寧夏桶裝飲用水中銅綠假單胞菌污染情況分析及預防控制措施研究

◎ 馮秀娟，高俊峰，蘇 洋，吳 明

（寧夏回族自治區食品檢測研究院，寧夏 銀川 750000）

近年來，隨著生活水平的提高，人們對自身健康越來越重視，對水的質量要求不斷提高。目前，包裝飲用水已在人們的日常生活中得到普及[1]。然而，桶裝水也存在眾多問題，相關的質量安全問題報道層出不窮[2-4]。2014 年出臺的《食品安全標準 包裝飲用水》規定，在被抽檢的5 份樣品中，不允許任一件樣品檢出銅綠假單胞菌[5]。隨著《包裝飲用水》（GB 19298—2014）實施后，多地對桶裝水的監督抽檢中，屢有檢出銅綠假單胞菌的報告[6-8]。目前，桶裝水中銅綠假單胞菌污染問題不斷凸顯[9]，成為公眾飲水衛生的重大隱患，給人們的身體健康帶來危害。

銅綠假單胞菌是一種食源性和水源性致病菌，能夠以群體感應生成生物膜來保護菌體和促進菌體適應不良環境[10-14]，對抵抗力較弱的老弱病幼孕等人群具有較大的潛在健康風險。因此，探討銅綠假單胞菌產生的原因，并提出解決方法，對預防銅綠假單胞菌污染尤為重要[9]。為了充分掌握寧夏包裝飲用水中銅綠假單胞菌的污染情況。本文著重分析了2017—2022 年寧夏食品監督抽檢包裝飲用水抽檢信息，采集了不同飲用水生產企業各個環節的水樣，進行銅綠假單胞菌檢測，找到了銅綠假單胞菌污染的關鍵環節，討論了企業現存的問題，并提出了預防控制措施，旨在為市場監管部門重點監管，桶裝飲用水企業生產工藝改進、產品質量控制提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 樣品樣本采集自寧夏省內部分包裝飲用水生產企業的各個環節以及市場抽檢環節的各批次樣品。

1.1.2 培養基與試劑

CN 瓊脂、綠農菌素測定用培養基、金氏B 培養基、鈉氏試劑、營養瓊脂、氧化酶試劑、乙酰胺液體培養基等均購自北京路橋；銅綠假單胞菌LAMP 檢測試劑盒購自廣東迪奧生物科技有限公司；VITEK2 GN卡（梅里埃）。

1.2 儀器與設備

恒溫培養箱、生物安全柜、過濾裝置、VITEK2微生物全自動鑒定系統和熒光定量PCR 儀。

1.3 試驗方法

根據《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》（GB 8538—2016）中57 要求進行試驗，同時采用《包裝飲用水中銅綠假單胞菌的快速檢測方法》（DB64/T 1682—2019）同步驗證。

2 結果與分析

2.1 基本概況

通過分析總結2017—2022 年寧夏包裝飲用水監督抽檢情況可知，近6 年來銅綠假單胞菌均有檢出。為探討銅綠假單胞菌的污染與產品包裝方式是否存在關聯，對2017—2022 年數據進行匯總，2017 年銅綠假單胞菌的總批次檢出率最高，為5.1%，之后呈逐年下降趨勢；歷年抽檢中瓶裝水抽檢數量占比較高，但其銅綠假單胞菌的檢出率為0%；每年桶裝水均有檢出，其檢出率最高達16.7%，結果如表1 所示。由表1 可知，經過近幾年的嚴格把關，寧夏的包裝飲用水總體品質改善明顯，各廠家對產品的品質管控意識提高，監督效果明顯；桶裝飲用水是銅綠假單胞菌污染的關鍵點，桶裝水包裝容器一直在重復利用，每次要進行消毒處理，該過程會存在微生物污染，因此可將桶裝水生產企業作為重點研究對象。

表1 2017—2022 年寧夏瓶裝水、桶裝水抽檢批次與銅綠假單胞菌檢出率表

2.2 不同生產環節桶裝水銅綠假單胞菌檢出結果分析

選擇桶裝水企業不同生產環節，即水源水、沖洗容器水、清洗后容器、精濾后水及罐裝口等部位采集水樣，共計129 份樣品。采用國標方法檢測129 份樣，共檢出銅綠假單胞菌30 份，同時經VITEK2 與熒光定量PCR 法驗證，確定為銅綠假單胞菌（圖1）。由表2 可知，銅綠假單胞菌陽性率為23.3%，各生產環節銅綠假單胞菌的檢出率分別是水源水16.7%，沖洗容器水25.0%，清洗后容器40.0%，灌裝口水11.1%。5 個環節中所用容器的清洗環節是污染的關鍵點。30 份檢出的銅綠假單胞菌有1 株為典型的淺藍色（圖2a），1 株為深綠色（圖2b），其余菌落均為淺綠色，30 株菌均產熒光，未檢出紅褐色與非藍色產熒光菌。分析數據可知，清洗后容器銅綠假單胞菌的檢出率最高，涉及的企業達到63.6%，由此可知容器清洗環節較易出現問題，值得所有企業重點關注、重點把控。

圖1 部分樣品熒光PCR 檢測結果圖

圖2 CN 平板上生長的銅綠假單胞菌圖

表2 桶裝飲用水各環節銅綠假單胞菌檢測結果表

3 討論

3.1 污染原因分析

桶裝飲用水生產企業的流程一般為水源水→粗濾→精濾→[離子交換、反滲透（適用于純凈水）]→殺菌→灌裝封蓋[瓶（桶）及其蓋的清洗消毒]→燈檢→成品[15]。整個生產過程中水源水、管道及設備等的維護及清洗消毒、桶及其蓋的清洗消毒、灌裝車間環境衛生和潔凈度的控制、人員管理等環節容易出現質量安全問題。

（1）水源水污染。本次試驗中有兩家企業水源水出現問題，一家水源為山泉水，一家為自來水。采集水樣時，企業均在停產維修階段，所以試驗結果不具有代表性，從另一角度看，水源水存在污染的可能性，一旦水源污染，在后續的生產中無法去除，會造成持續污染。

（2）桶及其蓋的清洗消毒不徹底。該環節是本次試驗中最關鍵的污染源。企業為節省成本，一般對水桶進行回收再利用，回收的桶在用前要清洗消毒。因桶的特殊構造，不利于清洗消毒，部分企業沒有配備清洗水桶的專用設備，致使桶消毒不徹底，微生物殘留造成交叉污染。同時，某些企業也配備了清洗水桶的專用設備，但設置的清洗程序以及所用的消毒劑的濃度達不到清洗要求，清洗桶用的水沒有嚴格把控，自身就是污染源。

（3）灌裝車間環境衛生和潔凈度的控制同樣影響水的質量。部分企業的灌裝車間的潔凈度并未達到萬級要求，環境潮濕、常有積水，銅綠假單胞菌在潮濕環境下容易滋生。試驗顯示在此類企業采集的樣品中銅綠假單胞菌的檢出率普遍較高，平板上生長的微生物種類較多，嚴重影響水的質量。

（4）生產設備的維護保養不及時、貯水罐和管道無沖洗消毒設施、人員管理松散未洗手消毒就進入生產車間，操作人員缺乏工作防護用品。貯水罐沒有樣品采集口，無法做到該過程的水質監測。有些生產企業未設置化驗室，有化驗室的企業檢驗條件又十分簡陋，最終導致桶裝水檢驗形同虛設。大多數的生產企業主要靠政府監督抽檢發現其產品問題，都是被動檢驗，企業自我防控意識不強[9]。

3.2 預防污染控制措施

①政府要嚴把準入關。嚴格控制桶裝水企業的發證審核，對不滿足審查許可準則的企業決不發證，杜絕不符合要求的產品流入市場。②定期監測水源水[16]。企業所用源水要定期進行檢測，確保源水不受污染；在水源水進入粗濾前配備裝置進行紫外殺菌可提高源水質量。③加強環境衛生管理。按照規定將生產區域劃分為一般作業區、非潔凈區、潔凈區，操作人員穿戴符合要求才可進入相應的工作區域。生產前，車間及設備設施要進行消毒處理，地面積水及時處理，操作間保持干燥整潔。④重視回收桶及其蓋的清洗消毒?？胀盎厥蘸笠庞诟稍餄崈舻膮^域中，桶的清洗消毒極為重要，該環節控制到位，能大大提高產品質量。生產企業采用市面上銷售的次氯酸鈉、二氧化氯、過氧乙酸、過氧化氫等消毒劑盡可能探索出最佳的消毒條件及消毒劑種類，防止因消毒不徹底而出現交叉污染。同時，要控制清洗流程，做到預清洗、洗滌劑/消毒劑清洗、沖洗、成品水沖洗等環節，避免洗滌劑、消毒劑殘留。⑤加強人員管理。人員的衛生狀況直接影響水的質量，尤其在灌裝口，操作人員的手未經消毒直接抓瓶口加蓋蓋子，造成二次污染。因此，應做好人員教育與培訓，強化操作人員安全意識、衛生意識，加大對技術人員的培養力度，做好出廠檢驗。

3.3 消費提醒

雖然包裝飲用水備受人們青睞，但安全意識應提高。消費者購買桶裝水時，要盡量選擇規模大、知名度高、售后服務好、社會口碑好的桶裝水企業。此外，桶裝水量大，時間長會滋生細菌，無論是家用還是公共場所，都要燒開再飲用。