CD40基因多態(tài)性與冠心病患者并發(fā)心力衰竭的關(guān)系▲

哈斯高娃

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)中心一區(qū),內(nèi)蒙古呼和浩特市 010059)

冠心病是冠狀動脈粥樣硬化導(dǎo)致血管閉塞或狹窄,進而造成心肌損傷、心肌收縮力下降、心輸出量不足等的常見心血管疾病,部分冠心病患者可并發(fā)心力衰竭[1]。冠心病是導(dǎo)致心力衰竭的常見原發(fā)病,心力衰竭又是冠心病的終末階段,可增加患者死亡風(fēng)險。目前,心力衰竭的臨床治療手段以緩解患者臨床癥狀、控制病情進展為主[2],仍缺乏特效藥。因此,積極尋找影響冠心病患者并發(fā)心力衰竭的因素,對指導(dǎo)臨床早期干預(yù)意義重大。研究顯示,不同程度的動脈粥樣硬化患者發(fā)生心腦血管并發(fā)癥的概率不盡相同,可能與多基因變異影響血栓形成、血脂代謝、血管收縮和舒張等過程有關(guān)[3]。CD40是腫瘤壞死因子超家族成員,其基因位于20號染色體,由8個內(nèi)含子和9個外顯子組成,參與動脈粥樣硬化的發(fā)展,與心血管疾病的發(fā)生有關(guān)[4]。但關(guān)于CD40基因多態(tài)性與冠心病患者并發(fā)心力衰竭的關(guān)系,目前鮮有研究報告。鑒于此,本研究分析CD40基因多態(tài)性與冠心病患者并發(fā)心力衰竭的關(guān)系,以期為預(yù)防冠心病患者并發(fā)心力衰竭提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年5月至2021年11月內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院收治的189例冠心病患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];(2)無心房顫動、早搏等心律失常。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并認(rèn)知功能障礙、精神疾病者;(2)合并嚴(yán)重肝、腎功能不全及自身免疫性疾病者;(3)合并惡性腫瘤、心肌炎、風(fēng)濕性心臟病及其他類型心臟病者;(4)非冠心病引起的心力衰竭者;(5)合并感染、慢性炎癥,以及近3個月使用過糖皮質(zhì)激素者。189例冠心病患者中,男性103例、女性86例,年齡37～72(54.63±11.13)歲,體質(zhì)指數(shù)18.30～33.40(25.46±4.32)kg/m2,冠心病類型為隱匿型冠心病63例、心肌梗死70例、心絞痛56例,合并高血壓、高脂血癥各75例、59例,有吸煙史94例,有飲酒史98例。本研究經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),所有研究對象均對本研究知情同意。

1.2 CD40基因多態(tài)性分析 抽取患者治療前的空腹靜脈血5 mL,置于乙二胺四乙酸抗凝管,使用Blood Genome DNA Extraction試劑盒(TaKaRa公司,批號:L001752A)提取外周血基因組DNA,操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進行。通過熒光分光光度法檢測280 nm、260 nm紫外線處的A值,當(dāng)A260/A280為1.8～2.0時,表明DNA純度較好,可用于后續(xù)基因型的鑒定。另采用瓊脂糖凝膠電泳法檢測基因DNA的完整性。由上海捷瑞生物技術(shù)公司設(shè)計并合成引物,CD40基因上游引物序列為5′-CCTCTTCCCCGCCCTCTTCC-3′,下游引物序列為5′-GAAACTCCTGCGCGGTGAAT-3′。擴增體系包括2.0 μL DNA模板(濃度為100 ng/μL)、0.5 μL上游引物(濃度為20 μmoL/L)、0.5 μL下游引物(濃度為20 μmoL/L),12.5 μL脫氧核苷三磷酸預(yù)混液(濃度為2.5 mmoL/L),加入滅菌雙蒸水將總體系補充至25 μL。PCR反應(yīng)條件:94 ℃預(yù)變性3 min; 94 ℃變性30 s, 53 ℃退火45 s, 72 ℃延伸45 s,共30個循環(huán);72 ℃末端延伸5 min。PCR產(chǎn)物的酶切反應(yīng):取10 μL PCR擴增產(chǎn)物,加入6 U限制性內(nèi)切酶NcoⅠ(TaKaRa公司)進行酶切,37 ℃反應(yīng)6 h,加入2 μL 10×Loading Buffer終止反應(yīng)。用溴化乙啶對酶切產(chǎn)物進行染色,3%瓊脂糖凝膠電泳1 h,最后利用紫外可見光分析裝置(HITACHI公司,型號:U-2000型)觀察電泳條帶,判斷基因型。

1.3 心力衰竭的判斷標(biāo)準(zhǔn) 于患者入院后,參照《中國心力衰竭診斷和治療指南2018》[6]判斷患者是否并發(fā)心力衰竭,據(jù)此將其分為并發(fā)組(53例)和未并發(fā)組(136例)。

1.4 一般資料的收集 收集冠心病患者的一般資料,包括性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)、高血壓情況、高脂血癥情況、冠心病類型、吸煙史(連續(xù)或累積吸煙1年以上,平均≥1支/d)、飲酒史(連續(xù)或累積飲用啤酒、黃酒、白酒或葡萄酒等1年以上,飲酒量女性>140 g/周、男性>280 g/周)、入院時心率、入院時冠狀動脈Gensini評分[7]、入院時左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction,LVEF)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以(x±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗;計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示,組間比較采用χ2檢驗;采用Hardy-Weinberg遺傳定律檢驗兩組基因型是否處于遺傳平衡狀態(tài);采用多因素Logistic回歸模型分析冠心病患者并發(fā)心力衰竭的影響因素。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 遺傳平衡檢驗結(jié)果 并發(fā)組、未并發(fā)組CD40基因的基因型實際值與理論值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.069,P=0.079;χ2=1.427,P=0.490),提示基因多態(tài)性分布均處于遺傳平衡狀態(tài),具有群體代表性。

2.2 兩組CD40基因的基因型頻率和等位基因頻率的比較 兩組CD40基因的基因型頻率、等位基因頻率比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05),其中并發(fā)組CD40基因的CC基因型頻率和C等位基因頻率均高于未并發(fā)組。見表1。

表1 兩組CD40基因的基因型頻率和等位基因頻率的比較[n(%)]

2.3 兩組患者一般資料的比較 并發(fā)組中年齡≥60歲患者比例、心肌梗死患者比例、患者入院時冠狀動脈Gensini評分、入院時LVEF<35%患者比例均高于未并發(fā)組(均P<0.05),見表2。

表2 兩組患者一般資料的比較

2.4 CD40基因多態(tài)性與冠心病患者并發(fā)心力衰竭的關(guān)系 將冠心病患者是否并發(fā)心力衰竭作為因變量(未并發(fā)=0,并發(fā)=1),將冠心病患者的一般資料、CD40基因的基因型作為自變量(變量賦值情況見表3),進行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示,校正混雜因素后,CD40基因的基因型是冠心病患者并發(fā)心力衰竭的影響因素(P<0.05),相較于CD40基因TT基因型,攜帶CD40基因CC基因型的冠心病患者并發(fā)心力衰竭的風(fēng)險增加。見表4。

表3 變量賦值情況

3 結(jié) 論

冠心病是常見的心血管疾病,多見于老年人群,近年來其發(fā)病率呈上升趨勢[8]。流行病學(xué)調(diào)查顯示,我國成人的心力衰竭發(fā)病率約為0.9%,其隨著我國人口老齡化的加劇呈上升趨勢[9]。心力衰竭作為各種心臟疾病的終末階段,致死率高,嚴(yán)重影響人們的身體健康和生活質(zhì)量[10]。有研究顯示,冠心病患者心力衰竭的發(fā)生與年齡、吸煙、肥胖、飲酒、炎癥反應(yīng)及遺傳等多種因素有關(guān)[11-12]。有學(xué)者指出,CD40作為炎癥因子,以無活性的狀態(tài)存在于血小板,與斑塊穩(wěn)定性和心血管事件發(fā)生風(fēng)險有關(guān)[13]。CD40主要表達于B淋巴細(xì)胞,具有促進記憶性B淋巴細(xì)胞分化的作用,并且可以通過活化B淋巴細(xì)胞來促進抗體的產(chǎn)生,進而使抗體與自身抗原形成復(fù)合物,參與心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[14]。研究顯示,CD40與斑塊穩(wěn)定性密切相關(guān),在動脈粥樣硬化斑塊中廣泛表達,并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[15-16]。故本研究探討CD40基因多態(tài)性與冠心病患者并發(fā)心力衰竭的關(guān)系,以期指導(dǎo)臨床工作。

本研究結(jié)果顯示,并發(fā)組CD40基因的CC基因型頻率和C等位基因頻率均高于未并發(fā)組,校正混雜因素后CD40基因的基因型是冠心病患者并發(fā)心力衰竭的影響因素(均P<0.05),說明CD40基因可能參與冠心病患者并發(fā)心力衰竭的過程,相較于TT基因型,CC基因型可增加冠心病患者并發(fā)心力衰竭的風(fēng)險。有研究顯示,攜帶C等位基因的個體的CD40基因轉(zhuǎn)錄效率比攜帶T等位基因的個體高15%～32%,表明C等位基因可以促進CD40基因的表達[17]。而CD40基因過度激活會導(dǎo)致自身免疫性疾病或慢性炎癥性疾病患者促炎性細(xì)胞因子異常表達,誘發(fā)急性炎癥反應(yīng),影響動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性,加重心臟血管狹窄、堵塞情況,從而加重心肌細(xì)胞的缺血、缺氧,導(dǎo)致心肌細(xì)胞損傷、壞死,心肌收縮力減弱,心室泵血和充盈功能下降,進而增加患者發(fā)生心力衰竭的風(fēng)險[18]。

綜上所述,CD40基因多態(tài)性與冠心病患者并發(fā)心力衰竭有關(guān),其中攜帶CC基因型可增加冠心病患者并發(fā)心力衰竭的風(fēng)險。因此,臨床應(yīng)對攜帶上述基因型的冠心病患者給予高度關(guān)注,及時制訂相關(guān)干預(yù)措施以預(yù)防心力衰竭的發(fā)生。