過敏性紫癜患兒濾泡輔助性T細胞及其亞群水平變化的臨床意義

白跳艷

西安醫學院第一附屬醫院檢驗科,陜西西安 710016

過敏性紫癜為兒童常見疾病,主要臨床癥狀包括下肢及臀部紫癜、關節疼痛或關節炎、腹痛等,且患兒出現腎功能損害的概率達20%,嚴重影響患兒健康[1]。研究發現,過敏性紫癜常見于10歲以下兒童,尤其是4～6歲年齡段,并且該病復發率高,給患兒家庭及社會帶來較大負擔[2-3]。目前關于過敏性紫癜的發病機制仍處于探索階段,眾多研究均表明,免疫功能紊亂是引起過敏性紫癜的重要因素[4-5]。隨著對機體免疫功能紊亂研究的加深,有研究者認為過敏性紫癜可能與濾泡輔助性T細胞(Tfh)有關[6]。Tfh屬于CD4+T細胞亞群,其可表達趨化因子受體5(CXCR5),輔助B細胞誘導抗體應答,在B細胞轉化中具有重要調控作用。根據Tfh表面趨化因子表達情況,可將其分為Tfh1(CCR6-CXCR3+Tfh)、Tfh2(CCR6-CXCR3-Tfh)、Tfh17(CCR6+CXCR3-Tfh)3個亞群,后二者能夠輔助B細胞分化成漿細胞,繼而產生免疫球蛋白[7-8]。以往有研究報道Tfh及亞群參與了兒童過敏性紫癜發病過程,但主要聚焦在作用機制及紫癜性腎炎的發生[9-10],而關于Tfh及其亞群與患兒預后關系的報道卻較為少見。本研究通過觀察過敏性紫癜患兒Tfh及亞群水平,并分析其與患兒病情及預后的關系,以期為臨床改善患兒預后提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年8月至2022年1月西安醫學院第一附屬醫院(以下簡稱本院)收治的114例過敏性紫癜患兒作為觀察組,其中男60例,女54例;年齡4～13歲,平均(9.83±1.96)歲。納入標準:(1)符合過敏性紫癜診斷標準[11];(2)年齡3～14歲;(3)入組前未使用過糖皮質激素或其他免疫抑制劑。排除標準:(1)存在嚴重感染性疾病;(2)有系統性紅斑狼瘡、腎病綜合征等免疫系統疾病史;(3)合并心、肝、肺等重要臟器功能障礙;(4)有過敏性鼻炎、支氣管哮喘等過敏性疾病史。另選擇同期于本院行體檢的57例健康兒童作為對照組,其中男34例,女23例;年齡5～14歲,平均(9.91±2.03)歲。兩組研究對象性別、年齡比較,差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本次研究符合《赫爾辛基宣言》,患兒家屬均知情同意。

1.2儀器與試劑 FACSCantoⅡ型流式細胞儀購自BD Biosciences公司,CD3-BV510、CXCR3-PE、CXCR5-PECY7、CCR6-PerCP-Cy5.5均購自BD Biosciences公司,紅細胞裂解液購自天根生化科技北京有限公司,CD4-FITC購自北京四正柏公司。

1.3方法

1.3.1Tfh及亞群水平檢測 采集受檢者清晨空腹靜脈血3 mL,肝素鈉抗凝,分成3管,第1管加入CD3-BV510、CD4-FITC,第2管加入CD3-BV510、CD4-FITC、CXCR5-PECY7,第3管加入CD3-BV510、CD4-FITC、CXCR3-PE、CXCR5-PECY7、CCR6-PerCP-Cy5.5,振蕩混勻后室溫下避光孵育30 min,之后向每管加入2 mL紅細胞裂解液,振蕩混勻,靜置10 min后以3 000 r/min離心3 min,除去上清液,加入1 mL磷酸鹽緩沖液(PBS),振蕩混勻,再次以3 000 r/min離心3min,除去上清液,重復相關操作,向得到的液體中加入200 μL PBS重懸細胞,置于流式細胞儀上檢測。

1.3.2紫癜癥狀評估 根據FESSATOU等[12]制訂的過敏性紫癜癥狀評分法對觀察組患兒紫癜癥狀(皮膚紫癜、關節、消化道、腎臟)進行評估,評分越高表示患兒過敏性紫癜癥狀越嚴重。

1.3.3預后評估 觀察組患兒出院后均進行隨訪,隨訪截止日期為2022年9月30日,記錄隨訪期間患兒過敏性紫癜復發情況,若復發則判為預后不良,若無復發則判為預后良好。

2 結 果

2.1觀察組和對照組Tfh及其亞群水平比較 觀察組Tfh、Tfh2水平均高于對照組,Tfh1水平低于對照組,差異均有統計學意義(P<0.05),但兩組Tfh17水平比較,差異無統計意義(P>0.05)。見表1。

表1 觀察組和對照組Tfh及其亞群水平比較

2.2不同紫癜癥狀評分的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較 觀察組患兒紫癜癥狀評分為(5.27±1.14)分,其中≤4分38例,>4分76例。紫癜癥狀評分>4分的患兒Tfh、Tfh2水平高于紫癜癥狀評分≤4分的患兒,Tfh1水平低于紫癜癥狀評分≤4分的患兒,差異均有統計學意義(P<0.05),但不同紫癜癥狀評分患兒的Tfh17水平比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同紫癜癥狀評分的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較

2.3過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平與紫癜癥狀評分的相關性分析 Pearson相關分析結果顯示,過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh2水平與紫癜癥狀評分呈正相關(P<0.05),Tfh1水平與紫癜癥狀評分呈負相關(P<0.05),Tfh17水平與紫癜癥狀評分無明顯相關性(P>0.05)。見表3。

表3 過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平與紫癜癥狀評分的相關性分析

2.4不同預后的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較 根據隨訪結果,將觀察組患兒分為預后良好組(80例)和預后不良組(34例)。預后不良組Tfh、Tfh2水平均高于預后良好組,Tfh1水平低于預后良好組,差異均有統計學意義(P<0.05),但兩組Tfh17水平比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 不同預后的過敏性紫癜患兒Tfh及其亞群水平比較

2.5Tfh及其亞群水平對過敏性紫癜患兒預后的診斷價值 ROC曲線分析結果顯示,以預后良好為對照,Tfh、Tfh1、Tfh2評估過敏性紫癜患兒預后不良的曲線下面積(AUC)分別為0.894、0.849、0.783,診斷過敏性紫癜兒童預后不良靈敏度分別為88.24%、85.29%、76.47%,特異度分別為71.25%、70.00%、70.83%。見表5。

表5 Tfh及其亞群水平對過敏性紫癜患兒預后的診斷價值

3 討 論

盡管過敏性紫癜具體發病機制還不明確,但大量研究證實,過敏性紫癜發病時機體細胞免疫處于異常狀態,Th1/Th2、Th17/Treg細胞免疫失衡,這與過敏性紫癜的發生具有密切關聯[13]。近年來有研究發現,除了Th1、Th2等細胞外,還存在一種具有獨立效應的CD4+T淋巴細胞亞群,即Tfh。Tfh受B細胞淋巴瘤6蛋白(Bcl-6)控制,其通常遷移到淋巴濾泡,能夠同時表達CXCR5、程序性細胞死亡蛋白-1(PD-1)、誘導性共刺激分子(ICOS)等因子,可輔助B細胞產生抗體[10,14]。有研究顯示,Tfh為抗體產生的重要輔助者,其功能失調是影響多種疾病(如自身免疫性疾病、腫瘤)發生的重要因素[15]。而在對過敏性紫癜患兒的研究中發現,與無過敏性紫癜兒童比較,過敏性紫癜患兒Tfh細胞及其相關細胞因子呈高表達[16]。本研究顯示,觀察組Tfh水平明顯高于對照組(P<0.05),即過敏性紫癜患兒Tfh處于高水平,過敏性紫癜的發生可能與患兒機體Tfh水平有關,與以往研究相符。分析原因,Tfh能通過ICOS、CD40L等分子和分泌白細胞介素(IL)-10、IL-21促使次級淋巴組織濾泡生發中心初始B細胞發育,還可以促進B細胞抗體類別轉換[17],Tfh功能亢進可能會引起自身抗體非正常增殖,介導病態免疫反應,繼而參與過敏性紫癜的發生。進一步分析Tfh亞群水平,觀察組Tfh1、Tfh2水平與對照組比較,差異均有統計學意義(P<0.05),提示過敏性紫癜患兒Tfh1/Tfh2處于失衡狀態,其Tfh細胞以Thf1水平下降、Tfh2水平上升為特點亞群紊亂。

本研究結果還顯示,不同紫癜癥狀評分的過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh1、Tfh2水平比較,差異均有統計學意義(P<0.05),且過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh1、Tfh2水平與其紫癜癥狀評分均存在明顯相關性(P<0.05),提示Tfh、Tfh1、Tfh2水平與過敏性紫癜癥狀密切相關,Tfh、Tfh2水平越高、Tfh1水平越低,患兒紫癜癥狀越嚴重。Tfh異常表達越明顯,Tfh1和Tfh2失衡越嚴重,Tfh功能越亢進,自身抗體異常增殖介導的病態免疫反應也會越顯著,反映到患兒上表現為紫癜癥狀愈加明顯。目前臨床治療過敏性紫癜主要予以去除致病因素和對癥支持治療,大部分患兒經治療后可以獲得明顯改善,預后較好,但仍有許多患兒療效并不理想,容易反復發作[18]。本研究觀察不同預后患兒Tfh及其亞群水平發現,預后不良組Tfh、Tfh1、Tfh2水平與預后良好組比較,差異均有統計學意義(P<0.05),提示Tfh、Tfh1、Tfh2水平可能與患兒預后存在關聯性。ROC曲線分析結果表明,Tfh、Tfh1、Tfh2評估過敏性紫癜患兒預后不良的AUC分別為0.894、0.849、0.783,靈敏度分別為88.24%、85.29%、76.47%,特異度分別為71.25%、70.00%、70.83%,表明檢測Tfh、Tfh1、Tfh2水平有利于評估過敏性紫癜患兒預后。

綜上所述,過敏性紫癜患兒Tfh、Tfh2水平較高,Tfh1水平較低,Tfh17水平正常,Tfh、Tfh1、Tfh2水平可反映過敏性紫癜患兒病情嚴重程度,對患兒Tfh、Tfh1、Tfh2水平進行檢測,有利于評估過敏性紫癜患兒病情及預后,便于臨床醫師根據患兒病情調整臨床治療方案,盡可能改善患兒預后。