miR-449a靶向調(diào)控外周血Toll樣受體5影響風濕性心臟病發(fā)生發(fā)展的分子機制研究①

李寶亮 蘇 華 李夢嘉 耿麗娜 馬俊帥（河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗科，張家口 075000）

風濕性心臟病是唯一可預(yù)防的心血管疾病，最近幾十年來，全球風濕性心臟病的負擔有所減輕，但中低收入國家的患病率和病死率仍然很高［1］。風濕性心臟病每年影響超過3 000萬人，且每年導(dǎo)致超過30萬人死亡［2］。微小RNA（microRNA，miRNA）是單鏈內(nèi)源性非編碼小RNA（長度約22個核苷酸）。miRNA通常與目標信使RNA（mRNA）的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）結(jié)合以抑制基因表達，它們涉及許多生物學(xué)過程，例如細胞分化、凋亡、增殖和侵襲［3］。先前的研究發(fā)現(xiàn)，miR-449a在硅膠處理的小鼠肺組織中顯著下調(diào)，是自噬的重要調(diào)節(jié)劑，也是肺纖維化的新型內(nèi)源性抑制劑，miR-449a通過靶向Notch-1信號通路保護H9C2細胞免受缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的損傷，包括細胞凋亡和壞死［4］。但是，人們對miR-449a在風濕性心臟病中的表達模式和作用仍知之甚少。Toll樣受體5（Toll-like receptor 5，TLR5）在風濕性心臟病進展中起重要作用［5］。血小板特異性TLR5等TLR的存在與血管炎癥和/或心血管危險因素有關(guān)［6］。然而miR-449a是否通過TLR5參與風濕性心臟病的發(fā)生發(fā)展，目前仍不清楚。本研究通過功能獲得實驗探索miR-449a在風濕性心臟病中的作用及其潛在機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑M199培養(yǎng)基、胎牛血清（美國Hyclon公司）；Lipofectamine2000試劑（美國賽默飛世爾公司）；miR-449a模擬物、模擬物陰性對照miR-NC、miR-449a抑制劑（anti-miR-449a）、抑制劑陰性對照（anti-miR-NC）、TLR5小干擾RNA（si-TLR5）、小干擾RNA陰性對照（si-NC）、TLR5過表達載體（pcDNATLR5）、過表達空載對照（pcDNA）（上海吉瑪公司）；噻唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulphoxide，DMSO）（美國Sigma公司）；磷脂酰結(jié)合蛋白V-FITC（AnnexinV-FITC）/碘化丙啶（propidium iodide，PI）試劑盒（美國BD公司）；雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒（美國Promega）；……