淺談食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)

劉艷霞，梁文文，盧 侖，劉建洋

（山東標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)技術(shù)有限公司，山東濟(jì)南 250101）

食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的重點(diǎn)工作是保障實(shí)驗(yàn)室的正常運(yùn)轉(zhuǎn)，食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)檢測(cè)方法有標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法（包含自制方法、改進(jìn)方法等）[1]。食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室為了保證檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性[2]，通常會(huì)采用方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)兩種評(píng)定方法。然而，由于部分食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)管理水平差、技術(shù)能力低、檢驗(yàn)檢測(cè)知識(shí)不足，常采用單一的方法進(jìn)行合格評(píng)定，甚至有少部分食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)無法清楚地理解方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的概念和區(qū)別，使得食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)管理存在漏洞，檢驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果存在不確定性。

為了提高食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和可靠性，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)能力，本文對(duì)方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的定義、重要性、區(qū)別和參數(shù)進(jìn)行闡述，供食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)相關(guān)人員學(xué)習(xí)、理解。

1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的定義及重要性

1.1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的定義

方法驗(yàn)證是指實(shí)驗(yàn)室通過核查，能夠提供客觀、可靠、有效的證據(jù)，用以證明該實(shí)驗(yàn)室可以滿足某一檢測(cè)方法規(guī)定的所有條件[3]。目的是證明標(biāo)準(zhǔn)方法能夠被實(shí)驗(yàn)室使用[4]。簡(jiǎn)單地說，方法驗(yàn)證是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法在食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的重現(xiàn)性、對(duì)特定方法的適應(yīng)性的確認(rèn)[5]，證明該實(shí)驗(yàn)室可以運(yùn)用該方法。

方法確認(rèn)是指實(shí)驗(yàn)室通過實(shí)驗(yàn)，能夠提供客觀的、足夠的證據(jù)予以證明某一檢測(cè)方法可以達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期，目的是對(duì)自制的方法或者標(biāo)準(zhǔn)方法經(jīng)過改進(jìn)后的方法是否能夠達(dá)到預(yù)期目的的證實(shí)過程。方法確認(rèn)的完成，表明實(shí)驗(yàn)室有足夠的技術(shù)能力重復(fù)已經(jīng)確認(rèn)的方法，并且能夠達(dá)到一定的性能水平。

如果實(shí)驗(yàn)室要使用標(biāo)準(zhǔn)方法開展實(shí)驗(yàn)，則需要進(jìn)行方法驗(yàn)證；如果實(shí)驗(yàn)室要使用非標(biāo)準(zhǔn)方法開展實(shí)驗(yàn)，則需要進(jìn)行方法確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室只有對(duì)將要使用的方法進(jìn)行方法驗(yàn)證或者方法確認(rèn)，并且符合《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià) 檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通用要求》和《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》規(guī)定，才具有相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Α?/p>

1.2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的重要性

1.2.1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有強(qiáng)制性

《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定能力評(píng)價(jià) 檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通用要求》規(guī)定，使用標(biāo)準(zhǔn)方法之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該進(jìn)行方法驗(yàn)證[6]；使用非標(biāo)準(zhǔn)方法（含自制方法、改進(jìn)方法等）前，應(yīng)進(jìn)行方法確認(rèn)[7]。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該保證優(yōu)先使用標(biāo)準(zhǔn)方法，并且保證使用的標(biāo)準(zhǔn)版本是有效的[8]。

1.2.2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有必要性

《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》規(guī)定，實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)準(zhǔn)方法之前，應(yīng)該驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)方法在該實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的人員、儀器設(shè)備、試劑及環(huán)境狀態(tài)等條件下是否能夠獲得符合規(guī)定條件的結(jié)果[3]。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法，如實(shí)驗(yàn)室自制方法、改進(jìn)方法等制定確認(rèn)程序[3]。

1.2.3 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果具有重要影響

實(shí)驗(yàn)室在使用某一方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果沒有經(jīng)過方法驗(yàn)證或方法確認(rèn)，可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)發(fā)生偏離，甚至造成檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤。所以，方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)不僅可以檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施設(shè)備、人員、環(huán)境和方法的適用性，而且可以保證數(shù)據(jù)的可靠性和準(zhǔn)確性。

2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的區(qū)別

方法驗(yàn)證與方法確認(rèn)有相似之處，即都需要提供客觀、有效的證據(jù)以證明方法滿足要求。又有不同之處，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。

2.1 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有不同的目的

方法驗(yàn)證的目的是驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室是否有足夠的能力按照標(biāo)準(zhǔn)方法開展實(shí)驗(yàn)[9]。方法確認(rèn)的目的是證實(shí)實(shí)驗(yàn)室能否合理、合法地使用該非標(biāo)準(zhǔn)方法（包含自制方法、改進(jìn)方法等）[10]。

2.2 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有不同的使用對(duì)象

方法驗(yàn)證的對(duì)象是標(biāo)準(zhǔn)方法和經(jīng)過確認(rèn)的非標(biāo)準(zhǔn)方法。方法確認(rèn)的對(duì)象非標(biāo)準(zhǔn)方法，包含修改的標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室自制的方法和超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法[3]。

2.3 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)具有不同的使用時(shí)機(jī)

方法驗(yàn)證的使用時(shí)機(jī)是實(shí)驗(yàn)室首次使用標(biāo)準(zhǔn)或者對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法有小幅改動(dòng)，如更換不同廠家的試劑或同類儀器設(shè)備。方法確認(rèn)的使用時(shí)機(jī)是實(shí)驗(yàn)室使用非標(biāo)準(zhǔn)方法之前或者使用標(biāo)準(zhǔn)方法但有較大改變，如儀器設(shè)備、使用試劑、環(huán)境條件等發(fā)生了改變。

3 方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的參數(shù)

方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的參數(shù)有檢出限、定量限、正確度、測(cè)量不確定度、精密度、穩(wěn)健度以及線性范圍等，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)預(yù)期的用途，并且綜合考慮成本、風(fēng)險(xiǎn)和技術(shù)可行性方面進(jìn)行方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)。

3.1 檢出限

檢出限分為儀器檢出限與方法檢出限[11]。用儀器將特定分析物的信號(hào)從背景中識(shí)別出來，此時(shí)分析物最低的量為儀器檢出限。用某一方法將該分析物的被測(cè)定信號(hào)從基質(zhì)中識(shí)別出來，此時(shí)分析物最低的量為方法檢出限。確定檢出限的方法很多，較為常用的方法有目視評(píng)價(jià)法評(píng)估檢出限、空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法評(píng)估檢出限、校準(zhǔn)方程的適用范圍評(píng)估檢出限和信噪比法評(píng)估檢出限。

（1）目視評(píng)價(jià)法評(píng)估檢出限。在樣品空白中加入事先已知量的某分析物，實(shí)驗(yàn)室能夠在設(shè)定條件下準(zhǔn)確檢測(cè)出該分析物最低量的方法。

（2）空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法評(píng)估檢出限。實(shí)驗(yàn)室通過實(shí)驗(yàn)的方法，加入最低量的樣品空白或分析大量的樣品空白確定檢出限。定量檢測(cè)中檢出限的一般表示方法見表1。

表1 定量檢測(cè)中檢出限的一般表示方法

（3）校準(zhǔn)方程的適用范圍評(píng)估檢出限。如果實(shí)驗(yàn)室在檢出限附近的樣品數(shù)據(jù)無法取得時(shí)，可以利用校準(zhǔn)方程的參數(shù)這一特性，評(píng)估儀器的檢出限。

（4）信噪比法評(píng)估檢出限。對(duì)于定量而言，使用已知某分析物含量的樣品的測(cè)量信號(hào)與空白樣品的測(cè)量信號(hào)進(jìn)行比較，確定實(shí)驗(yàn)室可以檢出的該分析物的最低量。常用的信噪比為3 ∶1 或2 ∶1[3]。對(duì)于定性而言，可以在空白樣品中依次分別加入已知量的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制樣品的檢出率對(duì)添加濃度的曲線。

3.2 定量限

定量限通常分為儀器定量限與方法定量限。儀器能夠準(zhǔn)確檢出并且被精準(zhǔn)定量的分析物的最低濃度或最低量稱為儀器檢出限。特定基質(zhì)中、一定可信度內(nèi)，某方法能夠準(zhǔn)確檢出并且被定量的分析物的最低濃度或最低量稱為方法檢出限。一般將空白值加上10 倍的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差或3 倍的檢出限或者高于方法確認(rèn)中使用最低加標(biāo)量的50%作為定量限。

3.3 正確度

正確度是指實(shí)驗(yàn)室通過無窮多次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，參考值和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值之間的接近程度，常用偏倚表示，而偏倚又可以通過回收試驗(yàn)計(jì)算回收率進(jìn)行評(píng)估，并且回收率的偏差要在規(guī)定的范圍內(nèi)。

3.4 精密度

某條件下，對(duì)同一被測(cè)樣品或相似被測(cè)樣品多次重復(fù)測(cè)量所得數(shù)據(jù)或測(cè)得的數(shù)據(jù)之間的一致程度即為精密度，通常用標(biāo)準(zhǔn)方法、方差或者概率分布函數(shù)表示。精密度一般分為重復(fù)性精密度與再現(xiàn)性精密度[12]，重復(fù)性精密度體現(xiàn)的是測(cè)量結(jié)果的短期偏離程度，也常用于評(píng)估某一批次實(shí)驗(yàn)中多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)可能存在的差異；再現(xiàn)性精密度體現(xiàn)的是測(cè)量結(jié)果的長(zhǎng)期復(fù)現(xiàn)性，即便是在不同的實(shí)驗(yàn)室，不同的實(shí)驗(yàn)人員使用不同的實(shí)驗(yàn)儀器，使用同一實(shí)驗(yàn)方法對(duì)同一樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有復(fù)現(xiàn)性。

3.5 穩(wěn)健度

穩(wěn)健度是指實(shí)驗(yàn)室某一條件發(fā)生變化時(shí)，對(duì)分析方法產(chǎn)生的影響程度，可以由實(shí)驗(yàn)室預(yù)先設(shè)計(jì)好某些微小的、可能的變化因素，并且逐一引入、逐一分析其影響而得出。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)室情況對(duì)可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這些因素包含但不局限實(shí)驗(yàn)室溫濕度、試劑來源、試劑和樣品的保存方法、樣品的提取等。實(shí)驗(yàn)室對(duì)其分析出的可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素作逐一改變，進(jìn)行穩(wěn)健度試驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)某一因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該再次實(shí)驗(yàn)，確定影響因素對(duì)測(cè)定結(jié)果影響的允許極限。

3.6 線性范圍

用線性計(jì)算模型定義儀器響應(yīng)與濃度的關(guān)系，該計(jì)算模型的應(yīng)用范圍稱為線性范圍。校準(zhǔn)用的校準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)均勻地分布在關(guān)注的濃度范圍內(nèi)，并且能夠覆蓋該范圍，濃度范圍通常覆蓋關(guān)注濃度的0%～150%。采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法做定量實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)至少包括6 個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)，并且線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.99。

3.7 測(cè)量不確定度

影響不確定度的因素有很多，如標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、試劑的純度、樣品的體積和質(zhì)量、樣品的預(yù)處理、試劑的加入等。測(cè)量不確定度重要的是明確指出被測(cè)量與對(duì)測(cè)量不確定度有貢獻(xiàn)的分量之間的關(guān)系、分量的分組和分解、評(píng)估測(cè)量不確定度的數(shù)學(xué)模型。通過測(cè)量不確定度進(jìn)行方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)已經(jīng)得到了廣泛的認(rèn)同。

4 結(jié)語

為了保證食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)及時(shí)開展方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)，這也是開展日常檢測(cè)工作的基本要求和必要前提。食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)該把方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)歸入質(zhì)量管理體系，用文件進(jìn)行規(guī)范，形成程序。通過方法驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)室能夠證明有能力用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；通過方法確認(rèn)，實(shí)驗(yàn)室能夠證明有能力用非標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。食品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能地完善方法驗(yàn)證和方法確認(rèn)的程序和參數(shù)，確保實(shí)驗(yàn)室所提供數(shù)據(jù)的可靠性、有效性和公正性。