南蛇藤素通過調控M2型巨噬細胞極化提高A549細胞對順鉑的敏感性①

于 博 車成日 林星（延邊大學醫學院，延吉 133002）

肺癌是全球最常見癌癥之一，且致死率最高。每年新增確診患者約180萬，死亡人數達160萬。盡管肺癌治療方法不斷更新，但由于其高轉移性及原發性或獲得性耐藥，肺癌患者五年生存率僅為15%左右［1-2］。腫瘤微環境是促進腫瘤發生發展的重要因素。腫瘤微環境中眾多的浸潤炎癥細胞中，腫瘤相關巨噬細胞（tumor-associated macrophages，TAMs）最為豐富，占總數的30%～50%。惡性腫瘤中的TAMs傾向于M2型極化，從而抑制抗腫瘤免疫應答，促進腫瘤侵襲遷移［3-4］。南蛇藤素（celastrol，CEL）是一種提取于傳統中藥雷公藤根部的天然五環三萜類化合物，具有抗炎、抗氧化等藥理作用［5］。研究表明CEL能夠通過多種信號通路抑制胰腺癌和肺癌增殖、黏附、侵襲、遷移等［6-7］。但CEL是否可通過調控TAMs極化影響肺癌化療敏感性有待進一步研究。本研究旨在探討CEL通過影響M2型巨噬細胞極化提高人肺癌細胞A549對順鉑敏感性的作用及可能機制。

1 材料與方法

1.1 材料人肺癌細胞株A549、巨噬細胞RAW264.7購自中國科學院細胞庫；CEL購自上海源葉生物科技有限公司；Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑盒購自索萊寶；Easy Pure Viral DNA/RNA Kit購自Transgen Biotech；LY-294002購自貝博生物有限公司；CD163（93498）、p-PI3K（64326）、PI3K（2537）、

p-AKT（5831）、AKT（53270）、Bcl2（15071）、Bax（5023）和GAPDH（5174）抗體購自Cell Signaling Technology；電泳儀及電泳槽購自美國E-C Apparatus Corporation；全波長酶標儀、Western blot轉膜儀和Gel Doc凝膠成像儀購自美國Bio-Rad。

1.2 方法

1.2.1 CCK-8增殖實驗取對數生長期RAW264.7細胞和A549細胞，以2×104個/孔接種于96孔板，細胞生長至70%左右融合時，加入不同濃度CEL（0、10、20、40、80、100 nmol/L），24 h后10μl/孔加入CCK-8試劑，2 h后測定450 nm處吸光度（OD）。

1.2.2 巨噬細胞M2型極化誘導取對數生長期RAW264.7細胞接種于培養皿，加入IL-4/IL-13（20 ng/ml）處理48 h誘導M2極化，qRT-PCR和細胞免疫熒光實驗檢測M2型巨噬細胞標志物表達。……