PABPC1對人單核白血病細胞系THP-1翻譯活性的影響

翟雪瑩，王 芳，余 佳

中國醫學科學院基礎醫學研究所 北京協和醫學院基礎學院 醫學分子生物學國家重點實驗室，北京 100005

急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)是成人急性白血病中最常見的類型,是一組基因改變導致的造血干細胞克隆性增殖失調的高度異質性的血液系統惡性疾病[1]。目前,標準化學治療及聯合造血干細胞移植是AML患者臨床治療的主要手段[2]。但是AML在形態學、免疫學表型、細胞遺傳學和表觀遺傳學等方面具有高度的異質性,AML患者間的生存概率和預后差異很大,大多數AML患者經標準化治療后結果不理想,預后較差[3]。過去10～15年大量研究鑒定出AML中分子和表型的多樣性,并揭示了各種AML中分子和免疫治療靶點的可能性,提供了治療AML的新思路[4]。細胞質多聚腺苷酸結合蛋白-1(cytoplasmic poly(A)binding protein-1,PABPC1)在細胞質中介導mRNA的多聚腺苷酸化,參與翻譯起始及mRNA降解過程,在腫瘤的發生發展中起重要作用[5]。目前有關PABPC1在AML中的功能鮮有報道,THP-1細胞是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細胞白血病細胞系,本研究以THP-1細胞為研究對象,采用短發夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)敲低PABPC1表達檢測其對THP-1細胞翻譯的影響,探究PABPC1作為治療AML潛在靶點的可能性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞:商品化人單核細胞白血病細胞系THP-1(北京細胞中心)。

1.1.2 主要試劑:胎牛血清FBS(Life Technologies公司);Sucrose(Amresco公司);DEPC、KCl、Triton X-100、HEPES、DTT(Sigma-Aldrich公司);RNase Inhibitor- EDTA free、DNase Ⅰ(Promega公司);Protein safeTMprotease inhibitor cocktail-EDTA-free(TransGen Biotech公司);Glycerol(Solarbio公司); CHX-2112S(Cell Signaling Technology公司);UltraPureTM1 mol/L Tris-HCI緩沖液、NaCl、MgCl2、RNase Ⅰ、TrizolTMLS Reagent InvitrogenTM、UltraPureTMDNase/RNase-Free Distilled Water(Thermo Fisher Scientific公司)。

1.2 方法

1.2.1 細胞的培養及處理:取THP-1細胞復蘇,用含10%滅活FBS的RPMI-1640培養基培養(37 ℃、5% CO2),待細胞活力較好并增殖滿10 cm皿后,將THP-1細胞消化重懸,計數后接種于6孔板中(2×105/孔),將細胞中……