甲狀腺乳頭癌組織中KLF5、TAZ、UHRF1的表達水平及其臨床意義

孟聰聰 張艷凱 于利利 馬 華 趙 瑞 程立鵬 張偉亞

Krüppel樣因子5(KLF5)屬于一類鋅指蛋白轉錄因子,屬于KLF家族成員之一,KLF5因子參與多種腫瘤細胞生物學行為,如增殖、分化、凋亡,且在多種組織中均有不同程度的表達,如前列腺癌[1]、結腸癌[2]以及胰腺癌[3]等。具有PDZ結合域的轉錄共激活因子(TAZ)屬于一類14-3-3結合蛋白,可參與細胞增殖、遷移及侵襲等多種生物學行為。研究發現[4],KLF5可介導Hippo信號通路與TAZ因子相互作用,進而參與腫瘤的發生和發展,進一步發現TAZ其中WW結構域可與KLF5的PY序列結合,可預防KLF5被泛素化降解,此項研究進一步表明KLF5與TAZ之間可能存在協同作用共同參與腫瘤進展。UHRF1為一類核蛋白基因,且與細胞生長、細胞周期關系密切。研究稱[5],UHRF1在細胞增殖及細胞周期G1-S期轉換過程中具有關鍵作用。且UHRF1在多種腫瘤組織中均有表達,如宮頸癌[6]、乳腺癌[7]以及胰腺癌[8]等。由此,研究KLF5、TAZ以及UHRF1在腫瘤疾病中的作用具有重要的研究價值。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2018年6月至2021年6月在我院就診的甲狀腺乳頭癌患者150例,所有研究對象均同意術中留取病灶組織標本以及配對的癌旁組織標本。納入標準:①均經過病理診斷確診為甲狀腺乳頭癌;②均為首次進行手術治療;③以往均未進行放化療及內分泌治療。排除標準:①心、肺、腎等重要臟器功能異常者;②長期采用免疫抑制劑治療者;③既往合并感染類疾病者;④合并其他臟器惡性腫瘤的患者。

甲狀腺乳頭癌(n=150):其中男性56例,女性94例,年齡(45.8±5.7)歲,臨床分期:Ⅰ期40例,Ⅱ期55例,Ⅲ期37例,Ⅳ期18例,平均腫塊大小(1.08±0.72)cm,淋巴結轉移71例,多灶性52例,甲狀腺外侵犯73例。研究對象均已簽署知情同意書,且本研究已獲得我院倫理委員會的批準。

1.2 免疫組織化學方法

獲取上述甲狀腺乳頭癌組織標本及癌旁組織標本,石蠟切片,脫蠟、水化,PBS溶液修復抗原,冷卻40 min后,采用H2O2溶液孵育,10 min后,阻斷過氧化物酶活性,山羊血清封閉結合,再分別將兔抗KLF5、TAZ、UHRF1抗體加入切片,于4 ℃環境過夜,PBS清洗,再滴加二抗抗體,孵育20 min,滴加辣根過氧化物的鏈霉卵白素溶液進行孵育,20 min后,加DAB溶液顯色,再加入蘇木精溶液復染,不同梯度乙醇溶液脫水,二甲苯榮毅仁透明,中性樹膠溶液封片處理。

判定標準[9]:(1)細胞顯色劑深淺評分:0分為無染色;1分為淡黃色;2分為棕黃色;3分為棕褐色。(2)顯色細胞的百分率評分:隨機選取100個細胞,細胞陽性率<5%表示0分;細胞陽性率在5%～25%表示1分;細胞陽性率在26%～50%表示2分;細胞陽性率>50%表示3分。將細胞顯色劑深淺評分和顯色細胞的百分率評分相加,0分記為陰性;≥1分記為陽性。

1.3 統計學方法

應用SPSS 25.0軟件統計分析,KLF5、TAZ、UHRF1蛋白陽性表達率均以%表示,組間比較進行χ2檢驗,P<0.05表示組間存在意義。Pearson相關性分析KLF5、TAZ、UHRF1蛋白表達的關系,并進行Kappa檢驗。

2 結果

2.1 KLF5、TAZ、UHRF1在甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織的表達

甲狀腺乳頭狀癌組織中KLF5、TAZ、UHRF1蛋白陽性表達率(75.33%、70.00%、64.00%)均高于癌旁組織,差異均具有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 KLF5、TAZ、UHRF1在甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織中的表達(例,%)

2.2 KLF5、TAZ、UHRF1表達與甲狀腺乳頭癌臨床病理參數的關系

不同臨床分期、腫瘤組織大小、淋巴結轉移、甲狀腺外侵犯的KLF5、TAZ、UHRF1表達比較,差異均具有統計學意義(P<0.05),不同年齡、性別以及有無多灶性的KLF5、TAZ、UHRF1表達比較,差異均不存在統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3 甲狀腺乳頭癌組織中KLF5、TAZ、UHRF1表達相關性

KLF5蛋白表達分別與TAZ、UHRF1蛋白表達呈正相關(γ=0.594,0.491,P均<0.05),TAZ蛋白表達與UHRF1蛋白表達呈正相關(γ=0.486,P<0.05)。

3 討論

KLF5因子包括兩個結構域,即鋅指結構域和功能性結合結構域,其中鋅指結構域可以與啟動子區域GC位點結合,調節相關靶基因的轉錄水平,另外功能性結合結構域可以激活或者抑制轉錄活性。研究顯示[10],KLF5在多種腫瘤疾病中存在高表達現象,且表達水平越高患者的預后越差。在嚴云青等的研究中[11],研究結果顯示在肝癌細胞中,KLF5表達呈現上調,且其可以介導PI3K/Akt/Snail信號通路參與細胞的增殖及轉移。但是也有研究發現[12],KLF5在三陰性乳腺癌細胞中的表達較低。也有研究報道[13],KLF5在結腸癌組織中的表達較低,且結腸癌細胞中過表達KLF5可以抑制腫瘤細胞的生長。本次研究結果顯示,KLF5在甲狀腺乳頭癌組織中的表達顯著高于癌旁組織,表明KLF5表達與甲狀腺乳頭癌發生和發展有關。進一步研究發現,KLF5表達與甲狀腺乳頭癌臨床分期、腫瘤組織大小、淋巴結轉移、甲狀腺外侵犯均有關,此項研究結果進一步表明KLF5在甲狀腺乳頭癌不同發展過程中均具有顯著差異,且甲狀腺乳頭癌進展與KLF5表達有關,甲狀腺乳頭癌進展越嚴重,KLF5表達越高。

TAZ主要參與Hippo信號通路,正常生理條件下,在多種組織器官中均存在不同程度的表達,也可以參與組織分化;病理條件下,可參與腫瘤細胞侵襲、增殖及轉移等過程。研究顯示[14],抑制結腸癌細胞中TAZ表達以后,結腸癌細胞活性明顯下降,同時細胞遷移及侵襲能力也顯著下降,此項研究表明TAZ在結腸癌中具有重要作用。本次研究結果顯示,甲狀腺乳頭癌組織中TAZ蛋白表達顯著高于癌旁組織,并且還與甲狀腺乳頭癌臨床分期、腫瘤組織大小、淋巴結轉移、甲狀腺外侵犯等均存在關系,此項研究表明TAZ也參與了甲狀腺乳頭癌進展。

UHRF1在多種腫瘤疾病中均有不同程度表達,如乳腺癌[15]、食管癌[16]、胰腺癌[17]等。E2F1為UHRF1上游調節因子,p53可以介導E2F1因子,進而對UHRF1表達發揮抑制作用,由此表明p53基因活性下降也是造成腫瘤組織內UHRF1異常過表達的原因之一。如耿沖等[18]研究稱,UHRF1在乳腺癌組織中表達較高,且乳腺癌患者預后復發有關。本次研究結果發現,UHRF1在甲狀腺乳頭癌組織中表達高于癌旁組織,且與甲狀腺乳頭癌臨床分期、腫瘤組織大小、淋巴結轉移、甲狀腺外侵犯等病理參數有關,表明UHRF1與甲狀腺乳頭癌浸潤程度存在關系。

上述研究結果均表明,KLF5、TAZ、UHRF1均與甲狀腺乳頭癌發生和發展存在關系,推測三者可能存在關聯性,通過Pearson相關性分析,KLF5、TAZ、UHRF1之間均存在正相關性,推測KLF5、TAZ、UHRF1三者可能共同參與了甲狀腺乳頭癌進展。

綜上所述,甲狀腺乳頭癌組織中KLF5、TAZ、UHRF1的表達均上調,并且均與臨床分期、腫瘤組織大小、淋巴結轉移、甲狀腺外侵犯等病理參數存在關系。但是本次研究也存在不足,關于KLF5、TAZ、UHRF1三者共同作用參與甲狀腺乳頭癌疾病中的機制還需要深入研究。