傳統與光譜流式細胞儀對自發熒光樣本檢測的比較

陳家歡，李丹丹，孫 艷，王藝蕾，王 鐸，孔 杰，劉曉玲*

1.中國醫學科學院基礎醫學研究所 北京協和醫學院基礎學院 醫學分子生物學國家重點實驗室，北京 100005；2.中國醫學科學院 北京協和醫學院 北京協和醫院 檢驗科，北京 100730；3.長治醫學院，山西 長治 046000

某些組織、細胞容易被波長488 nm激光器激發而產生自發熒光,其發射光譜通常對異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)通道產生干擾[1-2],降低該通道的信噪比。流式細胞術(flow cytometry)主要通過采集熒光信號來解讀生物學信息,自發熒光作為額外的熒光信號在傳統流式細胞儀上不易被分析,從而影響流式結果。凋亡經常會導致FITC通道背景熒光增強。膜聯蛋白V(annexin V,AV)聯合碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色是一種廣泛應用的流式檢測細胞凋亡的經典方法。因此本研究以凋亡作為模型研究自發熒光在不同流式細胞儀檢測的異同。

流式細胞儀的配置是影響流式數據分辨率和準確性的關鍵因素。近幾年推出的全光譜流式細胞儀(spectral flow cytometers)可將自發熒光作為一種單獨的熒光信號來解析[3-4]。本研究旨在比較傳統和光譜流式細胞儀對自發熒光樣本凋亡數據解析的差異,同時為研究細胞凋亡提供方法學的參考,提高實驗效率及其數據的準確性。

1 材料與方法

1.1 材料

人肝腹水腺癌細胞系(SK-hep-1)、RPM1640培養基、胎牛血清、0.05%胰蛋白酶、磷酸鹽緩沖液、青鏈霉素(中國醫學科學院基礎醫學研究所細胞資源中心)。FITC或別藻藍素(allophycocyanin,APC)標記的annexin V/PI細胞凋亡檢測試劑盒(BioLegend公司)。

1.2 方法

1.2.1 單細胞懸液制備:細胞匯合度達 80%～90%時進行單細胞制備(6 cm培養皿)。……