煙酰胺預(yù)防全反式維甲酸誘導(dǎo)小鼠腭裂的初步實(shí)驗(yàn)研究

李國威，唐世杰

1.深圳大學(xué)總醫(yī)院整形美容科，廣東 深圳（518000）；2.汕頭大學(xué)第二附屬醫(yī)院整形外科暨唇腭裂治療中心，廣東 汕頭（515000）

先天性腭裂是最常見的生長發(fā)育畸形之一，發(fā)病率可高達(dá)1.7‰［1］。腭裂的發(fā)生既影響患兒的語言、聽覺、外觀、心理健康，也對患兒成長中的社會融入過程造成不利影響，同時(shí)給其家庭增加嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［2-4］。目前學(xué)界公認(rèn)先天性腭裂是多環(huán)境因素、多基因因素共同作用的結(jié)果［5-7］。尋找能夠預(yù)防先天性唇腭裂疾病發(fā)生的方法十分重要。關(guān)于煙酰胺（nicotinamide，NAM）能否預(yù)防腭裂的實(shí)驗(yàn)研究，目前尚無報(bào)道。本文在全反式維甲酸（all-trans retinoic acid，RA）誘導(dǎo)小鼠腭裂模型的基礎(chǔ)上［8］，探索NAM 是否具有預(yù)防腭裂的作用，并探索了其與細(xì)胞凋亡相關(guān)機(jī)制的可能性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 主要材料和試劑

全反式維甲酸（RA）（R2625，Sigma，美國），煙酰胺（NAM，N105042，阿拉丁，中國），胎牛血清（10100147，Gibco，美國），磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS）（P1020，索萊寶，中國），二甲基亞砜（D12345，Sigma，美國），改良Eagle 培養(yǎng)基（12430054，Gibco，美國），0.05%胰蛋白酶（Invitrogen，美國），Annexin V - FITC/PI 試劑盒（KGA108，凱基，中國），體式光學(xué)顯微鏡（SZX10，Olympus，日本），光學(xué)顯微鏡（Ixplore，Olympus，日本），BD Accuri 流式細(xì)胞儀（C6，BD，美國）。

1.2 動物實(shí)驗(yàn)

7～8 周齡的昆明小鼠（15 只雌、10 只雄）購于汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心（動物合格證號：2021A023）。小鼠飼養(yǎng)于汕頭大學(xué)附屬二院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心動物房。房間內(nèi)相對濕度維持在60%～70%，室溫維持在18℃～22℃。每日提供新鮮的飼料和飲用水，墊料每3～5 d 更換1 次。本次實(shí)驗(yàn)獲得汕頭大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會（批號：SU-2021-0121 號）批準(zhǔn)。

篩選體重≥30 g 的昆明小鼠按照雌雄比2∶1～3∶1 的比例在第1 d 20∶00 合籠，于第2 d 08∶00，檢查雌……