畜禽產品中β-受體激動劑檢測能力驗證總結與分析

◎ 韓 嬌，劉元長，王夢云，錢 章，李 瑩，董文婷

（1.武漢譜尼科技有限公司，湖北 武漢 430000；2.農業農村部畜禽產品質量安全監督檢驗測試中心（武漢），湖北 武漢 430000）

為提高質量控制及管理水平，維持檢測能力，檢驗檢測機構每年都會參加多項能力驗證工作[1-4]。本文以湖北省農業廳2021—2022 兩個年度組織的畜禽產品中β-受體激動劑檢測能力驗證[5]為例，從實際檢測過程中遇到的問題入手，對能力驗證中的前期準備、技術細節、數據傳遞進行總結，分析做好畜禽產品能力驗證的經驗及關鍵點。

1 實際檢測中遇到的問題

1.1 萊克多巴胺回收率不穩定

2021 年度，進行豬肉中β-受體激動劑檢測預實驗時，萊克多巴胺回收率不穩定。選取豬肉樣品，進行4 個不同添加量的加標實驗（n=3），按照《動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯質譜法》（GB/T 22286—2008）進行檢測，沙丁胺醇和克倫特羅的平行性和回收率符合要求，而萊克多巴胺的回收率不穩定，回收率的RSD 數據見表1。

表1 沙丁胺醇、克倫特羅、萊克多巴胺不同添加量下回收率的RSD 表（n=3）

表1中的方法是內標法定量，而萊克多巴胺的內標是沙丁胺醇-D3，由克倫特羅和沙丁胺醇的數據可知，前處理本身沒有問題，因此萊克多巴胺回收率不穩定可能是內標的影響。再次實驗，三者分別采用自己的同位素內標定量，同一個濃度點的數據平行性良好，回收率穩定。三者回收率的RSD 數據見表2。

表2 沙丁胺醇、克倫特羅、萊克多巴胺不同添加量下回收率的RSD 表（n=3）

由表1、表2 的實驗數據對比可知，進行獸藥多殘留檢測時，內標的影響較大，用藥物本身的同位素內標定量最為準確[6]。很多藥物參考之前的舊標準采取同一種內標定量，大部分是因為很多物質沒有同位素內標[7]，目前同位素內標的種類越來越多，檢測時可以添加多種同位素內標[8]。

1.2 配標過程

在進行2021 年的能力驗證時，因預實驗反復多次，回收率良好，直接對盲樣進行檢測。前處理過程順利，上機后，三者的標準曲線非線性，所有的樣品空白、盲樣、質控樣及標樣目標峰響應一致，無內標。經反復確認，這是因為配標過程中外標標簽和同位素內標標簽貼反，導致工作人員把外標誤當成內標加入到考核樣中，屬于人為失誤[9-10]。分析數據發現，添加15 μg·kg-1的混標，陰性基質空白和考核樣中沙丁胺醇都在15 μg·kg-1左右，確認沙丁胺醇未添加；至于克倫特羅和萊克多巴胺，減去加入外標的量，推算考核樣的大概添加范圍，重新在豬肉樣品中加標，模擬考核樣的添加量，用內標法定量確認。最終上報結果3.72 μg·kg-1，考核樣添加量4 μg·kg-1，結果較滿意。

2 做好畜禽產品的能力驗證

根據多次參加能力驗證的經驗，對做好畜禽產品的能力驗證進行總結，最關鍵的工作是日常的實驗室質量控制。而實驗室質量控制貫穿檢測活動的全部環節，人、機、料、法和環五大因素環環相扣，其中“人員”是貫穿檢測各個環節的關鍵因素，檢測人員的技術水平、能力和經驗直接決定了檢測結果的準確性。

2.1 前期準備

2.1.1 正確利用能力驗證工作通知

在能力驗證開始之前，省農業農村廳一般會提前1 ～2 個月發布能力驗證工作通知，通知包括組織能力驗證工作的時間、考核的基質和項目、推薦的方法、能力驗證結果上報時間以及結果判定方式。在收到此通知時，根據考核時間、項目和推薦方法，有序進行人、機、料、法和環五大因素的核查準備工作。

（1）人員。選擇有經驗的分析人員，具備獸藥殘留痕量檢測的操作意識、嫻熟的操作技能、良好的操作習慣，清楚影響回收率的關鍵控制步驟。

（2）儀器。選擇靈敏度、重現性等性能指標滿足檢測方法要求的液質聯用儀，且通過校準、清洗離子源，根據調諧報告判斷毛細管是否有污染，最終調整儀器狀態至最佳。盡量選擇新開封的色譜柱，保證柱效。大型精密儀器日常檢測盡量專人專用、專人管理。

（3）物料。根據通知考核的基質、項目以及推薦方法，核查標準物質尤其是同位素內標，能力驗證建議采納進口、證書信息齊全、固體粉末狀的標準物質，一般首選Dr.公司的固標。試劑、器具等耗材，需要再次確認是通過驗收且滿足實驗要求的，避免出現污染或者吸附目標化合物。

（4）方法。按照能力驗證推薦的標準方法農業部1025 號公告-18—2008 制定實驗方案，將方法性能優化至最佳；若未指定檢測方法，選用本實驗室日常熟悉的檢測方法。

（5）環境。環境管理方面，最重要的是常量分析與痕量分析區域、檢測設備、實驗器具應相對隔離，避免交叉污染。這個工作重在日常，能力驗證的時候需特別注意，以免污染盲樣。

2.1.2 預實驗

對五大因素核查完畢后，按照CATL 能力驗證鮮樣加標的模式開展預實驗。選取同品種考核基質進行加標，加標量一般在檢出限、2 倍檢出限、5 倍檢出限，每個濃度點3 個平行樣，冷凍保存，預實驗的次數可參考日常的回收率決定。

2.2 技術細節

技術細節貫穿于五大因素的各個環節，緊密相連，不分別討論，僅從經驗中總結重要細節。

2.2.1 明確作業指導書的要求

每個能力驗證計劃的作業指導書都有很強的指導意義，一定要仔細通讀作業指導書，明確檢測注意事項和結果上報的時限及要求，有疑問及時與組織單位進行溝通。例如，農業農村部畜禽產品中β-受體激動劑能力驗證樣品，是稱好的鮮樣直接進行加標，不能分取。而有的機構不熟悉制樣流程，也沒有仔細研讀作業指導書，為了多做兩次進行分取，導致結果不滿意；樣品不能分取，但是樣品提取液可以先稱取質量，按質量進行分取，開展二次試驗確認；另外，藥物屬于外部添加，不需要酶解；標準方法是外標法定量，但是作業指導書上明確寫了建議同位素內標法定量，這些要求與檢測標準不一致，需按作業指導書進行。

2.2.2 標準溶液

關于標準溶液的配制，稱量標準物質時一定要折算單體、純度；標準溶液盡量不要用純有機溶劑稀釋使用，否則易揮發引起體積不準確，造成溶劑效應。此外，配標一定要雙人配標，一人配標，一人監督全過程，并做好相應記錄。

進行獸殘能力驗證時，建議使用空白基質添加標準曲線。另外，標準曲線的線性范圍非常重要，最低點為檢出限濃度的1/2 最為恰當，但是這個要根據儀器的靈敏度而定；濃度點不少于5 個點，相關系數盡量在0.999 以上。初次實驗后根據樣品濃度調整線性范圍，盡量讓測定濃度落在中間，內標的峰面積盡量接近中間點的峰面積，這樣定量更為準確。

2.2.3 樣品前處理及質控樣品的設置

提前準備空白基質，設置陰性對照和陽性對照；陽性對照添加藥物種類要和考核項目一致，添加濃度在未知情況下，可以按照限量使用的藥物和禁用藥物分別設計，進行幾組不同濃度的添加量。質控樣品至少包括試劑空白1 個、樣品空白1 個、陽性添加3 個。根據農業農村部多年來畜禽產品中β-受體激動劑能力驗證的結果統計，禁用藥物添加量一般不會超過10 μg·kg-1。考核中心一般是提前一天加標，然后通知考核機構去領取樣品。建議模擬考核流程，提前一天加標，第2 天解凍，與盲樣同步開展實驗，保持同步性。

2.2.4 避免交叉污染

整個實驗的前處理過程及儀器測定過程都應該避免交叉污染，因能力驗證樣品均為陽性樣品，前處理濃縮時，兩個樣品之間用空白提取溶劑清洗旋蒸儀整個管路或者氮吹儀的導氣針，避免交叉污染，見圖1；儀器測定時進樣序列的設計如圖2，必須在陽性樣品間穿插試劑空白，避免污染。

圖1 避免交叉污染環節圖

圖2 進樣序列設計圖

2.3 數據傳遞

上報數據前，明確有效數字的保留要求，按照時限要求上報。原始記錄至少要求包含樣品名稱、樣品編號、檢驗項目、檢驗依據、檢驗日期、環境條件、標準溶液相關信息、前處理過程、儀器相關信息（儀器型號、色譜柱、流動相、流速以及進樣體積等）以及圖譜等基本信息，重視原始記錄的溯源性和規范性。

畜禽產品中β-受體激動劑能力驗證判定依據是定性準確，回收率在70%～120%。根據日常檢測水平及本次質控樣的回收率，確認上報數據是否按照回收率校正。一般藥物殘留不建議按回收率校正，但若回收率偏低或偏高，檢測過程肯定存在不容忽視的問題，不可視而不見。

3 結語

本文以豬肉中β-受體激動劑檢測為例，對遇到的問題及解決方案進行歸納，對做好能力驗證的流程進行總結，并明確日常實驗室質量控制的重要性，而人員是重中之重。檢測機構可以選擇檢測經驗豐富、操作熟練的技術骨干成立能力驗證考核小組，最大程度地保證考核結果滿意。因每年考核項目不一樣，所以日常檢測回收率不合格的項目，要查閱相關文獻，與同行多交流，保證回收率。只有充分準備、防止污染、記錄嚴謹，才能保證能力驗證滿意率，提高檢測能力。