血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和p53基因在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與腫瘤血管形成的相關(guān)性

董 雷

(佳木斯市中心醫(yī)院胸外科，黑龍江 佳木斯 154002)

非小細(xì)胞肺癌是支氣管黏膜上皮或肺泡上皮的惡性腫瘤，多數(shù)患者年齡在65歲以上，但近年發(fā)病有年輕化傾向[1]。并且該病早期往往無(wú)任何癥狀，不易被診斷和發(fā)現(xiàn)，診斷時(shí)往往處于晚期，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，增加治療難度，且預(yù)后較差[2]。故早診斷、及時(shí)治療非小細(xì)胞肺癌成為新的研究熱點(diǎn)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)直接參與誘導(dǎo)腫瘤血管形成，成為診斷腫瘤的重要因子；腫瘤形成與p53基因的失活密切相關(guān)[3]。同時(shí)腫瘤血管是實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，腫瘤血管的密度(MVD)反映腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力[4]。故研究VEGF和p53與MVD直接的相關(guān)性具有重要的臨床意義。本文研究VEGF和p53在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)，并分析其與腫瘤血管形成的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇2019年1月～2021年1月收治的42例非小細(xì)胞肺癌患者為研究對(duì)象，其中男26例，女16例；年齡47～70歲，平均(56.85±9.22)歲；腫瘤直徑1.3～3.0 cm,平均(2.10±0.52)cm；鱗癌14例，腺癌28例；TNM分期：Ⅲ期31例、Ⅵ期11例；分化程度：高、中、低分別為10例、18例、14例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理診斷確診為非小細(xì)胞肺癌患者；②年齡45～70歲者；③生存期在6個(gè)月以上者；④知情本次研究者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有心腦血管疾病，肝腎功能不全者；②不能與醫(yī)護(hù)人員正常溝通者；③TNM分期不明確者。本次研究經(jīng)過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2方法

1.2.1試劑及藥品：VEGF鼠抗人單克隆抗體(批號(hào)190103)在福州邁新生物技術(shù)公司購(gòu)買；p53單克隆抗體(批號(hào)181221)在上海超研生物科技有限公司購(gòu)買。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒及SP試劑盒均購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)。

1.2.2方法：VEGF和p53表達(dá)：用10%甲醛固定非小細(xì)胞肺癌、癌旁肺組織標(biāo)本，用石蠟包埋，切薄片(厚度=4 μm)，用免疫組織化學(xué)SP染色。以實(shí)驗(yàn)室自制PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用DAB顯色。用已知VEGF和p53的陽(yáng)性組織切片為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3VEGF和p53的判定：①VEGF表達(dá)的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：染色細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽(yáng)性細(xì)胞，其中400倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25%以下判定為陰性，反之為陽(yáng)性。p53表達(dá)的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核染色為棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞、藍(lán)色為陰性細(xì)胞，其中400倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在1%以下判定為陰性，反之為陽(yáng)性。②臨床病理主要參數(shù)：統(tǒng)計(jì)患者年齡、性別、組織學(xué)類型、TNM分期、分化程度、腫瘤直徑。③微血管的判斷：利用MVD計(jì)數(shù)法判定腫瘤血管形成程度。標(biāo)本在低倍鏡下選擇3個(gè)微血管區(qū)域，然后在200倍鏡下記下被CD34染成棕色的微血管數(shù)目，取平均值為MVD。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：運(yùn)用SPSS22.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料和計(jì)數(shù)資料比較分別采用t檢驗(yàn)、方差分析和χ2檢驗(yàn)，Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)分析相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1肺癌和癌旁組織標(biāo)本VEGF和p53表達(dá)情況及MVD計(jì)數(shù)比較：相比癌旁組織標(biāo)本，肺癌組織標(biāo)本中VEGF和p53陽(yáng)性表達(dá)率、MVD計(jì)數(shù)明顯更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 肺癌和癌旁組織VEGF和p53表達(dá)情況及MVD計(jì)數(shù)比較[n(%)，n=42]

2.2非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF和p53表達(dá)、MVD計(jì)數(shù)與臨床病理主要參數(shù)的關(guān)系分析：非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF和p53表達(dá)、MVD計(jì)數(shù)與TNM分期、分化程度、腫瘤直徑密切相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF和p53表達(dá)、MVD計(jì)數(shù)與臨床病理主要參數(shù)的關(guān)系分析[n(%)]

2.3非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF和p53表達(dá)與MVD計(jì)數(shù)的相關(guān)性分析：經(jīng)Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF和p53表達(dá)與MVD計(jì)數(shù)呈正相關(guān)性(r=0.793、0.856，P=0.017、0.008)。

3 討論

肺癌是癌癥死亡的主要原因，其中85%為非小細(xì)胞肺癌[5]。并且非小細(xì)胞肺癌化療有效率較低，死亡率較高。早期診斷并及時(shí)進(jìn)行手術(shù)治療是最有效的治療方式[6]。但是非小細(xì)胞肺癌發(fā)病過(guò)程較復(fù)雜，到目前為止其發(fā)病原因、早期診斷標(biāo)志物、改善患者預(yù)后的標(biāo)志尚不清楚。同時(shí)大量研究表明[7-8]，腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移與血管新生密切相關(guān)，且VEGF具有促進(jìn)血管通透性、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖等重要的生物學(xué)功能；p53是腫瘤抑制基因，與DNA變異程度相關(guān)，當(dāng)DNA變異較小時(shí)，p53促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)；反之會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

另外，MVD是一個(gè)反映惡性腫瘤生物學(xué)行為的重要參數(shù)，與惡性腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[9]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相比癌旁組織標(biāo)本，肺癌組織標(biāo)本中VEGF和p53陽(yáng)性表達(dá)率、MVD計(jì)數(shù)明顯更高。分析原因，非小細(xì)胞肺癌過(guò)度增殖，反饋性誘導(dǎo)p53蛋白的釋放，加速血管生長(zhǎng)，使得VEGF陽(yáng)性表達(dá)率明顯更高；并且VEGF能夠通過(guò)與血管內(nèi)皮上的相應(yīng)受體結(jié)合，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤血管生長(zhǎng)；另外，VEGF可增加血管通透性，使內(nèi)皮細(xì)胞遷移，誘導(dǎo)腫瘤血管生成，維持腫瘤的繼續(xù)生長(zhǎng)，對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用，進(jìn)而增加MVD計(jì)數(shù)。同時(shí)本研究進(jìn)一步說(shuō)明非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移與VEGF和p53陽(yáng)性表達(dá)、MVD計(jì)數(shù)增加密切相關(guān)。

p53能夠下調(diào)抑制血管增生的凝血栓蛋白，上調(diào)VEGF水平，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤血管生長(zhǎng)，使得MVD計(jì)數(shù)明顯更高。故經(jīng)Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF和p53表達(dá)與MVD計(jì)數(shù)呈正相關(guān)性。與吳開(kāi)松等研究[10]的在非小細(xì)胞肺癌血管生成過(guò)程中，p53、VEGF 在調(diào)控腫瘤血管形成方面起重要作用相一致。

綜上所述，在非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF和p53陽(yáng)性表達(dá)率較高，與腫瘤血管形成密切相關(guān)。