PCR-反向斑點雜交技術在即食果蔬常見致病微生物快速篩查中的應用

◎ 楊丹妮，鄒雨虹

（常州市食品藥品纖維質量監督檢驗中心，江蘇 常州 213000）

水果蔬菜中富含人體必需的維生素、有機酸、無機鹽和植物纖維等營養成分，而即食生鮮果蔬食品因食用方便、口味清新和味道鮮美，更是人們日常生活中和餐桌上常見的食物。但是，生鮮果蔬食品僅經簡單清洗，未經高溫殺菌處理，其表面和內部附著的微生物對其食用安全性造成了極大的隱患[1-2]。因此，如何做好即食生鮮果蔬中病原性微生物檢測成為食品安全領域關注的一個重要課題。

目前即食生鮮果蔬中致病菌檢測的方法主要有分離培養[3]、生化鑒定[4]、酶聯免疫吸附[5]、聚合酶鏈式反應[6]和基因芯片法[7]等。常規方法費時費力，既增加了企業的成本，也加大了政府對于食品安全的監管難度，還無法滿足致病病毒和細菌的同時檢測。熒光定量PCR 法在一定程度上彌補了傳統方法的部分不足，但受其熒光通道的限制，在樣本量大、檢測指標多的情況下，大大增加工作量。因此，急需一種操作簡單、結果直觀、單次反應可滿足多指標篩檢要求的方法來對即食果蔬中的多種致病微生物進行同時篩檢。

膜芯片法利用反向斑點雜交技術（Reverse Dot Blot Hybridization，RDBH）將待測靶標基因中的特異性序列作為探針固定在尼龍膜上，同時利用多對帶生物素標記的引物對待測靶標基因進行擴增，通過酶-底物顯色，產生肉眼可辨的信號，具有快速、簡便、高效、直觀等特點。同時結合多重PCR 技術，雙重反應體系確保檢測結果的準確性，單次反應可同時篩檢數十種指標[8]。……