謝紊亂性疾病,其患病率逐年升高,最新統計數據顯示,中國糖尿病和糖尿病前期發病率分別為12.8%和35.2%[1],已高居全球首位,近年研究發現血清維生素D水平降低與T2DM風險增加有關[2],血清維生素D水平低的人群更容易發展成糖尿病[3],這可能是維生素D水平過低加劇了高風險人群的糖尿病發生率。與此同時,一項Meta分析顯示,中高劑量補充維生素D(>1 000 IU/d),顯著降低了T2DM的發病風險[4],提示每日膳食補充維生素D可以顯著降低糖尿病的發生概率。心腦血管病變是糖尿病患者最主要并發癥,其病理基礎為血管的動脈粥樣硬化。由于頸動脈壁增厚和斑塊被認為是動脈粥樣硬化的早期形態學改變,也是全身動脈粥樣硬化的早期標志,因此糖尿病并發的動脈粥樣硬化常常導致患者出現頸動脈斑塊[5]。研究發現糖尿病并發頸動脈斑塊的患者具有更低的血鈣水平和維生素D水平,維生素D濃度可作為全身動脈粥樣硬化的預測指標,尤其是25羥維生素D3[25-hydroxyvitamin D3,25(OH)D3]的水平和動脈粥樣硬化的程度顯著相關[6-7]。

T2DM患者細胞免疫同樣存在異常,細胞亞群的紊亂與血糖升高和胰島β細胞早相分泌功能缺陷明顯相關,尤其是CD3、CD4和CD8+T細胞,聯合三者檢測有利于評估T2DM患者胰島分泌功能[8]。有研究認為糖尿病患者的胰島素分泌水平與CD8+T細胞呈負相關,患者體內的CD4+T細胞和CD3+T細胞更少[9]。也有研究表明外周血CD4+T細胞CCR5表達水平的升高與頸動脈狹窄具有正相關性,CD4+T細胞的活化或許參與了頸動脈斑塊的形成及發展[10-11]。上述結果表明頸動脈斑塊是否和糖尿病患者的免疫系統之間具有相關性目前尚不清楚。因此本研究探究糖尿病并發頸動脈斑塊和維生素D以及淋巴細胞之間的相互關系,觀察三者之間是否具有相關性,以此提示患者的糖尿病發展程度和有效的治療措施。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集蕪湖市第二人民醫院2020年10月～2022年11月住院的T2DM患者41例作為研究對象,其中男21例,女20例,年齡28.00～88.00(62.90±12.49)歲;根據頸動脈彩超結果提示有無頸動脈斑塊將患者分為對照組17例和斑塊組24例。所有T2DM患者符合《中國2型糖尿病防治指南(2020版)》診斷標準。排除嚴重肝腎功能障礙、糖尿病酮癥等糖尿病急性并發癥、自身免疫性及其他內分泌性疾病、惡性腫瘤、感染、結締組織病及其他骨代謝疾病以及近期服用任何能影響體內維生素D含量的藥物。本研究經醫院倫理委員會批準[2022論文倫審第(4)號],所有受試者均已知情同意。

1.2 方法

1.2.1 收集患者一般資料 所有患者入院后,首先詳細詢問患者的病史,包括既往病史、吸煙、飲酒、運動等生活方式信息并記錄患者在靜息狀態下測量身高、體質量,測量血壓,次日清晨空腹采靜脈血,采用AVDIA2400全自動生化儀測定(德國西門子公司)檢測各項指標,如空腹血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C);血清總25羥維生素D[25(OH)D]水平濃度檢測由金域醫學檢驗中心和檢驗科分別完成。

1.2.2 頸動脈彩超檢查 頸動脈的動脈硬化程度采用美國GE公司生產的Vivid7彩色多普勒超聲儀檢測頸動脈來評估,探頭頻率為7.5～12.0 MHz,通過檢查雙側頸總動脈、頸外動脈及頸動脈內膜中層厚度(Intimamedia thickness,IMT),將IMT≥1.2 mm或局限性回聲突出官腔確定為斑塊。

1.2.3 外周血T細胞數量檢測方法 采用流式細胞儀以單克隆抗體免疫熒光法檢測淋巴細胞亞群T細胞、B細胞和NK細胞。采用常用的熒光標記例如FITC、PE、PerCP和APC等分別偶聯抗體CD3、CD8、CD16、CD56、CD4、CD45和CD19。以外周血PBMC約100 μL分別加入相應熒光抗體20 μL,混勻后室溫避光孵育20 min,離心5 min,棄上清,用PBS漂洗后上機檢測,采用美國Beckman Coulter公司流式細胞儀檢測細胞占比并統計細胞數量。

2 結果

2.1 兩組患者臨床及生化指標比較 結果顯示,斑塊組患者年齡大于對照組(P<0.05),總25(OH)D水平和CD3+CD4+T細胞比例均低于對照組(P<0.05),而兩組患者其他指標差異均無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 斑塊組與對照組臨床及生化指標對比

2.2 T2DM患者頸動脈斑塊的多因素Logistic回歸分析 根據單因素分析結果,按照P<0.10的標準,共有年齡、收縮壓、總25(OH)D水平和CD3+CD4+T細胞比例等7個變量進入多因素Logistic回歸模型(向前法)。結果顯示,總25(OH)D水平(OR=1.176,95%CI:1.011～1.368)及CD3+CD4+T細胞比例低(OR=1.129,95%CI:1.007～1.266)為頸動脈斑塊形成的獨立危險因素(P<0.05),見表2。

表2 T2DM患者頸動脈斑塊的Logistic回歸分析

2.3 T2DM患者總25(OH)D水平與各淋巴細胞亞群的相關性分析 結果顯示,總25(OH)D與CD3+T細胞(r=0.105)、CD19+B細胞(rs=-0.105)、CD3+CD4+T細胞(r=0.206)、CD3+CD8+T細胞(r=-0.132)、NK細胞(rs=-0.063)和CD4/CD8(rs=0.132)相關性均無統計學意義(P>0.05)。

3 討論

已知糖尿病可產生多種并發癥,其中最嚴重的就是可能導致全身動脈粥樣硬化,糖尿病對大血管的損害先后表現為大血管內壁內膜增厚,粥樣斑塊形成,管腔狹窄,最終導致動脈粥樣硬化,檢測頸動脈中央層厚度及斑塊形成情況可實時檢測動脈粥樣硬化的早期形態改變,是全身動脈粥樣硬化的早期標志。因此,檢測頸動脈中央層血管內壁增厚以及斑塊形成情況可以作為預測糖尿病嚴重程度的重要指標。本研究顯示,總25(OH)D水平可作為T2DM患者發生頸動脈粥樣硬化的獨立影響因素,這與文獻報道相符[6,12]。總25(OH)D水平低是T2DM患者頸動脈粥樣硬化的危險因素,可在糖尿病早期獲知血清總25(OH)D水平,以此評估糖尿病患者動脈粥樣硬化的風險,可以盡早進行干預,以防腦卒中、冠心病等心血管并發癥的發生。

在免疫細胞中,T細胞被認為是調節動脈粥樣硬化的關鍵因素[13]。文獻報道,T2DM患者的淋巴細胞亞群會出現變化,并與胰島素分泌水平密切相關[11,14],因此淋巴細胞亞群可以提示T2DM患者的嚴重程度和并發癥風險。有文獻報道,在單純急性腦梗死患者[15]和急性冠脈綜合征患者[16]中,T細胞免疫功能失調和頸動脈斑塊具有相關性。提示免疫細胞功能失調和頸動脈斑塊的形成具有直接關系。目前,有研究認為糖尿病患者的胰島素水平與CD8+T細胞呈負相關,患者往往具有更高的CD8+T細胞,而具有更少的CD4+T細胞和CD3+T細胞,并且CD4+/CD8+降低[9]。也有文獻認為CD4+T細胞在糖尿病合并動脈粥樣硬化的患者中是數量增多的[17]。因此關于糖尿病和淋巴細胞的數量之間的關系,目前的結果尚不十分可靠。本研究顯示,伴有頸動脈斑塊的T2DM患者的CD3+CD4+T淋巴細胞比例較對照組明顯降低,提示糖尿病患者機體免疫失調可能參與到動脈粥樣硬化過程中,這與上述結果類似[9]。本研究具有一定局限性:單中心回顧性小樣本研究所得結果仍需多中心、大樣本臨床研究來驗證;由于納入樣本量較少,僅將病例分為斑塊組和對照組未能體現患者間頸動脈斑塊的不同嚴重程度。

綜上所述,本研究提示總25(OH)D水平低為糖尿病患者頸動脈斑塊形成的獨立危險因素,而淋巴細胞亞群中CD3+CD4+T細胞比例也可能與頸動脈斑塊形成相關,未來仍需擴大樣本進一步探索。