HPLC法測定地塞米松磷酸鈉注射液中地塞米松磷酸鈉含量

張立江，王 琨

(國藥集團容生制藥有限公司，河南 焦作 454950)

地塞米松注射液主要成分為：地塞米松磷酸鈉，化學名稱為16α-甲基-11β,17α,21-三羥基-9α-氟孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮-21-磷酸酯二鈉鹽。它是用于某些對皮質類固醇治療有反應的內分泌和非內分泌疾病。地塞米松磷酸鈉注射液可作為控制由腦腫瘤或與神經外科手術相關的腦水腫的輔助藥物，但不適用于因顱腦外傷引起的水腫的情況。呼吸系統疾病、支氣管哮喘和吸入性肺炎、皮膚病中毒性表皮壞死松解癥、休克，需要高藥物劑量的輔助治療。地塞米松已被證明在休克的早期治療中是有益的，但對整體生存情況可能不會產生影響。對美國藥典、英國藥典、中國藥典的方法進行重復，并對中國藥典測定方法進行優化色譜條件改用辛烷基硅烷健合硅膠為填充劑，結果表明，此方法穩定性好，結果準確可靠，靈敏度高。

1 方法對比與方法重復

對中國藥典、美國藥典、英國藥典的方法進行對比，并對方法進行重復，結果顯示，美國藥典方法主峰出峰時間為 21.449 min，且存在拖尾(色譜圖見圖1)；英國藥典方法主峰出峰時間為 21.000 min(色譜圖見圖2)；中國藥典方法主峰出峰時間為 33.402 min，色譜圖見圖3。主峰出峰時間均較長。方法對比見表1

圖1 美國藥典方法重復典型圖譜

圖2 英國藥典方法重復典型圖譜

圖3 中國藥典方法重復典型圖譜

2 方法優化結果

2.1 材料

1)儀器

高效液相色譜儀(Waters 2695)：美國Waters公司；S210-K pH計：梅特勒-托利多有限公司；梅特勒分析天平。

2)試劑

甲醇(HPLC級)：康科德科技有限公司；乙腈(HPLC級)：康科德科技有限公司；三乙胺(AR)：康科德科技有限公司；磷酸(AR):鳳船公司；地塞米松磷酸酯對照品：批號10116-201803，含量99.1%；中國食品藥品檢定研究院。

2.2 方法

1)色譜條件

Kromasil C8(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相： 三乙胺溶液(取三乙胺7.5 mL，加水稀釋1000 mL，用磷酸調節pH值至3.0)-甲醇-乙腈(55∶40∶5)；流速 1.5 mL/min；檢測波長 242 nm；柱溫 30 ℃；進樣體積 20 μL。

表1 地塞米松磷酸鈉注射液含量檢測方法比較

2)樣品配制

①對照品溶液配制：取地塞米松磷酸酯對照品 20 mg，精密稱定，置 50 mL 量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5 mL 至 50 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

②供試品溶液配制：取本品10支混勻，精密量取 2 mL，置 25 mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取 2 mL 至 20 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。

2.3 結果

1)專屬性試驗

空白溶劑及空白輔料無干擾；系統適用性溶液中，地塞米松磷酸酯峰理論塔板數為7097(大于5000)，地塞米松磷酸酯峰與雜質地塞米松峰的分離度為7.29(大于4.4)；已知雜質不干擾主峰的檢測，空白溶劑、輔料無干擾，主峰出峰時間為 13.667 min。色譜圖見圖4。

圖4 專屬性圖譜

2)線性關系

取地塞米松磷酸酯用流動相配制成每 1 mL 含 0.016 mg、0.04 mg、0.048 mg、0.056 mg 的溶液。量取各質量濃度對照品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。濃度與峰面積關系見表2，線性關系見圖5。

以峰面積為橫坐標，對照品濃度為縱坐標，作線性回歸方程。得回歸方程為：y=26233254.83x+3515.07。

表2 線性關系

圖5 線性關系

結果表明，在限度標準為40%～140%范圍內，地塞米松磷酸酯和地塞米松磷酸鈉質量濃度與峰面積間線性關系良好，r值均為1.00000(大于0.998)，Y軸截距相對于100%限度濃度響應值均小于2.0%，符合規定。

3)重復性試驗

取地塞米松磷酸鈉注射液，按供試品溶液配制法平行配制6份供試品溶液，進樣，記錄色譜圖。數據見表3。

結果表明：地塞米松磷酸鈉注射液6份供試品溶液中，含量的平均值為102.4%，RSD為0.12%(小于1.0%)，符合要求，該方法重復性良好。

表3 重復性試驗

4)精密度試驗

參照重復性試驗于不同日期、不同儀器，重復檢測。

結果表明(表4)，中間精密度試驗中，6份供試品溶液中，含量的平均值為102.864%，RSD為0.74%(小于1.0%)，12份供試品溶液含量的RSD為0.74%(小于2.0%)，該方法精密度良好。

表4 精密度試驗

5)回收率試驗

取地塞米松磷酸鈉按80%、100%、120%供試品溶液配制各3份。分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算回收率。數據見表5。結果表明，限度約為80%～120%的濃度范圍內，9份供試品溶液回收率均在98.0%～102.0%范圍內，回收率平均值為99.5%，RSD為0.70%(小于2.0%)，均符合規定，該方法準確度良好。

表5 回收率試驗

3 討論

地塞米松磷酸鈉注射液含量測定方法在中國藥典、美國藥典、英國藥典中都有收載，均采用高效液相色法。通過對各國藥典測定方法對比發現，色譜柱填料基本一致(均為C18柱)，但供試品溶液質量濃度及檢測波長不一致，流動相組成不同。嘗試改用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑進行方法優化，并對檢測方法進行必要的方法驗證，可滿足地塞米松磷酸鈉注射液中地塞米松磷酸鈉的含量檢測，同時縮短檢測時間，大大降低了成本，提高了工作效率。