Nrf2信號通路調控自噬對UVA誘導人真皮成纖維細胞凋亡的作用

毛漢瀟,劉汝蘭,譚自敏,譚小琦,熊霞,何淵民

成纖維細胞是人真皮中主要細胞,在長波紫外線(ultraviolet A, UVA)照射下容易發生各類損傷,導致細胞凋亡及多種皮膚疾病發生[1],但具體機制不清。自噬是一種溶酶體依賴的細胞降解細胞器和大分子物質的過程,可有效維持細胞內環境穩態[2]。既往研究[3]發現,細胞自噬與凋亡的關系密切,多種外源因素可通過不同的機制上調細胞自噬水平,參與調控細胞凋亡,如胞外營養成分發生變化可通過IGF-I/PI3K/mTOR/S6K上調細胞自噬,參與調控如心肌細胞來源的H9c2細胞、人肝癌細胞等細胞凋亡[4]。還有研究[5]發現,UVA照射可誘導細胞氧化應激,激活自噬;抑制紫外線誘導的自噬可以引起細胞凋亡增加。但至今UVA誘導的自噬與細胞凋亡的具體關系及調控機制仍不清楚。在本研究中,筆者擬分析UVA誘導人真皮成纖維細胞凋亡中自噬的作用及可能的調控機制。

1 材料與方法

1.1材料 人皮膚成纖維細胞(中國科學院細胞庫);胎牛血清(四季青公司);青霉素-鏈霉素溶液(×100)、CCK-8試劑盒(碧云天公司);雷帕霉素(RAPA)、ML385溶液(中國MCE公司);FITC Annexin V/PI凋亡試劑盒(美國BD公司);Nrf2 siRNA(美國Dhsrmacon公司);DCFH-DA探針(美國Sigma公司);SUV-1000日光紫外線模擬器(中國上海希格瑪有限公司)。

1.2實驗方法

1.2.1細胞培養與建模 在37 ℃含5% 的CO2孵箱內,將人皮膚成纖維細胞置于含有10%胎牛血清1%青鏈霉素雙抗高糖DEME培養基中培養;待生長良好后均勻接種于6孔板中培養,將6孔板于冰上用紫外線模擬器以8 J/cm2的UVA進行照射,照射結束后置于孵箱中繼續培養。

1.2.2細胞分組處理 細胞隨機分為對照組、UVA組、雷帕霉素(RAPA)組、3-甲基嘌呤(3-MA)組、ML385組和Nrf2 siRNA干擾(siRNA)組。……