南昌市2301 例5 歲以下兒童病毒性腹瀉病原檢測(cè)結(jié)果分析

張艷妮，熊英，龔甜，李健雄，施勇，徐剛

（江西省疾病預(yù)防控制中心，江西 南昌 330029）

腹瀉通常是指一天內(nèi)大便次數(shù)大于3 次且有性狀改變的消化道綜合征，一般可由多種因素、多種病原引起；是全球重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一[1]。在我國(guó)兒童腹瀉是一種常見疾病，其發(fā)病率幾次于呼吸道感染類疾病[2]。引起兒童腹瀉的常見病毒有輪狀病毒、諾如病毒、腸道腺病毒、星狀病毒等。本研究通過(guò)對(duì)2010 年5 月至2021 年4 月在江西省兒童醫(yī)院采集的2 301 份腹瀉患兒的標(biāo)本，采用Real-timePCR 和RT-PCR 等方法輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、星狀病毒等腹瀉相關(guān)病毒的檢測(cè)，了解南昌市病毒性腹瀉的病原體及其流行特征，為南昌市病毒性腹瀉的預(yù)防提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 根據(jù)《腹瀉癥候群監(jiān)測(cè)技術(shù)方法》里關(guān)于腹瀉病例的定義，在江西省兒童醫(yī)院采集每日排便3 次以上且糞便性狀有明顯改變門診腹瀉患兒的糞便標(biāo)本，于-80℃保存。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理 取15 mL 的離心管，加入4.5 mL的PBS，取0.5 g 的標(biāo)本，用震蕩器震蕩10 min，制成10%的混懸液，再3 000 rpm 離心10 min，取200 ul 上清提核酸，其余上清裝入凍存管于-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 病毒檢測(cè) 上清采用GIAGEN 公司的mini kit 試劑盒提取核酸，提取方法參考試劑盒說(shuō)明書；8 種病毒檢測(cè)方法參考 《腹瀉癥候群監(jiān)測(cè)技術(shù)方法》。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所采集的標(biāo)本按照患兒年齡進(jìn)行分組，0～6 月、6～12 月、1～2 歲、2～3 歲、3～4 歲、4～5 歲共6 組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；數(shù)據(jù)采用Excel 2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理，用SPSS 21 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基本情況 2010 年5 月至2021 年4 月共采集2 301 份腹瀉患兒標(biāo)本，其中男性患兒1 537 例，女性患兒764 例，男女患兒的比例為2.01:1。在2010年至2018 年的監(jiān)測(cè)中，腹瀉標(biāo)本的陽(yáng)性率總體呈現(xiàn)逐年下降趨勢(shì)，由2010 年最高61.11%下降至2017 年19.74%；見圖1。

圖1 2010 年5 月至2021 年4 月各年標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性率分布

2.2 病毒性腹瀉病原普構(gòu)成 2 301 份腹瀉患兒標(biāo)本，898 份標(biāo)本陽(yáng)性，總陽(yáng)性率為39.03%（898/2 301），其中混合感染130 份，占14.48%（130/898）。A 組輪狀病毒共檢出陽(yáng)性498 份，陽(yáng)性率為21.64%（498/2 301）；B 組輪狀病毒共檢出陽(yáng)性19份，陽(yáng)性率為0.90%（19/2 102）；C 組輪狀病毒共檢出陽(yáng)性13 份，陽(yáng)性率為0.62%（13/2 102）；諾如病毒GI 共檢出陽(yáng)性6 份，陽(yáng)性率為0.26%（6/2 301）；諾如病毒GII 共檢出陽(yáng)性260 份，陽(yáng)性率為11.30%（260/2 301）；扎如病毒共檢出陽(yáng)性18 份，陽(yáng)性率為0.78%（18/2 301）；腺病毒病毒共檢出陽(yáng)性156 份，陽(yáng)性率為6.78%（156/2 301）；星狀病毒共檢出陽(yáng)性65 份，陽(yáng)性率為2.82%（65/2 301）。

2.3 7 種病毒分別與性別、年齡、季節(jié)單因素分析A 組輪狀病毒、諾如病毒、腺病毒、星狀病毒、扎如病毒、B 組輪狀病毒和C 組輪狀病毒分別于性別、年齡、季節(jié)單因素關(guān)系分析，具體見表1—2。

2.3.1 A 組輪狀病毒 由表1 可以看到，輪狀病毒的感染與年齡和季節(jié)有關(guān)系，與性別沒(méi)有關(guān)系。與其他任意一年齡組相比，1～2 歲兒童是A 組輪狀病毒易感人群（P＜0.001），感染率高達(dá)29.84%；冬季是A 組輪狀病毒的高發(fā) （P＜0.001），陽(yáng)性率為43.2%，夏季的陽(yáng)性率最低（9.44%）。

2.3.2 諾如病毒 由表1 可以看到，諾如病毒的感染與性別、年齡和季節(jié)均存在相關(guān)性。男性的感染率（13.21%）明顯的高于女性（8.25%）（P＜0.001）；與其他任意一年齡組相比，1～2 歲組諾如病毒的陽(yáng)性率最高為15.48%（P＜0.001）；夏季是諾如病毒高發(fā)（P＜0.001），陽(yáng)性率為16.20%。諾如病毒進(jìn)行了分型，其中GI 為6 例，GII 為259 例，諾如病毒GII的構(gòu)成比97.74%，為諾如病毒流行的優(yōu)勢(shì)基因型。

表1 A 組輪狀病毒和諾如病毒感染因素的單因素分析

2.3.3 腺病毒 腺病毒的感染與性別和年齡均沒(méi)有關(guān)系，只與季節(jié)有關(guān)系。春季是腺病毒的高發(fā)季節(jié)（P＜0.05）,檢出率高達(dá)9.11%。

2.3.4 星狀病毒 星狀病毒的感染與性別和年齡均沒(méi)有關(guān)系，只與季節(jié)有關(guān)系。冬季是星狀病毒的高發(fā)季節(jié)（P＜0.001），檢出率高達(dá)6.67%，夏季檢出率最低為0.89%。

2.3.5 扎如病毒 扎如病毒的感染與性別和年齡均沒(méi)有關(guān)系，只與季節(jié)有關(guān)系。秋季是扎如病毒的高發(fā)季節(jié)（P＜0.05），檢出率最高1.62%。

2.3.6 B 組輪狀病毒和C 組輪狀病毒 B 組輪狀病毒感染與性別、年齡和季節(jié)均沒(méi)有關(guān)系。C 組輪狀病毒感染與性別沒(méi)有關(guān)系。與其他年齡組相比，3歲年齡組的檢出率最高3.28%，在4 歲年齡組未檢出C 組輪狀病毒。夏季是C 組輪狀病毒的高發(fā)季節(jié)（P＜0.05），檢出率最高1.36%。

2.4 監(jiān)測(cè)各年份病原普構(gòu)成 由連續(xù)11 年的監(jiān)測(cè)分析得知，引起5 歲以下兒童的腹瀉主要病原體是A 組輪狀病毒和諾如病毒，但是每年的病原普構(gòu)成又存在一定的差異；見圖2。A 組輪狀病毒和諾如病毒在2010 至2014 年所占的比例別為：2010 年54.55% 和39.23%、2011 年53.85% 和30.07%、2012 年 56.72% 和 32.84%、2013 年63.83%和18.08%、2014 年54.05%和35.13%，都是當(dāng)年引起兒童腹瀉的主要病原體；在2015 年，雖然A 組輪狀病毒仍然是主要病原體，但星狀病毒所占的比例卻和諾如病毒相同，也是當(dāng)年引起腹瀉的主要病原體。而在2016 年，扎如病毒則的檢出率比A 組輪狀病毒和諾如病毒都高，則成為當(dāng)年的主要病原體。2019 年腺病毒的檢出率明顯高于A 組輪狀病毒，諾如病毒和腺病毒則是引起腹瀉的主要病原體。

圖2 2010.5 至2021.4 各年腹瀉病原普構(gòu)成

表2 腺病毒、星狀病毒、扎如病毒和B 組、C 組輪狀病毒感染因素的單因素分析

3 討論

腹瀉是一種急性胃腸道傳染病，其主要傳播途徑為糞-口傳播，兒童是主要的易感人群；是一種嚴(yán)重危害兒童健康的疾病，是影響兒童健康發(fā)育的主要因素[3]。在連續(xù)11 年對(duì)南昌市5 歲以下腹瀉患兒糞便標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果分析顯示，2 歲以內(nèi)兒童腹瀉相關(guān)病原的檢出率是最高的，這可能與低齡幼兒全身免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善有關(guān)，與龔春華、龔四堂等文獻(xiàn)報(bào)道相一致[4-6]。A 組輪狀病毒和諾如病毒是引起5 歲以下兒童腹瀉的主要病原體，但隨著監(jiān)測(cè)時(shí)間的增加發(fā)現(xiàn)每一年的病原普構(gòu)成又存在一定的差異。2017 年只檢出了A 組輪狀病毒和星狀病毒，其他病毒均未檢出；2018 年的主要病原體則是A 組輪狀病毒和腺病毒；2019 年的主要病原體則是諾如病毒和腺病毒。B 組輪狀病毒和C組輪狀病毒的檢出率較少，而且自2015 年以后均沒(méi)有檢出，這說(shuō)明其不是南昌市5 歲以下兒童腹瀉的常見病原體，這與任增志等的文獻(xiàn)報(bào)道相一致[3]，有文獻(xiàn)報(bào)道B 組和C 組輪狀病毒是成人腹瀉的常見病原體[7-8]，因此在后續(xù)對(duì)兒童腹瀉的監(jiān)測(cè)中，并未對(duì)B 組和C 組輪狀病毒進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

A 組輪狀病毒是引起兒童腹瀉的主要病原體，但各年齡組的陽(yáng)性率有顯著性差異，1～2 歲組的陽(yáng)性率最高，6 個(gè)月以內(nèi)嬰兒陽(yáng)性率反而較低，這可能與6 個(gè)月以內(nèi)嬰兒有母?jìng)骺贵w的保護(hù)，對(duì)病毒有一定的抵抗力；6 月后母?jìng)骺贵w慢慢降低，而自身的免疫系統(tǒng)又發(fā)育不完全抵抗力低下有關(guān)。A 組輪狀病毒感染有明顯的季節(jié)性，秋冬季發(fā)病率顯著高于春夏季，冬季檢出率高達(dá)43.2%；這可能與冬季溫度較低，有利于病毒長(zhǎng)期存活有一定關(guān)系，這與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果相一致[6，8-9]。

諾如病毒感染與性別、年齡和季節(jié)都有關(guān)系，在年齡分布上與輪狀病毒相似，1～2 歲組的陽(yáng)性率最高；但是諾如病毒的高發(fā)季節(jié)則為夏季，與崔曉雙、文獻(xiàn)報(bào)道的秋季高發(fā)則不同[10]，與陳惠芳等[11]報(bào)道其流行沒(méi)有明顯的季節(jié)性分布也不相同；這可能與監(jiān)測(cè)病例的選擇、當(dāng)?shù)氐臍夂蛱攸c(diǎn)等因素有關(guān)。本研究重點(diǎn)是監(jiān)測(cè)5 歲以下兒童的腹瀉情況，并未對(duì)5 歲以上兒童及其他年齡組人群進(jìn)行監(jiān)測(cè)。諾如病毒的傳染性強(qiáng)，有多種傳播途徑，可經(jīng)人傳人、食物和水傳播和糞口途徑等途徑傳播，人群聚集的地方易引起暴發(fā)；諾如病毒全年均可檢出，應(yīng)加強(qiáng)南昌市諾如病毒的監(jiān)測(cè)，全面掌握其流行規(guī)律及特點(diǎn)，諾如病毒的預(yù)防和防控提供數(shù)據(jù)支撐[12]。

腺病毒也是引起腹瀉的一種常見病原體，可通過(guò)糞-口途徑傳播。本研究顯示腺病毒的陽(yáng)性率為6.78%，除2017 年外，其它年份均可檢出，其感染性與季節(jié)性有關(guān)，春季為其高發(fā)季節(jié)。星狀病毒也是一種引起腹瀉的常見病原體，但檢出率一直處于較低的水平，且冬季為其高發(fā)季節(jié)，年齡分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。扎如病毒只在2012、2013 和2016年有檢出，且2016 年扎如病毒的檢出率最高38.71%，并高于A 組輪狀病毒29.03%，成為當(dāng)年腹瀉的主要病原體。但是扎如病毒在其他年份檢出率很低或者未檢出，很難掌握扎如病毒的流行特征，后續(xù)可以加強(qiáng)扎如病毒的監(jiān)測(cè)，掌握其在南昌市的流行特點(diǎn)與規(guī)律。

隨著監(jiān)測(cè)研究的持續(xù)進(jìn)行，發(fā)現(xiàn)的合并感染病例越來(lái)越多，也越來(lái)越受到人們的重視。本研究共發(fā)現(xiàn)124 例合并感染，占比高達(dá)14.22%；明顯高于陳惠芳等文獻(xiàn)研究報(bào)道4.8%和劉志華等報(bào)道的10.4%[11-13]。合并感染對(duì)醫(yī)生確定腹瀉病原帶來(lái)一定的困難，可開展腹瀉多病原監(jiān)測(cè)，為醫(yī)生診斷提供處理依據(jù)。

綜上所述，通過(guò)對(duì)南昌市2010 年5 月至2021年4 月的5 歲以下兒童腹瀉監(jiān)測(cè)研究發(fā)現(xiàn)，南昌市5 歲以下兒童腹瀉的主要病原體是輪狀病毒和諾如病毒，其次是腺病毒，星狀病毒和扎如病毒一直維持在一個(gè)較低的檢出水平；通過(guò)本研究對(duì)南昌市腹瀉癥候群病原普構(gòu)成有了全面的了解，為腹瀉類疾病的防控及疫情的處置提供有效的數(shù)據(jù)支撐。