NuSAP1、FAM83A蛋白表達與乳腺癌改良根治術后局部復發的關系

王 晶 邱獻華

乳腺癌是指發生在乳腺的良性或惡性腫瘤,根據其發病情況可分為早、中、晚三個階段[1]。乳腺良性腫瘤患者一般通過手術治療,惡性腫瘤患者早期首選手術治療,中晚期患者手術加藥物或放療、化療等綜合治療[2]。但是存在部分患者會在術后出現局部復發或遠處轉移的情況,因此能否及早的發現和治療對于疾病的預后至關重要。多項研究表明NuSAP1與FAM83A兩種因子均與乳腺癌細胞的生成、發展和轉移存在著一定關系[3],如果能夠探清兩者與乳腺癌復發之間的聯系,對于乳腺癌患者的預后來說有著重大價值。本次研究選取我院2019年1月至2020年5月期間收錄的221例乳腺癌并行改良根治術的患者作為觀察研究對象,具體研究報告內容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2019年1月至2020年5月期間收錄的221例乳腺癌并行改良根治術的患者,將術后一年之內出現復發情況的27例患者作為觀察組,其余194例未出現術后復發的患者作為對照組。納入標準:①觀察組患者經檢查均符合乳腺癌診斷標準[4];②無術前癌細胞遠處轉移;③年齡18～71歲;④患者均行改良根治術;⑤患者均為浸潤性乳腺癌。排除標準:①合并心臟病等其他臟器重大疾病者;②合并有神經系統疾病者;③孕期及分娩期婦女;④男性患者。其中觀察組27例,年齡18～68(42.38±8.33)歲;TNM分期:Ⅱ期16例,Ⅲ期11例;對照組194例,年齡18～71(43.09±8.16)歲;Ⅰ期患者109例,Ⅱ期患者61例,Ⅲ期患者24例。

1.2 方法

1.2.1 組織提取 取乳腺癌患者手術切除的腫瘤組織及其癌旁距腫瘤組織將其封存制片。

1.2.2 NuSAP1mRNA的檢測 使用實時熒光定量聚合酶聯反應法( RT-PCR)對總RNA進行提取,首先使用DEPC水將勻漿器進行處理,取出備用患者組織樣本100 mg左右,將樣本與Trizol提取液以100∶1的比例進行混合后倒入勻漿器,并使其完全混合、粉碎,將混合液倒進EP管,分裝5～6管以備用,并置于常溫環境下放置10 min,以混合液:氯仿5∶1的比例將兩種液體完全混合,于常溫環境下放置10 min,隨后進行10 min離心操作(1.2 kr/min)取其上清液以1∶1的比例加入異丙醇,常溫環境下放置15 min,再次進行10 min離心操作(1.2 kr/min),棄上清,倒入Ep管內備用,同時使用DEPC水配制出75%乙醇,將乙醇倒入處理后的樣本EP管內復行離心操作(7000 r/Min)3 min,棄上清,置于常溫環境下5 min,最后加入DEPC水至總體積35 μl。濃度測定,使用紫外分光光度計測量Total RNA濃度,保持2.0>A280/A260>1.8的范圍,并將TotalRNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定,能夠發現三條帶(5 s、18 s、28 s),在37 ℃逆轉錄15 min,及時逆轉錄為cDNA,引物序列見表1。

表1 PCR引物序列

1.2.3 FAM83AmRNA檢測 TRIZOL試劑提取兩組細胞標本中的總RNA 。將RNA逆轉錄成cDNA 并進行實時熒光定量聚合酶聯反應法檢測,檢測步驟同NuSAP1相同,引物序列如表1 。

1.3 觀察指標

(1)兩組患者術后局部復發的單因素分析;(2)兩組患者術后局部復發的多因素回歸分析;(3)NuSAP1、FAM83A與患者術后局部復發的預后價值。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 兩組患者術后局部復發的單因素分析

兩組患者的年齡對比無顯著差異(P>0.05),觀察組NuSAP1及FAM83A表達水平均高于對照組,且兩組腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉移、NuSAP1、FAM83A水平差異具有統計學意義(P<0.05),見表2。

表2 兩組患者術后局部復發的單因素分析

2.2 兩組患者術后局部復發的多因素分析

腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉移、NuSAP1、FAM83A均為患者術后局部復發的獨立影響因素(P<0.05),見表3。

表3 兩組患者術后局部復發的多因素回歸分析

2.3 NuSAP1、FAM83A水平對預測患者術后局部復發的價值

根據ROC 曲線獲得,最佳界限以NuSAP1(0.78)、FAM83A(36.86)可獲得ROC 曲線下最大面積,兩項聯合檢測結果陽性,表明乳腺癌術后局部復發與Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相關,單項檢測敏感度分別63.0%、70.4%,特異度89.7%、82.8%,且兩項聯合檢測的敏感度(77.8%)、特異度(87.9%)均高于單項檢測(P<0.05),見表4,圖1。

表4 NuSAP1、FAM83A對預測患者術后局部復發的價值

3 討論

流行病學研究顯示,乳腺癌在世界范圍內的發病率長年居高不下,據統計乳腺癌人數占比世界女性癌癥人數的兩成及以上,而這其中有將近半數的患者都位于亞洲地區的發展中國家。國內的女性乳腺癌確診人數高達三十萬每年,而且從目前來看,這個數字呈現逐年上升的趨勢[5]。國內45歲及以上的中老年患者發病率要顯著高于年輕的女性,雖然國內乳腺癌的發病率呈現上升趨勢,但是由于近年來對于乳腺癌出現各種新的治療方式,該病的死亡率正在逐漸降低[6]。近年來對于乳腺癌患者進行個體化治療,預測早期療效和預后效果的研究已經成為癌癥治療的熱門話題[7]。改良根治術在乳腺癌的治療方面占有重要地位,但是存在部分患者會因為各種原因出現術后局部復發的情況,因此如果能夠對乳腺癌根治術后的復發進行一定程度上的評估和預測,能夠對臨床癌癥治療方面起著重大影響[8]。目前來說,常用的形態影像學預測效果并不理想,而對于生物標志物方面的研究似乎可以作為新的方向,因此找到能夠預測評估癌癥術后復發的生物標志物以成為目前的重要研究方向[9]。

本次研究對兩組患者術后局部復發的單因素分析結果顯示兩組患者的年齡對比無顯著差異,腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉移、NuSAP1、FAM83A差異具有統計學意義。而多因素檢測結果也顯示腫瘤類型、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結轉移、NuSAP1、FAM83A均為術后局部復發的獨立影響因素,與以往學者研究的結果相符合。現在臨床上對乳腺癌根治術的術后復發多是根據患者病理學結果來進行判斷,眾多數據研究表明患者的腫瘤類型和腫瘤分期等因素與術后復發之間存在著密切聯系,不過指依據病理學分型結果進行判斷不能完整體現出癌癥的分子層面的表達差異[10]。NuSAP1屬于微管核蛋白的一種,它能夠在機體細胞進程中呈現循環性變化趨勢,并且NuSAP1mRNA表達狀況以及自身蛋白的表達情況接受著嚴格的管控[11]。NuSAP1的基因啟動子區域存在著能夠與轉錄因子E2F進行結合的基點,而轉錄因子則是與細胞的周期性進程存在著密切聯系。轉錄因子會對NuSAP1的轉錄情況起到調控作用,已有研究表明NuSAP1在很多癌癥中會呈現明顯過表達狀況,而這也能夠表明NuSAP1與癌細胞的侵襲和預后存在著重要聯系[12-13]。FAM83A則是屬于近年來新發現的腫瘤特異性抗原[14]。Yu等[15]的研究表明FAM83A在肺腺癌患者的癌組織中呈現過表達狀態,而在癌旁組織及正常組織都呈現低表達或不表達狀態,同時FAM83A還與病理學因素中的腫瘤分期,腫瘤類型以及孕激素等指標存在聯系[16]。與本研究結果相一致,提示該指標對于癌癥的發生、轉移及復發存在著相關關系。對NuSAP1、FAM83A與患者術后局部復發的預后價值的計算結果顯示,根據ROC 曲線獲得,最佳界限以NuSAP1(0.78)、FAM83A(36.86)可獲得ROC 曲線下最大面積,兩項聯合檢測結果陽性,表明乳腺癌術后局部復發與Survivin-mRNA、OTUD3-mRNA密切相關,單項檢測敏感度分別63.0%、70.4%,特異度89.7%、82.8%,且兩項聯合檢測的敏感度(77.8%)、特異度(87.9%)均高于單項檢測,提示兩者對乳腺癌患者術后局部復發的預測及診斷具有預后價值。

綜上所述,NuSAP1、FAM83A與乳腺癌的發生、轉移及復發都存在密切聯系,對乳腺癌術后局部復發的臨床診斷及預測具有預后價值。