血清miR-146a水平與乳腺癌術后化療伴糖代謝異常患者發生周圍神經病變的相關性研究

王躍臻, 吳燕林, 李 丹, 杜延芬, 馬 君

(張家口市第一醫院1乳腺外科, 2內分泌一科, 3呼吸與危重癥一科, 4導管室, 河北 張家口 075000)

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤,發病率在不斷上升,嚴重威脅女性身體健康與生活質量[1]。化療是目前有效治療乳腺癌常用的方法,化療在對癌細胞產生殺傷作用的同時,也會影響機體的正常細胞,許多患者在化療后常會出現糖代謝紊亂現象,影響患者預后[2]。糖代謝紊亂會進一步導致周圍神經病變(Peripheral neuropathy,PN)[3]。PN作為化療后的嚴重并發癥,缺乏有效治療藥物。有研究顯示,微小RNA(miRNA)可調節細胞分化、增殖與凋亡等生物過程,是PN的重要生物標志物[4],糖尿病PN大鼠經治療能升高miR-146a表達水平并降低炎性細胞因子分泌[5]。研究顯示miR-146a可增強乳腺癌細胞對紫杉醇化療藥物的敏感性[6]。本研究選擇出現糖代謝紊亂的乳腺癌患者,進一步分析miR-146a與化療后出現PN的相關性,為乳腺癌患者化療后早期預防PN提供依據。

1 資料與方法

1.1 試劑與材料血漿血清miRNA提取試劑盒,貨號K157001,規格25 preps,SYBR Green PCR試劑盒。貨號A25742,規格5mL,miRNA cDNA 鏈合成試劑盒,貨號A28007,規格50reactions,以上試劑盒均從Thermo Fisher購買。

1.2 一般資料選擇2019年10月至2021年10月在張家口市第一醫院治療的乳腺癌化療伴糖代謝紊亂患者60例,年齡35 ～ 72歲。患者均統一接受紫杉醇化療共4周期,每周期為21 d,在研究之前患者或其監護人簽署了書面知情同意書。

1.3 方法對60例各肢體周圍神經病變(Peripheral neuropathy,PN)患者進行檢查,根據通用不良事件術語標準(Common terminology criteria adverse events, CTCAE)4.0版進行評估分級[7]。0級或1級患者被分為非PN組,≥2級患者被分為PN組。

1.3.1 實驗室檢查 患者禁食12 h,晨起空腹抽取肘部靜脈血,測定空腹血糖與餐后2 h血糖,并借助OISA2000型肌電圖儀器檢測患者的神經傳導速度(m/s),包括正中神經運動神經傳導速度(Median motor nerve conduction velocity,MMCV)、腓總神經運動神經傳導速度(Common peroneal nerve motor nerve conduction velocity,PMCV)、正中神經感覺神經傳導速度(Median sensory nerve conduction velocity,MSCV)、腓總神經感覺神經傳導速度(Common peroneal nerve sensory nerve conduction velocity,PSCV)。

1.3.2 RNA提取與miR-146a水平檢測 收集患者空腹靜脈血,離心后提取血清,借助血漿血清miRNA提取試劑盒從血清樣本中分離出總RNA,使用miRNA cDNA 鏈合成試劑盒將總RNA逆轉錄為cDNA,使用SYBR Green PCR試劑盒進行擴增反應。結果使用2-△△Ct法做進一步計算。引物:miR-146a上游: 5′-GCCATATGAGAGAATTAG-ACCGG-3′,下游:-5′-CCCGGGTTGGTGCAGAA-CGTCGCA-3′。U6上游:5′-TGGGCCCAATGCC-GCGACCA-3′,下游:5’-TTGGCATATTGCGCTGTGATCT-3′。

2 結果

2.1 兩組患者一般資料比較兩組患者空腹血糖、餐后2 h血糖、MMCV、PMCV、MSCV、PSCV差異有統計學意義(P<0.05),年齡、BMI差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組乳腺癌患者的一般資料比較/例(%)

2.2 兩組患者血清miR-146a表達水平非PN組患者血清miR-146a為(1.00±0.24),PN組患者血清為(0.64±0.24),差異有統計學意義(t=6.07,P<0.001),見圖1。

圖1 miR-146a在兩組乳腺癌患者中的表達水平

2.3 患者發生PN的影響因素分析非PN組患者空腹血糖為(7.89±1.41)mmol/L,餐后2 h血糖為(6.05±1.72)mmol/L,血清miR-146a為(1.00±0.24),PN組患者空腹血糖為(8.62±1.22)mmol/L,餐后2 h血糖為(8.33±2.51)mmol/L,血清miR-146a為(0.64±0.24)。Logistic回歸分析結果顯示, 空腹血糖、餐后2 h血糖與miR-146a表達水平是患者誘發PN的影響因素,miR-146a是誘發PN的獨立危險因素。見表2。

2.4 miR-146a、空腹血糖與餐后2 h血糖的診斷價值分析ROC分析顯示對于預測PN,miR-146a的敏感性(AUC=0.854,P<0.001)高于空腹血糖(AUC=0.650,P=0.049)與餐后2 h血糖(AUC=0.805,P<0.001)。見圖2。

2.5 miR-146a表達水平與神經傳導速度的相關性分析Pearson相關系數分析結果顯示miR-146a表達水平與MMCV(r=0.509,P=0.002)、PMCV(r=0.383,P=0.023)、MSCV(r=0.416,P=0.013)、PSCV(r=0.440,P=0.008)均呈正相關。提示,miR-146a的表達水平與患者PN相關。見圖3。

表2 患者發生PN的影響因素分析

圖2 miR-146a、空腹血糖與餐后2 h血糖的診斷價值分析圖

注:A,MMCV;B,PMCV;C,MSCV;D,PSCV:Pearson相關系數分析miR-146a表達水平。

3 討論

婦科腫瘤引起PN的幾率很高,可能與腫瘤轉移壓迫神經或與化療藥物的神經毒性等有關[8]。紫杉醇是化療常見基礎藥物,有研究發現PN是紫杉醇化療常見的不良反應[9]。該不良反應的發病機制可能與微管結構紊亂、線粒體受損、軸索變性、內環境中鈣失衡等因素有關[10]。糖代謝紊亂是化療后常見副作用[11]。一半以上糖尿病患者患有神經系統并發癥[12]。本研究發現,發生PN的乳腺癌患者與未發生PN的乳腺癌患者的空腹血糖及餐后2 h血糖有差異,PN組的患者空腹血糖及餐后2 h血糖更高;Logistic回歸分析顯示,空腹血糖及餐后2 h血糖可作為預測PN的獨立因素。原因可能是糖代謝異常導致能量代謝異常,葡萄糖未被大腦充分利用,進一步導致神經細胞軸突、鞘膜代謝失常,進而誘發神經系統病變[13]。

已有研究發現,miR-146a-5p靶向白介素-1受體相關激酶1抑制乳腺癌細胞的生長、遷移和侵襲[14];miR-146a與良好預后呈正相關,miR-146a通過抑制對稱細胞分裂,在乳腺癌干細胞更新中發揮抑制作用[15];富含miR-146a的間充質細胞源性外泌體可有效治療糖尿病PN[16];miR-146a在糖尿病PN中具有積極的正向改善作用[17]。本研究發現,在發生PN的乳腺癌患者中miR-146a表達顯著降低,血清miR-146a可作為預測PN的因素。本研究還發現血清miR-146a與MMCV、PMCV、MSCV、PSCV呈正相關。說明血清miR-146a越高,神經傳導速度越快。

綜上所述,乳腺癌伴有PN患者血清miR-146a水平更低,神經傳導速度更慢,血清miR-146a表達水平可作為預測乳腺癌術后化療糖代謝異常患者誘發PN的生物指標。