UPLC-MS/MS 法同時快速測定保健食品中7 種非法添加藥物

吳芳海，許琨琨，盧文斌，王曉峰，蔡振世

（泉州市食品藥品檢驗所，福建泉州 362000）

近年來，隨著生活水平的提高，消費者對保健食品的需求也越來越強烈，其中補腎壯陽、降糖、減肥等熱門功效的保健食品尤其受到消費者的追捧，雖然目前與保健食品相關的法律法規越來越完善，保健食品行業日常監管也日趨規范，但由于保健食品行業有著高熱度、高需求、高利潤等特點，在高額利益的驅使和誘惑下，保健食品中非法添加藥物的現象屢禁不止，如西地那非、他達拉非、西布曲明這些常見藥物在日常監管中時有檢出。為了逃避監管，甚至會添加一些并不常見的藥物成分或者同時添加多種不同功效的藥物，隱蔽性越來越高，嚴重危害廣大消費者的身心健康，因此本文在西地那非、他達拉非、西布曲明等常見的藥物之外，補充開發了阿伐那非、米羅那非、烏地那非和沙格列汀等新型藥物的檢測方法[1-5]，擴大了保健食品中非法添加物質的檢測范圍，增加保健食品中非法添加物質的檢測項目，提高檢測效率，為監管部門整治行業亂象提供更多的技術支持。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 實驗試劑與對照品

乙腈（色譜純，德國merck）；甲酸（色譜純，美國ROE）；水為超純水（由超純水器制備）；阿伐那非對照品（批號：S076065，Fist Standard）；米羅那非對照品（批號：ALT800166，Fist Standard）；烏地那非對照品（批號：FS1610680，Fist Standard）；西地那非對照品（批號：510068-202102，中國食品藥品檢定研究院）；他達拉非對照品（批號：510170-202102，中國食品藥品檢定研究院）；沙格列汀對照品（批號：FS1621842，Fist Standard）；西布曲明對照品（批號：100624-201802，中國食品藥品檢定研究院）；固體陰性供試品，某牌蛋白粉；液體陰性供試品：某牌鐵鋅鈣硒氨基酸口服液。

1.1.2 儀器

Triple Quad 5500 超高效液相色譜串聯質譜儀，美國SCIEX 公司；3-15 臺式離心機，曦瑪離心機揚州有限公司；Dirent-Pure UP UV30 超純水一體機，上海樂楓生物科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色 譜 柱：Waters ACQUITY UPLC?BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流速：0.3 mL·min-1；進樣量：2 μL；柱溫：30 ℃；流動相：A 相為水（含0.1%甲酸），B 相為乙腈（含0.1%甲酸），采用梯度洗脫見表1。

表1 梯度洗脫

1.2.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源，正離子掃描；采集方式：多反應監測模式；氣簾氣：20.0 psi；碰撞氣：9 psi；離子化電壓：5 500.0 V；溫度：500.0 ℃。噴霧氣：50 psi；輔助加熱氣：50 psi；7 種分析物的詳細質譜參數見表2。

表2 各分析物的質譜參數

1.2.3 混合對照品標準曲線的制備及測定

分別精密稱取適量阿伐那非、米羅那非、烏地那非、西地那非、他達拉非、沙格列汀和西布曲明對照品于同一容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配制成濃度為5 μg·mL-1的混合對照品溶液，分別精密移取混合對照品溶液0.02 mL、0.04 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL 和1.00 mL 置于10 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，即得濃度為10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1和500 ng·mL-1系列標準溶液，按上述檢測條件進行測定，以對照品溶液的濃度為橫坐標，定量離子的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.4 供試品溶液的制備與測定

精密稱取一次服用量供試品（固體樣品研細），置于50 mL 離心管中，加乙腈20 mL，渦旋振蕩1 min，超聲處理15 min，冷卻至室溫，5 000 r·min-1離心5 min，將上清液轉移至50 mL 容量瓶中，向沉淀中再加入20 mL 乙腈，重復提取1 次，合并兩次提取上清液于同一50 mL 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，過濾，即得供試品溶液。

不少保健食品中非法添加的藥物含量較高，為避免過高濃度的分析物組分污染質譜系統，檢測過程中應當先稀釋較大倍數溶液進樣，然后根據實際檢測結果調整至合適的稀釋倍數再進行測定[4]。

2 結果與分析

2.1 專屬性試驗

分別取濃度為100 ng·mL-1的混合對照品溶液和加標供試品溶液（濃度為100 ng·mL-1），按1.2 的條件測定，記錄7 種分析物的定量離子提取離子流色譜圖見圖1、圖2。結果顯示加標供試品溶液中7 種組分的保留時間與混合對照品溶液一致，各組分分離效果和專屬性良好。

圖1 混合標準溶液提取離子流色譜圖

圖2 加標供試品提取離子流色譜圖

2.2 方法的線性范圍和檢出限

取某牌蛋白粉陰性供試品一次服用量（10 g），精確加入5 μg·mL-1的混合對照品溶液0.10 mL，按上述1.2.4 方法步驟處理，即得每毫升含1 0 ng 混合對照品的樣品溶液，再分別稀釋成各濃度檢測，以信噪比為3 的溶液濃度計算各分析物的方法檢出限，試驗結果表明7 種分析物在10 ～500 ng·mL-1線性關系良好，檢出限能達到0.002 5 mg·kg-1，本方法可滿足其檢測分析的需求。各分析物的線性和檢出限結果見表3。

2.3 加樣回收率試驗

分別取固體樣品（某牌蛋白粉）和液體樣品（某牌鐵鋅鈣硒氨基酸口服液）各6 份（每份10 g），精確加入5 μg·mL-1的混合對照品溶液1 mL，按上述1.2.4方法步驟處理，制備成添加量為0.5 mg·kg-1的添加回收試樣溶液，測定結果計算平均回收率，結果見圖3。

圖3 各分析物回收率結果

由圖3 可知米羅那非、烏地那非、西地那非、他達拉非、沙格列汀和西布曲明按本方法測定固體和液體兩種基質樣品中的平均回收率結果為93.3%～118.4%，準確性和穩定性較好，阿伐那非的回收率達到了135%以上，計算100 ng·mL-1濃度的阿伐那非在固體和液體兩種陰性基質溶液中的峰面積與純溶劑中的峰面積比分別為114%和122%，均大于100%，存在一定的基質增強效應[6]，可考慮采用配制基質匹配標準曲線的方法來降低樣品基質對阿伐那非的影響。

2.4 重復性試驗

記錄2.2 中加標回收試樣溶液所測得的色譜峰面積，計算RSD 結果，在固體樣品（某牌蛋白粉）和液體樣品（某牌鐵鋅鈣硒氨基酸口服液）中7 種分析物的RSD 分別為1.9%～8.8%和1.6%～6.1%，表明本方法在固體樣品和液體樣品的檢測中具有良好的重復性，具體結果見表4。

表4 各分析物的精密度

2.5 實際樣品檢測

采用本方法對71 批保健食品（泉州市食品藥品檢驗所提供）進行測定，其中8 批保健食品檢測出西地那非，含量差異較大，最低為25 mg/粒，最高為101 mg/粒，檢出率為11.3%，1 批保健食品檢出他達拉非，添加量為42 mg/粒，檢出率為1.4%，1 批保健食品檢出西布曲明，添加量為39 mg/粒，檢出率為1.4%，其余樣品未檢測出上述7 種成分。

3 結論

本法采用乙腈為提取溶劑，高效液相色譜-串聯質譜法測定，建立了能夠同時快速測定保健食品中阿伐那非、米羅那非、烏地那非、西地那非、他達拉非、沙格列汀和西布曲明等7 種非法添加藥物的測定方法，對方法的線性范圍、試樣加標回收率、精密度和檢出限等進行驗證和評價，并對多種實際的保健食品樣品進行了測定，結果準確檢出了含有西地那非、他達拉非、西布曲明等多種類不同功效的非法添加藥物成分，方法操作簡便、分離效能高、專屬性強、結果準確可靠，顯著縮短了分析時間，能夠滿足實驗室同時對上述7 種不同功效的保健食品非法添加藥物的快速測定工作，也為市場監管部門對保健食品非法添加藥物監督管理的快速響應提供有力的技術支持。