BM-MSCs來源外泌體介導鐵死亡減輕大鼠心肌細胞系H9c2缺氧/復氧損傷

閆 霖，陸玨秀，羅 穎，劉先霞

海南醫學院第二附屬醫院 心血管內科，海南 海口 570100

急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是心血管系統的急癥和重癥,發病率和病死率居高不下,及時開通罪犯血管是治療心梗的首選策略[1]。然而在心梗血運重建后的再灌注過程可能會導致心臟損傷進一步加重,出現心肌缺血/再灌注損傷(myocardial ischemia-reperfusion injury,MI/RI)[2]。近年來,骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)移植治療作為一項前沿的臨床新技術,逐漸應用于心肌缺血/再灌注治療領域[3]。越來越多的研究證據表明,BM-MSCs可通過旁分泌大量細胞因子、外泌體(exosomes, exos),發揮抗炎、促進細胞增殖、減少凋亡、誘導血管新生和心肌再生等作用[4-5]。

外泌體是由細胞分泌的直徑30～150 nm的盤狀囊泡,可攜帶多種蛋白、mRNA、lncRNA、miRNA等,并參與到細胞之間的通訊[6]。外泌體能夠通過配體/受體直接識別,或經胞飲、胞吞及與受體細胞膜融合等多種方式調控復雜的細胞生物學功能[7]。初步研究表明外泌體在MSCs旁分泌途徑治療心肌缺血及再灌注損傷過程中發揮重要的作用[8]。因此,本文將從細胞層面探討BM-MSCs來源外泌體(BM-MSCs-derived exosome,BM-MSCs-exo)對缺氣/復氧(anoxia-reoxygenation,A/R)心肌細胞損傷的保護作用及其可能的分子機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞: 大鼠心肌細胞系(rat cardiomyoblast cell line,H9c2)、大鼠骨髓間充質干細胞(BM-MSCs)(中國科學院細胞庫)。

1.1.2 主要試劑: 一抗TSG101、CD81、CD9、GPX4、SLC7A11、TFR1和GAPDH(CST公司);鐵死亡誘導劑Erastin(MCE生物科技公司);鐵死亡生化試劑盒包括丙二醛(malondialdehyde,MDA)檢測試劑盒、Fe2+離子檢測試劑盒和谷胱甘肽(glutathione,GSH)檢測試劑盒(北京普萊利基因技術有限公司);胎牛血清、DMEM培養基(Thermo Fisher Scientific公司)。

1.2 方法

1.2.1 BM-MSCs外泌體(BM-MSCs-exo)的獲取與鑒定:采用梯度離心法提取BM-MSCs來源外泌體。……