CCL20/CCR6/Notch1信號通路影響卵巢癌CD44+/CD117+細胞亞群增殖能力和耐藥性的機制

計月敏,嚴 沁

(1.同濟大學附屬第一婦嬰保健院 放療科,上海201204;2.同濟大學附屬第一婦嬰保健院 婦科,上海201204)

卵巢癌在女性癌癥中死亡率排名第五位,超過半數的卵巢癌患者治療后復發并伴有遠處轉移[1-2]。化療是腫瘤治療中非常重要的一部分,無論術后輔助化療還是術前輔助化療,一些化療藥物在殺死腫瘤細胞的同時,還可能改變微環境,促進腫瘤細胞的轉移[3]。紫杉醇是一種用于卵巢癌的臨床化學治療藥物,CCL20是在紫杉醇刺激的經典活化的巨噬細胞(CAM)中上調以介導卵巢癌細胞遷移的關鍵細胞因子[4]。CCL20與趨化因子受體6(CCR6)結合激活卵巢癌細胞中上皮-間質轉化(EMT)以增強卵巢癌細胞的遷移[5- 6]。本文研究巨噬細胞和紫杉醇之間的串擾產生的促遷移作用,報道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑和儀器

小鼠抗人CD44抗體(Miltenyi Biotec公司,德國);小鼠抗人CD117抗體(Miltenyi Biotec公司,德國);流式細胞儀(Beckman Coulter公司,美國);小鼠抗人CCL20單克隆抗體(Abcam公司,英國);小鼠抗人CCR6單克隆抗體(Abcam公司,英國);小鼠抗Notch1單克隆抗體(Abcam公司,英國);小鼠抗人N-鈣黏蛋白單克隆抗體(Abcam公司,英國);小鼠抗人Snail單克隆抗體(Abcam公司,英國);小鼠抗人E-鈣黏蛋白單克隆抗體(Abcam公司,英國);TRIZOL試劑(Invitrogen公司,美國);PrimeScript RT試劑盒(Takara公司,日本);QuantStudioTM測試軟件(Thermo Scientific公司,美國);SYBR Green qPCR預混液(EZBioscience公司,美國);重組人CCL20蛋白(rhCCL20)(Abcam公司,英國);CCK-8試劑(Abcam公司,英國);酶標儀(Thermo Scientific公司);1%苯基甲磺酰基氟化物(上海碧云天公司);RIPA裂解緩沖液(上海碧云天公司);聚丙烯酰胺凝膠(上海碧云天公司);奧德賽成像系統(LI-COR公司,美國);Transwell板(8 μm;康寧公司,美國);Matrigel基質(BD公司,美國);IX71倒置顯微鏡(Olympus公司,日本);FACS染色緩沖液(上海碧云天公司);異硫氰酸熒光素膜聯蛋白V凋亡檢測試劑盒(BD公司,美國)。……