城市生活飲用水微生物檢測方法研究

陳占霞，吳月云

（山東省濰坊市臨朐縣疾病預防控制中心，山東臨朐 262600）

人們對飲用水的需求量在近十年一直呈現上升趨勢，飲用水的供給質量要求也逐年提升，相關部門須做好居民飲用水的檢測工作，保障居民生活用水安全。因此，建立城市生活飲用水微生物檢測體系，嚴格規范飲用水的質量顯得尤為重要，只有這樣才能保障居民飲用水安全，提高居民飲用水品質。

1 城市生活飲用水微生物檢測結果的影響因素

1.1 檢測環境的影響

對城市生活飲用水的檢測易受外部環境的影響，特別是對于環境因素較為敏感的微生物，在檢測過程中可能會因環境變化而產生檢測困難。相關的環境因素包括溫度、濕度、空氣中的含氧量以及微生物培養基中的營養成分構成等，均會對微生物檢測結果有一定的影響。在環境因素影響加大的情況下，可能會引發水樣中微生物的大量死亡，導致微生物檢測技術無法正常、準確檢測出各項指標含量。同時，微生物檢測的操作環境也會影響檢測結果，要保證檢測操作在無菌條件下進行，防止外部環境菌群污染待檢樣本，給檢測結果帶來不確定性。

1.2 實驗設備的影響

實驗設備的精密度和靈活性也會給飲用水微生物檢測結果帶來影響，應定時對實驗設備及儀器進行維護保養，并及時更換陳舊設備，保證設備的正常運轉，避免因設備失靈導致微生物指標檢測不準確。例如，微生物檢測中常用到恒溫箱，用于對水樣樣品的培養和保存，保持其內部溫度穩定對檢測結果有直接影響，若溫度不符合標準就會導致樣品中的菌落培養不到位，造成檢測失誤。相關人員應在樣品放入之前對恒溫箱內的溫度進行嚴格細致的檢測，確保每個角落的溫度都在標準規定的范圍之內，之后再放入樣品進行培養，避免失誤的發生。

1.3 人為因素的影響

水中微生物檢測結果的準確性與實驗操作過程中的人為因素也有很大關系，微生物檢測內容復雜，細致煩瑣，對每一步操作要求都較高，檢測操作人員應嚴格按照檢測標準，遵循技術規范進行操作，若操作不當或操作不符合標準規定，會造成檢測結果不準確甚至誤差較大。對培養后的待測樣本應及時進行檢測，確保檢測的時效性，若檢測人員未能及時對樣本進行檢測，則會因樣本菌落變化甚至死亡而對檢測結果產生不利影響。

2 城市生活飲用水微生物檢測的主要內容

2.1 菌落總數

菌落總數能夠表示水樣的整體污染程度[1]。菌落總數是飲用水微生物檢測的重要指標但不是唯一指標，因為培養環境的不同對于厭氧菌或微需氧菌等菌種的檢測在菌落總數中無法體現，需根據菌種的特殊要求另行計算。

2.2 總大腸菌群

大腸菌群可以反映飲用水被人畜糞便污染的程度，可利用其與乳糖發酵生成酸液或氣體的原理對其進行測定，在這一過程中需注意創設良好的反應條件。大腸菌群的測定標準為100 mL 水樣中大腸菌群的最近似數，若數量超出飲用水微生物含量規定標準，則表明飲用水已被污染，存在安全隱患[2]。

2.3 耐熱大腸菌群

耐熱大腸菌群屬大腸菌群的一種，又名糞大腸菌群，對其的測定是對總大腸菌群的補充，也是利用其與乳糖發酵并產生酸液或氣體的原理進行測定，但需要注意的是對其的培養溫度要比其他菌種溫度更高，為44.0 ～44.5 ℃，培養時長為24 h[3]。由于大多數耐熱大腸菌群直接源于人畜糞便，因此對其的檢出更能說明飲用水源遭受了糞便污染，含有更大的腸道疾病致病可能性。測定耐熱大腸菌群指標可對飲用水污染程度有更明晰的確認，在說明水源是否被人畜糞便污染方面有更明確的指示作用。

3 城市生活飲用水微生物檢測水樣采集規則及注意事項

3.1 采集原則

水樣的采集需具有代表性，能明確代表水源區水質的整體情況，并在水樣采集后確保水樣不會受外部環境污染和其他任何因素的影響。因此，對飲用水水樣的采集要有明確的規劃，制定具體的實施細則，明確采樣地點、采樣數量和采樣方法，并具體到每份樣品的體積。對水樣的保管和運輸過程進行質量控制，保證樣本質量。

3.2 采集容器

采樣過程中采集容器的選擇對樣本質量也有很大影響，需結合具體地區的水樣采集實際情況，選用符合標準且規格適宜的采樣容器，尤其注意容器的材質、開口和體積等基本指標。特別關注容器內壁的構造，保證其對水樣成分無吸收或吸附作用，還需特別注意采集容器的防震性能和適應性，以保證樣本運輸過程中的穩定性。選擇大小合適、形狀適宜、質量良好的采集容器能幫助采樣人員快速準確地獲取所需水樣，順利開展后續工作。

3.3 自來水水樣采集原則

自來水水樣采集需重點關注出廠水的采集和末梢水的采集兩個方面。出廠水即經自來水廠處理后還未經城市居民使用的水，一般在自來水經處理后被送往城市各用水區域之前的一個點上進行采集。末梢水是經城市居民家中水龍頭流出的水，對其的采集需進行時間控制，取經水龍頭流出一定時間段之后的水作為樣品，避免管道中的析出或附著物對檢測結果產生影響。要對水龍頭進行消毒處理，以免其中的微生物菌種落入待測水樣，影響檢測結果。

3.4 水源水水樣采集原則

水源水是城市生活飲用水來源地的水，如某條河流、某個水庫等。可通過采集汲水處的水對水源地水樣進行采集。對于河流、湖泊等表層水源地的水，可直接用水桶等容器采集；對于水庫等深度水源地的水可采用直立式取水器進行水樣采集；對于泉水的水樣采集分兩種形式，自噴泉水可直接在泉水涌出口采集水樣，非自噴泉水可使用與井水水樣采集相同的方式，即采用抽水管等協助機制采集。

4 城市生活飲用水微生物檢測中各項指標的測定方式

4.1 菌落總數測定方式

先將水樣混合均勻，排除靜止條件下微生物分布不均的情況后，再進行水樣中菌落總數的測定。移取已混勻的待測樣品至培養皿中，移取儀器和培養皿均需進行嚴格消毒和無菌處理。之后將準備好的培養基按照一定規格的量倒入培養皿中，使培養皿中的待測水樣與培養基充分混合，可采用旋搖培養皿的方式幫助完成混合，切勿使用攪拌方式。最后，按照菌群的規定培養方式，對培養皿中水樣和培養基混合物進行一定時長的培養，進行菌落總數的測定。

4.2 總大腸菌群測定方式

多管發酵法是進行總大腸菌群測定的主要方法。先進行水樣和乳糖蛋白培養液的初步發酵，將二者充分混合并置入規定溫度下培養一定時長，觀察酸液或氣體的產生情況。在有酸液或氣體產生的情況下使用伊紅亞甲藍培養基對樣品進行繼續培養，以便觀測總大腸菌群的菌落特征，初步判斷菌落種類，再使用革蘭氏染色和顯微鏡對觀察結果進行進一步的確定。最后進行驗證，重復以上步驟對檢測結果進行再次驗證，保證檢出菌群確為大腸菌群。

4.3 耐熱大腸菌群測定方式

可使用與測定總大腸菌群相似的測定方式進行耐熱大腸菌群的測定，不同之處在于在初步發酵后，需進行耐熱培養，即在檢出大腸菌群的水樣管中加入EC肉湯，在44.5 ℃培養24 h，之后觀察產酸產氣情況。最后進行產酸產氣樣品的平板培養以驗證檢測結果，將樣品接種于伊紅美藍瓊脂平板上培養24 h，培養溫度為（36±1）℃[4]。培養后若有典型菌落檢出，則根據MPN 表中菌落特征的具體信息，出具檢測報告。

4.4 大腸埃希氏菌測定方式

采用EC-MUG 培養基對總大腸菌群檢測中初步發酵后產酸產氣的樣品進行培養，可測定大腸埃希氏菌的存在情況。先將產酸產氣樣品倒入裝有ECMUG 培養液的試管中，采用恒溫箱或恒溫浴在與培養耐熱大腸桿菌相同的培養條件下進行培養，采用恒溫浴模式時需將培養管中的液體完全淹沒在水中。培養結束后借助紫外燈查看大腸埃希氏菌的生成情況。

5 城市生活飲用水微生物檢測結果分析

經上述測定方式對城市飲用水中微生物菌落種類的數量進行檢測后，采用統計學方法推算出水樣中菌群平均數量，再根據國家對飲用水中微生物含量的相關標準，對檢測結果進行分析，形成飲用水水質檢測報告，對于檢測結果顯示為不合格的情況，需在報告中指明具體原因，標明具體污染物及污染等級[5]。規范檢測報告中檢測數據的錄入模式，對于菌落數為1 ～100 CFU 時，可直接錄入真實數據，大于100 CFU 時，取兩位有效數字。若所測水樣中不含總大腸菌群、耐熱大腸菌群以及大腸埃希氏菌，菌落總數在100 CFU/100 mL 以內，則視為水質合格。

6 結語

微生物檢測技術在城市生活飲用水水質檢測中有重要作用，能為飲用水中是否含有致病菌提供數據參考，為城市居民的健康飲水提供技術保證。檢測人員應規范水樣采集操作，嚴格按照不同菌落的測定方式開展微生物檢測工作，提升城市生活飲用水微生物檢測工作質量和檢出效果，促進提升城市生活飲用水水質，保障城市居民用水安全及身體健康。