白三烯C4及2型固有淋巴細胞在支氣管肺發育不良中的變化及意義

季 瑋，朱 玥，堯惠慈，盧紅艷

江蘇大學附屬醫院 兒科，江蘇 鎮江 212001

支氣管肺發育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是早產兒常見的呼吸系統疾病,病理特征主要是肺發育受阻及肺微血管發育不良,具體作用機制尚不清楚[1]。研究發現,大量促炎因子存在于BPD患兒的氣道分泌物[2],表明炎性反應仍為BPD發生發展的重要環節。

2型固有淋巴細胞(type 2 innate lymphoid cell,ILC2)是2型炎性反應的重要效應細胞[3]。本課題組前期研究發現,ILC2參與了BPD氣道炎性反應的過程[4],但具體作用機制不明確。近年發現,白三烯C4(leukotriene C4,LTC4)可與半胱氨酸白三烯受體1(cysteinyl leukotriene receptor 1,CysLT1R)結合作用于ILC2發揮生物學作用,但研究主要集中在哮喘、過敏性鼻炎等疾病[5],在BPD中尚無報道。因此,本研究通過建立 BPD模型小鼠,對此進行研究,為深入研究BPD的發病機制和防治策略提供思路。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 動物:SPF級C57BL/6小鼠(江蘇大學實驗動物中心),研究經江蘇大學動物倫理委員會批準[許可證號為SYXK(蘇)2018-0053]。

1.1.2 主要試劑:兔多克隆白三烯C4合酶(leukotriene C4-synthase,LTC4S)抗體(NOVUS生物公司);小鼠單克隆β-actin抗體(CST公司);兔多克隆SPD抗體(Bioss公司);小鼠單克隆膜黏蛋白[podoplamin(PDPN)/T1α]抗體(Santa Cruz公司);HRP標記山羊抗兔IgG抗體、HRP標記山羊抗小鼠IgG抗體、蛋白酶抑制劑、紅細胞裂解液(Beyotime公司);Lineage-AF700單克隆抗體、CD90.2-PE單克隆抗體、CD45-BV510單克隆抗體(Biolegend公司);CysLT1R-FITC多克隆抗體(Cayman公司);引物(生工生物工程股份有限公司);SDS-PAGE、預染蛋白marker、熒光定量PCR試劑(諾唯贊生物科技股份有限公司);LTC4 ELISA試劑盒(酶免生物科技有限公司);IL-5、IL-13 ELISA試劑盒(Elabscience公司);IL-4(聯科生物技術股份有限公司);Trizol裂解液(Ambion公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠的分組及處理:按參考文獻[6]復制BPD模型,將小鼠隨機分為空氣組和高氧組,每組9只,高氧組置于85%密閉氧氣盒1、7及14 d,空氣組置于同一室內空氣下,每個時間點隨機取3只小鼠。……