CLDN1與TMPRSS4在肝癌組織中的表達及其臨床意義

李 慧 張金良

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0007～0010)

肝癌是一種發生于肝臟的惡性腫瘤，早期無典型癥狀，待患者出現發熱、肝區疼痛、乏力等明顯癥狀時多已進入中晚期，甚至發生多處轉移，直接威脅患者生命[1-2]。肝癌的治療原則在于早確診、早治療，以阻止腫瘤持續增殖或侵襲，延長患者生存時間。手術為主的綜合治療是治療肝癌的重要方案，能夠提高患者生存率，但臨床長期隨訪發現，仍有部分患者出現復發轉移，臨床迫切需要尋找到新的分子靶點，以便于早期預測肝癌的侵襲轉移，更好地改善患者預后[3-4]。細胞緊密連接蛋白1(CLDN1)為細胞緊密連接的骨架，能夠反映細胞緊密連接的強度及選擇性，且其表達存在較高組織特異性，在不同組織內含量存在一定差異。相關研究顯示[5]，細胞緊密連接蛋白在腫瘤增殖、轉移方面存在重要作用。Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)則為Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶家族新成員，能夠參與腫瘤基底細胞膜、細胞外基質降解，與腫瘤侵襲及轉移可能存在一定關系[6]。鑒于此，本研究分析CLDN1與TMPRSS4在肝癌組織中的表達及臨床意義，旨在為臨床提供參考。報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至2022年3月我院收治的79例肝癌患者作為研究對象，研究經醫學倫理委員會批準。男性42例，女性37例；年齡42～71歲，平均年齡(56.89±5.14)歲；體質量指數18.9～28.3 kg/m2，平均體質量指數(24.19±1.75)kg/m2；Child-Pugh分級：45例A級，34例B級。納入標準：均經病理確診為肝癌；采集標本前未接受放化療；精神狀態正常；患者及家屬簽署知情同意書。排除標準：繼發性肝癌；肝腎功能衰竭；合并其他惡性腫瘤；存在急慢性感染；存有凝血系統缺陷。

1.2 方法

所有肝癌患者均行手術為主的綜合治療，術中采集肝癌病理標本，并相應采集癌旁正常肝組織標本作為參考。所有標本均開展免疫組化法檢測：CLDN1：組織切片后于干燥箱內烤片30 min，溫度設置為60 ℃，經脫蠟及水化后，以PBS沖洗3 min，單次5 min，之后將玻片泡入抗原修復液內，修復后PBS再次沖洗3次，單次5 min；以3%過氧化氫去離子水孵育10 min，PBS沖洗及時間同上；加入一抗，室溫下在濕盒內孵育2 h，再次PBS沖洗；加入二抗，室溫下在濕盒內孵育30 min，再次PBS沖洗；DAB染色，顯微鏡下觀察；自來水沖洗，經蘇木精復染、脫水等處理后封片。TMPRSS4：切片經檸檬酸鹽緩沖液微波抗原修復后，按TMPRSS4抗體工作濃度1∶100進行一抗滴加，并于室溫下孵育60 min，經PBS沖洗3次，單次5 min，再行二抗溫室孵育30 min，再次PBS沖洗后，DAB顯色，蘇木精對比染色后顯微鏡下觀察。結果判斷：每張切片隨機選擇10個高倍鏡視野，由高年資的病理科醫師進行判斷；定量評分標準為：著色細胞比例<1/3為1分，著色細胞比例1/3～2/3為2分，著色細胞比例>2/3為3分；無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分；依據兩者評分之和進行判定表達情況，陰性為0～3分，陽性為4分級以上。

1.3 觀察指標

(1)CLDN1與TMPRSS4表達情況：比較CLDN1與TMPRSS4在肝癌組織及癌旁組織內表達情況。(2)CLDN1表達與臨床病理特征間關系：分析CLDN1表達與肝癌患者年齡、性別、體質量指數、腫瘤大小、腫瘤分化、T分期、N分期、M分期、甲胎蛋白(AFP)水平間的關系。AFP于術前采集2組3 mL空腹靜脈血檢測。(3)TMPRSS4表達與臨床病理特征間關系：分析TMPRSS4表達與肝癌患者年齡、性別、體質量指數、腫瘤大小、腫瘤分化、T分期、N分期、M分期、AFP水平間的關系。(4)CLDN1表達、TMPRSS4表達與預后關系：比較不同CLDN1表達、TMPRSS4表達肝癌患者3年生存率差異。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 CLDN1與TMPRSS4表達情況

肝癌組織內CLDN1陽性表達率、TMPRSS4陽性表達率高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組CLDN1與TMPRSS4表達情況對比(例，%)

2.2 CLDN1表達與臨床病理特征間關系

不同CLDN1表達肝癌患者腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 CLDN1表達與臨床病理特征間關系(例，%)

2.3 TMPRSS4表達與臨床病理特征間關系

不同TMPRSS4表達肝癌患者腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 TMPRSS4表達與臨床病理特征間關系(例，%)

2.4 CLDN1表達、TMPRSS4表達與預后關系

CLDN1陽性表達患者3年存活率為64.41%(38/59)，低于LDN1陰性表達患者的90.00%(18/20)，差異有統計學意義(χ2=4.741，P=0.030)；TMPRSS4陽性表達患者3年存活率為64.52%(40/62)，低于TMPRSS4陰性表達患者的94.12%(16/17)，差異有統計學意義(χ2=4.321，P=0.038)。

3 討論

肝癌病因復雜，與臨床遺傳、病毒性肝炎、重度飲酒等多種因素長期相互作用相關。肝臟為人體代謝重要器官，且血運極為豐富，一旦發生病變不僅對機體正常代謝造成嚴重影響，腫瘤細胞也易發生轉移，造成受累器官功能障礙，降低整體生存率[7-8]。臨床對于肝癌多采取以手術為主的綜合方案進行治療，先切除腫瘤組織，再輔以相應抗癌手段，能夠最大限度清除體內腫瘤細胞，避免術后復發及轉移[9-10]。但長期隨訪發現，仍有部分患者預后偏差，還需尋找能夠良好預測預后的相關標志物，為腫瘤治療提供指導。

CLDN家族與腫瘤存在密切關系，其主要作用為構成緊密連接蛋白，從而隔離細胞內部及環境，以維持結構及內環境穩定。CLDN1則為CLDN家族重要成員，臨床認為當CLDN1處于異常表達狀態時，可破壞細胞緊密連接結構，使得細胞疏松，或引起細胞極性喪失，促使腫瘤細胞轉移[11-12]。TMPRSS4則是一種較新的Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白，在小腸、腎、膀胱、食管等多種組織中均存在異常表達，且在乳腺癌、胰腺癌及甲狀腺癌等多種腫瘤組織內存在高表達情況，提示TMPRSS4與腫瘤侵襲轉移可能存在一定關系[13-14]。隨著臨床深入研究發現，TMPRSS4處于高表達狀態時，可降低E-鈣黏蛋白表達，促使E-鈣黏蛋白介導的細胞間黏連喪失，從而加速上皮間質轉化，使得上皮細胞極性消失、標志物表達丟失，從而增強遷移活動能力[15]。但臨床關于CLDN1、TMPRSS4在肝癌組織中的表達及意義尚未能夠明確。本研究結果顯示，肝癌組織內CLDN1陽性表達率、TMPRSS4陽性表達率高于癌旁組織，不同CLDN1表達及不同TMPRSS4表達肝癌患者腫瘤大小、分化程度、T分期、N分期、M分期、AFP水平相比，差異有統計學意義(P<0.05)；CLDN1陽性表達患者3年存活率低于CLDN1陰性表達患者，TMPRSS4陽性表達患者3年存活率低于TMPRSS4陰性表達患者。提示CLDN1、TMPRSS4在肝癌組織中呈高表達，且與腫瘤分期、腫瘤大小、分化程度存在密切關系，臨床或可以此為靶點進行治療，以改善患者預后。其原因為CLDN1、TMPRSS4高表達提示腫瘤生長、侵襲及轉移能力強，而腫瘤較大、腫瘤分期高、低分化程度則為腫瘤生長、侵襲及轉移能力強的表現，故肝癌患者體內CLDN1、TMPRSS4呈高表達。同時，一旦CLDN1、TMPRSS4呈高表達則提示腫瘤惡性程度高，術后復發轉移風險高，故預后普遍較差。

綜上所述，肝癌組織內CLDN1、TMPRSS4呈高表達，其中腫瘤較大、腫瘤分期高群體陽性表達率更高，且CLDN1、TMPRSS4高表達患者預后較差，臨床需采取針對性干預措施，以提高整體生存率。