子宮內膜癌組織中Ki-67、p16蛋白的表達及其對手術治療預后的評估價值

司小麗 蘇寶珍

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0016～0020)

手術治療是子宮內膜癌(endometrial carcinoma，EC)患者常規治療手段，可解除腫瘤占位效應，延長患者生存期[1]。但是，由于多種因素的影響，EC患者在手術切除后可能會出現腫瘤復發轉移情況，影響預后[2]。因此，早期診斷及早期治療，對改善EC患者預后具有積極意義。目前，腫瘤復發轉移的常規診斷方法是影像學檢查，診斷準確度較高，但是難以預測復發、轉移的風險，在EC患者預后預測方面存在一定的局限，因此，需要尋找與EC患者預后有關的預測指標，為后續個體化治療方案的實施提供參考。增殖細胞核抗原-67(Ki-67)是一種與細胞增殖相關的核抗原，主要存在于組織增殖核基因的核蛋白，與細胞增殖活性有關[3]。Ki-67半衰期較短，脫離細胞周期后降解較快，因而被廣泛用于腫瘤細胞增殖活性檢查中。研究證實，Ki-67表達與EC患者臨床分期有關，Ki-67影響EC細胞的遷移、轉移[4]。由此可見，Ki-67可能通過對EC患者癌細胞的增殖、遷移的影響，進一步影響患者術后預后。抑癌基因p16是近年來腫瘤組織中發現的抑癌基因，在多種惡性腫瘤中都有存在，如卵巢癌、乳腺癌等[5]。p16蛋白甲基化可促進癌細胞增殖，誘發或加重癌癥[6]。由此推測，p16可能通過促進EC細胞增殖，對EC患者手術預后情況產生不利影響。基于此，本研究就Ki-67、p16在EC組織中的表達情況進行分析，總結兩者對手術治療預后的評估價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

經醫院醫學倫理委員會審核通過，選擇2018年10月至2021年10月長葛市人民醫院婦產科137例實施手術治療的EC患者作為研究對象，患者與家屬均簽署同意書。研究對象年齡37～68歲，平均(53.31±5.68)歲；EC分型：Ⅰ型86例，Ⅱ型51例。國際婦產科協會(Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO)分期[7]：Ⅰ期38例，Ⅱ期45例，Ⅲ期40例，Ⅳ期14例；分化程度：高分化63例，中分化62例，低分化12例。

1.2 入選標準

納入標準：①符合《子宮內膜癌診斷與治療指南(第四版)》[8]中EC診斷標準；②經子宮內膜活檢確診；③初次確診；④首次接受EC手術治療；⑤預計生存期>3個月；⑥獲得隨訪，且隨訪時間≥2年。排除標準：①術前淋巴結轉移；合并子宮肌瘤、子宮腺肌癥等子宮良性疾病；②合并其他部位惡性腫瘤；③合并先天性心臟病、肝腎衰竭等重要臟器疾病；④合并感染性疾病；⑤術前有放、化療史；⑥術前有免疫制劑、性激素使用史。

1.3 方法

1.3.1 實驗室指標檢查方法 (1)糖類抗原(carbohydrate antigen，CA)125：采集患者空腹靜脈血1 ml，以4 000 r/min轉速離心10 min，離心半徑為10 cm，采用全自動生化分析儀(美國雅培，i2000型)，以電化學發光法測定CA125；(2)Ki-67：收集EC組織標本，甲醛溶液固定，石蠟包埋處理、切片、脫蠟水化、孵育，加入相應單抗(均購自美國abcam公司)，觀察染色結果，標記Ki-67(以EC細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性染色)，每張切片檢測高倍鏡視野(40×)，計算Ki-67染色陽性細胞數所占百分比并作為Ki-67指數；(3)p16：采集EC組織標本，采用熒光定量PCR法測定抑癌基因p16表達，對標本進行兩項分離，紫外吸收法檢測RNA溶液純度，合成cDNA樣品后逆轉錄，使用實時熒光聚合酶鏈式反應分析儀(賽默飛，FQD-96A型)，設定抑癌基因p16表達量為100，計算抑癌基因p16表達。

1.3.2 資料調查方法 入院時收集患者基線資料，包括年齡、EC分型、FIGO分期、腫瘤細胞分化程度等。

1.3.3 預后評估方法和分組方法 EC根治術后隨訪2年，第1年，間隔3個月復查1次；第2年間隔6個月復查1次。CT或MRI等影像學檢查EC復發轉移情況，復發：原病灶切除處出現新病灶；轉移：淋巴結腫大(有3個及以上直徑<8 cm淋巴結簇集，或單個淋巴結直徑≥8 cm)，且淋巴結內可見成團異型細胞。將復發或轉移的患者均納入預后不良組，未復發且未轉移的患者納入預后良好組。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 EC患者手術預后情況

隨訪2年，137例EC患者中，17例復發、4例轉移，預后不良發生率為15.33%(21/137)。

2.2 不同預后的EC患者基線資料與實驗室指標

預后不良組EC患者FIGO分期高于預后良好組，CA125表達、Ki-67表達高于預后良好組，p16表達低于預后良好組，差異有統計學意義(P<0.05)；其余資料對比，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同預后的EC患者基線資料與實驗室指標

2.3 EC患者手術治療預后相關因素Logistics回歸分析

將FIGO分期、CA125、Ki-67、p16作為自變量，將EC患者手術治療預后情況作為因變量(1=預后不良，0=預后良好)，經Logistic回歸分析結果顯示，FIGO分期高、Ki-67表達高可能是EC患者淋巴結轉移的風險因子(OR>1，P<0.05)，p16表達高可能是EC患者手術治療預后的保護因子(OR<1，P<0.05)。見表2。

表2 EC患者手術治療預后相關因素Logistics回歸分析

2.4 子宮內膜癌患者組織中Ki-67、p16蛋白表達預測手術治療預后的ROC曲線

將EC患者手術治療預后情況作為狀態變量(1=預后不良，0=預后良好)，將子宮內膜癌組織中Ki-67、p16蛋白表達作為檢驗變量，繪制ROC曲線圖(圖1)，結果顯示，Ki-67、p16蛋白表達預測EC患者手術治療預后不良的AUC分別為0.833、0.827，均有一定預測價值。相關參數見表3。

圖1 子宮內膜癌患者組織中Ki-67、p16蛋白表達預測手術治療預后的ROC曲線

表3 子宮內膜癌患者組織中Ki-67、p16蛋白表達預測手術治療預后的ROC分析

2.5 聯合子宮內膜癌患者組織中Ki-67、p16蛋白表達預測手術治療預后的決策曲線

以凈受益率為縱坐標，高風險閾值為橫坐標，繪制決策曲線(圖2)，結果顯示，在閾值0.2～1.0范圍內，聯合子宮內膜癌患者組織中Ki-67、p16蛋白表達預測EC患者手術治療預后不良的凈受益率優于單獨某一指標，且在高風險閾值0.0～1.0內的凈受益率始終大于0，始終有臨床意義，凈受益率最大值為0.153。

3 討論

EC治療目前以手術為主，手術治療可有效遏制疾病進展，延長患者生存時間[9]。但是，患者術后仍可能會出現腫瘤復發轉移情況，增加預后不良風險[10]。因此，積極找出可預測EC患者手術治療后預后不良的相關指標，對早期干預尤為重要。

本研究結果顯示，隨訪2年，本研究內137例EC患者中，17例復發，4例轉移，預后不良發生率為15.33%。說明， EC患者術后存在較高的預后不良風險，有必要分析相關指標，指導后續EC患者預后改善。原癌基因、抑癌基因在EC的發生發展中起到重要的作用,且影響著預后情況，其中，Ki-67是一種細胞核相關抗原，在增殖細胞中表達，在有絲分裂后迅速降解[11]。Ki-67作為核增殖標志基因，能反映癌細胞的增殖狀態,是目前判斷腫瘤惡性程度、增殖活性、預后不良的可靠指標[12]。研究表明，Ki-67表達與腫瘤的惡性程度、浸潤深度關系密切，其高表達表明EC患者腫瘤級別較高[13]。可見，Ki-67表達與EC患者手術治療預后情況可能有關。p16屬于多重腫瘤抑制基因，通過細胞周期調節蛋白，抑制癌細胞過度增殖[14]。p16作為高危型HPV感染的重要檢測抗體，宮頸病變中表達異常，可能與EC患者手術治療預后不良有關[15]。同時，有研究證實，p16在惡性腫瘤組織中表達異常[16]。

本研究結果進一步經Logistic回歸分析顯示，FIGO分期高、Ki-67表達高可能是EC患者復發轉移的風險因子，p16表達高可能是EC患者手術治療預后的保護因子。分析原因可能為：Ki-67作為有絲分裂磷蛋白單克隆抗體抗原，參與細胞周期的調控，和細胞分裂增殖聯系緊密，可能通過促進手術治療后殘余EC癌細胞增殖，誘導EC病灶發生復發或轉移，增加手術治療預后不良的發生風險[17-18]。Ki-67誘導驅動蛋白家族15抗體進入有絲分裂，維持紡錘體的穩定，是維持DNA結構必需的支架蛋白，Ki-67表達異常會影響癌細胞增殖，增加癌細胞侵襲、遷移的可能，從而影響EC患者手術治療預后情況[19-20]。p16結合細胞周期蛋白依賴性激酶，抑制有絲分裂，使癌細胞停止增生和惡性轉化，EC患者癌組織中p16低表達，而缺少p16可能造成癌細胞增殖，加快惡性轉化，影響臨床預后[21]。p16表達p16蛋白，抑制細胞周期蛋白依賴性激酶活性，負調控細胞周期進展，抑制癌基因磷酸化，當p16基因發生缺失，對細胞增殖的抑制作用降低，導致EC癌細胞過度增殖，誘發腫瘤，造成EC術后復發、轉移，增加不良預后的風險[22-23]。

另外，本研究繪制ROC曲線圖，結果顯示，Ki-67、p16蛋白表達預測EC患者手術治療預后不良的AUC分別為0.833、0.827，均有一定預測價值；繪制決策曲線結果顯示，在閾值0.2～1.0范圍內，聯合子宮內膜癌患者組織中Ki-67、p16蛋白表達預測EC患者手術治療預后不良的凈受益率優于單獨某一指標，且在高風險閾值0.0～1.0內的凈受益率始終大于0，始終有臨床意義，凈受益率最大值為0.153。

綜上所述，子宮內膜癌患者組織中Ki-67、p16蛋白表達與手術治療預后有關，用于預測預后不良具有一定的價值，且聯合預測獲得的凈受益率更高。