DNMT3b在膀胱癌組織中的表達及與經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的相關性

武海波 李 磊 谷泉霖

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0025～0028)

膀胱癌作為常見的泌尿外科腫瘤，淺表性膀胱癌占大多數，臨床上治療膀胱癌的首選手段為手術治療，其中經尿道膀胱腫瘤電切術最為常見[1-2]。有研究顯示，經該手術治療的患者術后存在較高的復發率，因此在術前明確易導致膀胱癌患者術后復發的相關原因并及時干預是降低其術后復發及改善預后的關鍵措施[3-4]。DNA 甲基轉移酶DNMT3b 是 DNA 甲基化的酶促參與者，作為DNA甲基轉移酶，DNMT3B已經通過調節基因的啟動子用于增殖、遷移和侵襲[5-6]。重要的甲基化參與腫瘤進展，例如，DNMT3B 介導的轉移抑制因子 1 (MTSS1)啟動子的甲基化在表觀遺傳上抑制了膀胱尿路上皮癌中的 MTSS1 轉錄[7-8]。因此本研究檢測了DNMT3b在膀胱癌組織中的表達，并分析其與經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的相關性，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年4月至2018年4月本院收治膀胱癌患者82例，年齡42～79歲，平均(67.37 ±7.68)歲。納入標準：①符合膀胱癌的臨床標準[9]，經臨床確診為膀胱癌；②經尿道膀胱腫瘤電切術治療；③患者簽署自愿受試同意書，患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標準：①精神疾病患者；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并其他器官嚴重性病變患者；④臨床病歷及隨訪資料不完整或缺乏準確性。

1.2 免疫組織化學染色

使用10%甲醛溶液固定膀胱癌組織，經石蠟包埋后制備4 μm厚切片。切片烘烤后分別用二甲苯、酒精脫蠟、脫水；自來水沖洗后用H2O2溶液浸泡10 min以滅活內源過氧化物酶，PBS溶液沖洗3次；切片在檸檬酸鹽緩沖液中加熱15 min修復抗原，PBS溶液沖洗切片3次；甩干后滴加0.25%牛血清蛋白，室溫孵育30 min；分別加CCL2、CDCA5抗體，4 ℃孵育14 h；復溫90 min、PBS清洗后加生物素標記的二抗，38 ℃環境下孵育30 min，PBS清洗3次，每次5 min； DAB顯色劑染色，5 min后沖洗進行蘇木精復染1 min，沖洗、脫水后二甲苯固定，風干后封片。具體操作按照免疫組化染色試劑盒說明書進行。置于顯微鏡下觀察，并采集圖像資料。每張切片隨機選取5個高倍鏡視野進行陽性細胞計數。經免疫組化染色，細胞質呈棕黃色或棕褐色的細胞為陽性細胞。染色結果評分標準：按照染色強度和陽性細胞所占百分比記分。①染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②陽性細胞所占百分比： <5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩者記分相乘，≤3分為陰性表達，>3分為陽性表達。

1.3 收集臨床資料以及隨訪資料

收集患者年齡、性別、組織學分級、腫瘤最大徑等臨床資料。采用電話及門診或住院復查等方式進行3年隨訪，了解患者生存情況。隨訪時間截止2021年5月，根據隨訪結果將患者分為復發組和未復發組。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 膀胱癌組織中DNMT3b表達及與患者的臨床病理特征的關系

82例膀胱癌組織中DNMT3b陽性表達57例(69.5%)。DNMT3b表達與TNM分期、T分期、腫瘤最大直徑、淋巴結轉移有關(P<0.05)，見表1。

2.2 影響膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的單因素分析

經尿道膀胱腫瘤電切術后復發14例。DNMT3b表達陽性、TNM分期越高膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發率均顯著升高(P<0.05)，見表2。

表2 影響膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的單因素分析/例

2.3 影響膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發多因素logistic分析

多因素logistic 回歸分析顯示，DNMT3b表達、TNM分期均為影響膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的獨立危險因素(P<0.05)， 見表3。

表3 影響膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的多因素logistic分析

3 討論

膀胱癌是一種發生于膀胱黏膜的惡性腫瘤，是世界范圍內第10位最常見的癌癥類型[10]。據全球癌癥統計，2018年膀胱癌新發病例約54.9萬例，死亡20萬例[11]。膀胱癌不僅影響泌尿系統的功能，而且容易復發和轉移[12]。目前臨床上所有實體腫瘤治療中，膀胱癌患者術后復發率最高，因此術后復發成為了評估膀胱癌患者術后預后的重要性指標[13]。研究報道稱影響膀胱癌患者術后復發的因素有很多，如致癌物質的持續接觸和刺激以及手術治療不徹底等，但是具體因素還尚不清楚[14-15]。

DNA甲基化，即由DNA甲基轉移酶(DNMT)催化的甲基向DNA分子的轉移，幾乎只發生在哺乳動物的CpG島中[16-17]。非CpG甲基化發生在胚胎干細胞中，最近在人類B細胞分化過程中觀察到[18]。DNMT家族包括DNMT1、DNMT3a和DNMT3b。DNMT1已被證明在體細胞中維持甲基化，并且DNMT3a和DNMT3b被認為參與胚胎干細胞和早期胚胎的DNA從頭甲基化[19-20]。最近發現，與相應的正常組織相比，DNMT1、DNMT3a和DNMT3b在幾種人類腫瘤中過表達[21]。DNMT3b基因在膀胱癌組織中存在過表達，參與了膀胱癌的發生發展[22]。本研究中DNMT3b與TNM分期、T分期、腫瘤最大直徑、淋巴結轉移有關。DNMT3b表達陽性膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發率更高。提示DNMT3b蛋白是經尿道膀胱腫瘤電切術后膀胱癌復發的危險因子。有研究顯示臨床分期是膀胱癌患者術后復發的預測因素，且分期越高，其復發的可能性越大[23]。本研究中TNM分期越高膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發率也越高，這與既往研究一致。本研究中DNMT3b表達、TNM分期均為影響膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的獨立危險因素，提示DNMT3b表達、TNM分期可作為預測膀胱癌患者經尿道膀胱腫瘤電切術后復發的指標。

綜上所述， 經尿道膀胱腫瘤電切術治療的膀胱癌患者術后存在一定的復發性，DNMT3b表達、TNM分期是導致膀胱癌患者術后復發的獨立危險因素。但本研究規模較小，未進行深入研究，在今后的研究中還需要擴大樣本量以及研究范圍，完善實驗結果，確保其準確性，為新的預測指標應用于臨床提供參考依據。