CD16a mRNA在結直腸癌組織中的表達意義

李 貞 李 巖 周玙嬌

結直腸癌發病較高,由于早期表現較為隱匿,易被患者忽視,即使部分患者因早期癥狀進行檢查,也易與其他胃腸道疾病混淆,導致無法及時治療,影響預后。臨床應尋找能夠診斷患者疾病的相關標志物,以盡早明確診斷,及時治療,從而改善結直腸癌患者預后[1]。隨著對結直腸癌研究的深入,臨床發現結直腸癌的發生發展均與機體的免疫狀態關系密切[2]。正常狀態下,人體免疫系統處于穩定狀態,能夠及時辨認惡性轉變的細胞,并將其殺傷,防止疾病發生,若人體免疫系統障礙或局部免疫效應細胞功能缺失,將對免疫效應細胞的作用產生影響,無法發揮自身作用,導致腫瘤形成[3]。CD16a是一種跨膜蛋白,主要在免疫效應細胞表面表達,對抗體依賴性細胞介導的細胞毒有介導作用,當其水平出現異常表達時,提示機體可能發生腫瘤[4]。分析CD16a的mRNA表達情況對判斷患者病情或許有較高的應用價值。鑒于此,本研究進一步探討CD16a mRNA在結直腸癌組織中的表達意義。現總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月至2021年8月我院收治的結直腸癌患者86例,其中男性47例,女性39例;年齡34～83歲,平均年齡(62.75±5.16)歲;體重40～84 kg,平均體重(69.34±4.76)kg;發病位置:45例直腸,41例結腸;病理分型:38例乳頭狀腺癌,4例印戎細胞癌,26例黏液腺癌,18例管狀腺癌;TNM分期:11例Ⅰ期,25例Ⅱ期,33例Ⅲ期,Ⅳ期17例。醫學倫理委員會已批準本研究。納入標準:①所有入選者均符合《中國結直腸癌診療規范(2017年版)》[5]診斷標準,并經病理檢查確診;②無惡性腫瘤放化療、生物治療史;③患者不存在精神疾病或意識不清,對各項檢查均能較好配合;④知情同意書由患者及其家屬自愿簽署。排除標準:①復發性或多源性結直腸癌;②伴有其他惡性腫瘤疾病;③患者存在認知功能障礙,或無法進行正常交流;④存有重要臟器功能不全。

1.2 方法

所有入選者均采集病灶組織以及周圍正常腸壁組織作為標本,進行CD16a mRNA檢測,檢測方法為Real-time PCR技術,上游引物:5'-TCCAAA AGCCACACTCAAAGAC-3',下游引物5'-CTGAAGACACATTTTTACTCCCAAAC-3',將74 bp設計成CD16a引物擴增產物長度。內參基因為GAPDH,以138 bp作為引物擴增產物長度,上游引物:5'-CAGGAGGCATTGCTGATGAT-3',下游引物:5'-GAAGGCTGGGGCTCATTT-3'。自上海生工生物技術有限公司購入上述產品。RNA使用TransZol Up RNA試劑盒提取,操作步驟需嚴格按照產品說明書進行,隨后進行電泳鑒定,檢測RNA濃度,逆轉錄合成cDNA,提取2 μg總RNA進行RT-PCR反應,反應體系見產品說明書,反應條件:①94 ℃ 30 s,②94 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,連續進行45個循環重復操作,之后進行溶解分析,并計算其△Ct值,重復檢測3次,以均值作為最后結果。

1.3 觀察指標

比較結直腸癌患者病灶組織與病灶旁正常組織中CD16a mRNA含量;分析癌組織中CD16a mRNA表達與病理特征的相關性,病理特征包括性別(男、女)、年齡(≥60歲、<60歲)、發病位置(直腸、結腸)、病理分型(乳頭狀腺癌、印戎細胞癌、黏液腺癌、管狀腺癌)、病理分期(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期)、淋巴結轉移(N0、N1、N2)等。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 結直腸癌患者不同組織中CD16a mRNA含量表達情況

病灶旁正常腸壁組織中CD16a mRNA含量的△Ct值為(6.28±0.65),病灶組織中CD16a mRNA含量的△Ct值為(5.51±0.46)。不同組織中CD16a mRNA含量表達相比,差異有統計學意義(t=8.967,P=0.000)。

2.2 癌組織中CD16a mRNA表達與病理特征的相關性

不同性別、年齡、發病位置、病理分型、病理分期、淋巴結轉移的結直腸癌患者癌組織中CD16a mRNA表達相比,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 癌組織中CD16a mRNA表達與病理特征的相關性

3 討論

結直腸癌在臨床發病率較高,發病機制較為復雜,至今尚未完全明確,與飲食習慣、生活作息等多方因素有關,對患者健康及生命安全造成較大威脅。結直腸癌早期無明顯癥狀,隨著病情進展可引起血便、排便習慣改變、腸道疼痛等臨床表現,當患者出現典型癥狀后往往已發展至中晚期,預后較差。近些年隨著醫學技術不斷發展,臨床治療結直腸癌方法越來越多,尤其是放化療方案層出不窮,一定程度上提高治療效果,但結直腸癌患者5年生存率仍較低[6]。目前臨床治療結直腸癌仍以手術效果最佳,最大范圍切除病灶,可防止術后復發,從而延長患者生存時間。但臨床實踐發現,手術治療具有一定的時間窗,而早期結直腸癌由于缺乏明顯表現,檢出率較低,漏診誤診情況頻發,常導致手術治療不及時,不利于病情的控制及預后[7]。

目前臨床研究結直腸癌的重難點仍為早期診斷,若能尋找靈敏度、特異度高的相關指標,對提高結直腸癌早期檢出率、改善患者預后有重要意義[8]。一般情況下人體免疫功能較為穩定,可維持較為理想的免疫狀態,不會出現過弱或過強的反應而引發疾病[9]。機體免疫若處于平衡狀態,對于發生惡變的細胞免疫系統可準確識別并將其殺傷,阻止惡性疾病發生,一旦抗原加工缺失、抗原脫落、抗原調變,或者效應細胞表面受體不表達、缺乏抗原遞呈細胞、效應細胞表面受體表達缺失等情況,均會導致惡變細胞無法得到效應細胞結合,導致細胞出現惡性病變[10]。臨床認為機體免疫不僅參與惡性腫瘤形成,在腫瘤進展與轉移中也有所參與,分析惡性腫瘤與機體免疫功能關系有重要意義[11]。

CD16a主要表達于NK細胞、巨噬細胞、單核細胞表面,是免疫效應細胞表面的重要結合位點,屬于一種激活型受體,在細胞免疫上可發揮積極作用。臨床研究認為,CD16a高表達的免疫細胞聯合單克隆抗體比普通免疫細胞聯合單克隆抗體,大大增強ADCC作用和腫瘤殺傷能力[12]。單克隆抗體可增加對CD16a的親和力,從而增加免疫細胞產生IFN-γ的能力,故當組織中CD16a含量降低時,提示機體細胞免疫功能減弱,易導致疾病發生。mRNA是RNA分子的統稱,主要作用為將遺傳信息從DNA傳遞至核糖體上,隨后生成基因所編碼的蛋白。將基因通過RNA聚合酶轉錄成mRNA前體,之后再次進行加工可成為成熟的RNA,經翻譯后最后成為蛋白質[13]。本次研究利用PCR技術檢測結直腸癌患者組織中CD16a mRNA表達情況,結果顯示,病灶旁正常腸壁組織中CD16a mRNA含量的△Ct值為(6.28±0.65),高于病灶組織的(5.51±0.46);不同性別、年齡、發病位置、病理分期、病理分期、淋巴結轉移的結直腸癌患者癌組織中CD16a mRNA表達未見明顯差異。表明結直腸癌患者組織中CD16a mRNA表達明顯低于病灶旁正常腸壁組織,在疾病早期診斷中有一定的應用價值,但CD16a mRNA水平與病理特征無明顯相關性,無法判斷患者疾病進展情況。王磊等[14]研究顯示,癌組織與正常腸壁組織中CD16a mRNA表達存在較大差異,癌旁正常腸壁組表達更高,但CD16a mRNA水平并不會隨著病理特征改變而出現顯著變化,提示正常組織與癌組織中CD16a mRNA水平存在明顯差異,但CD16a mRNA水平不受疾病臨床特征影響,無法反映患者病情進展。究其原因為CD16a mRNA是ADCC重要的介導物質,當局部組織中其含量減少時,可導致抗體介導的細胞免疫功能下降,促使殺傷腫瘤細胞或惡性病變細胞的能力降低,使得局部組織中惡病變細胞大量增殖,導致惡性腫瘤形成[15]。由于CD16a mRNA為單一分子細胞,在鑒別結直腸癌組織與正常腸壁組織中具有較高的靈敏度,但并不會隨著病情進展而變化,故在不同病理特征結直腸癌患者組織中表達未見明顯差異。

綜上所述,正常組織與癌組織中CD16a mRNA表達存在明顯差異,在疾病早期診斷中有一定的應用價值,但CD16a mRNA水平與病理特征無明顯相關性,無法判斷患者疾病進展情況。