PCR檢驗法和細菌培養法在陰道細菌檢驗中的效果對比分析

于芳滄

曹縣人民醫院檢驗科，山東菏澤 274400

細菌性陰道炎是一種由細菌感染引起的臨床常見疾病，使患者出現陰道菌群紊亂情況，可降低患者陰道內有益菌，且極易被致病菌所代替[1]。細菌性陰道炎這一婦科常見疾病，受病情進展緩慢、無明顯臨床特征等因素影響，難以引起重視，當臨床癥狀明顯時，則可能已進展為盆腔炎、宮頸炎等疾病，病情嚴重時甚至誘發不孕[2]。所以，考慮到患者的身心健康，及早接受早期診斷及治療，對保障其生育能力具有重要作用。當前臨床治療陰道炎疾病的關鍵是及時診斷患者病情，并準確掌握病情進展。白帶常規檢查是當前婦科驗證的常用輔助檢查方式，可通過檢查患者陰道分泌物，掌握患者陰道感染類型及感染情況。細菌培養法作為陰道炎疾病的一種常用診斷方法，隨其研究不斷深入，發現其需耗費較長時間，且陽性檢出率不高，不少患者需要接受多次細菌培養檢驗方可確診[3]。PCR檢驗法作為一種近年來新興的檢驗方法，其在臨床應用廣泛。為深入研究細菌性陰道炎疾病的最佳檢驗方式，本研究對2021年1—12月來曹縣人民醫院檢驗科就診的120例細菌性陰道炎患者進行臨床研究，給予PCR檢驗法和細菌培養法檢驗，對比兩種檢驗結果差異。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對來本院就診的120例細菌性陰道炎患者進行臨床研究，采集患者陰道分泌物，其中對照組（60例）接受細節培養法檢測，年齡23～45歲，平均（33.68±1.43）歲；病程3個月～3年，平均（2.54±0.51）年。觀察組（60例）接受PCR檢驗法檢測，年齡23～44歲，平均（33.17±1.56）歲；病程3個月～3.5年，平均（2.61±0.43）年。以影像學聯合實驗室檢查為金標準，所有患者均確診為細菌性陰道炎患者，兩組患者中棒狀桿菌、腸球菌、加納特菌患者均有20例。兩組研究對象一般資料比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審批通過，家屬及患者簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①均符合細菌性陰道炎臨床診斷標準；②均伴隨白帶瘙癢、氣味異常、灼熱、陰道黏膜糜爛等臨床表現。排除標準：①患有重要臟器功能嚴重受損者；②合并凝血功能異常、精神障礙者；③參與研究前10 d使用過抗菌藥物、哺乳期、妊娠期者。

1.3 方法

患者取截石位，采取無菌陰道鏡，暴露宮頸，使用棉簽在患者陰道穹隆位置蘸取陰道分泌物，再放入裝有無菌生理鹽水的試管內，分別對觀察組和對照組患者實施PCR檢驗法與細菌培養法檢驗。

1.3.1 PCR檢驗法將觀察組300 mL陰道分泌物放入900 mL生理鹽水中，使用離心機離心，并調整其轉速為10000 r/min，離心13 min，清除其上清液，再加入組織裂解液，并進行迅速攪拌，使其處于均勻狀態。將其置入溫度為90℃容器中，進行14 min加熱，隨后再使用離心機離心，調整其轉速為10000 r/min，離心8 min。待完成離心，去少量上清液，制作出DNA模板，同時對比檢驗細菌陰性與陽性，以制作陰性為對癥，整個過程中，除不加入DNA模板外，其他均相同。隨后進行PCR擴增、產物檢查，再加入緩沖對、引物及模板，取24 μL無菌離子水，使用32 μL無菌液狀石蠟覆蓋其表面，然后進入PCR循環階段。

1.3.2細菌培養法使用高壓蒸汽鍋對檢驗所用工具進行消毒、滅菌操作，再選擇適宜的培養基配方，調制出適宜陰道細菌生長的培養基。于無菌生理鹽水中取出患者陰道分泌物，置于無菌器皿內。在保證無菌條件下，接種分泌物，并置于培養液中，再對無菌接種分泌物實施細菌分離。隨后將分離所得放入含有二氧化碳的孵育箱內，將溫度保持在34℃左右。44 h后，使用顯微鏡對細菌生長情況進行觀察與監測，當培養液中培育出菌落，挑選出灰色、光滑、半透明的水滴狀菌落，對其進行生化檢驗，確保整個檢驗過程與檢驗結果均滿足生化檢驗標準。

1.4 觀察指標

①對比患者陽性檢出率：細菌培養陽性檢驗標準：當其具有典型菌落，且菌落呈（+）陽性；PCR陽性標準：當其邊緣整齊，且條帶寬度＜1 mm。②對比兩組棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌的實際檢出情況。

1.5 統計方法

采用SPSS 24.0統計學軟件進行數據處理，計數資料以[n(%)]表示，組間差異比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組檢驗方法陽性檢出率對比

觀察組陽性率顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組檢驗方法陽性檢出率對比[n(%)]

2.2 兩組細菌檢出情況對比

觀察組棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌檢出率高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組細菌檢出情況對比[n(%)]

3 討論

近年來，隨著人們生活節奏加快、環境變化等因素影響，陰道疾病發病率正呈升高趨勢，且患病人數逐漸增加[4]。陰道炎作為臨床常見婦科疾病，通常是由陰道內寄生菌群失衡引起的。細菌性陰道炎則多是由陰道加特納菌引起的，其傳播途徑為性傳播。女性受社會環境、飲食結構改變等因素影響，其細菌性陰道炎發病率正逐漸升高，除給女性的正常生活與身體健康帶來不便外，還限制了患者正常社會交往[5]。細菌性陰道炎是一種伴有外陰瘙癢、白帶異味等臨床癥狀的婦科常見疾病，其發病原因多與患者服用抗生素類藥物、性生活不潔等因素有關，出現陰道菌群失衡情況[6-7]。白帶分泌物可從一定程度上反映女性身體狀況，如果出現白帶分泌異常，需及時來院檢查。

陰道內各類菌群能夠達到相關制衡作用，使陰道pH值處于合理范圍，通過保持陰道內環境穩定，達到抑制部分致病菌滋生的作用[8]。處于平衡狀態下的陰道菌群，其所分泌的物質，對陰道內環境具有穩定作用，有助于保障女性陰道健康，但一旦出現陰道菌群失衡，則會導致陰道桿菌出現大量死亡情況，這給致病菌提供了良好的滋生與繁殖環境，不僅限制了陰道上皮細胞的屏障、保護作用，還極易引發細菌性陰道炎疾病[9-10]。由于陰道內上皮細胞環境屬于弱酸性，可對陰道細菌疾病產生病理改變，起到保護作用；而當致病菌侵襲表面抗原，則會改變患者陰道內pH值，降低陰道桿菌數量，增加病菌數量，消耗掉許多營養成分，降低正常上皮細胞新陳代謝能力，從而使其失去了良好的保護作用[11-12]。

陰道細菌給女性健康、工作及生活帶來較大影響，想要迅速鑒別出細菌種類，改進細菌檢驗操作方法十分必要，不僅能給醫師診斷病情提供便利條件，還便于醫師給患者制訂科學、合理的治療方案[13]。不少研究指出，女性陰道內菌群失衡現象的出現，是多種因素共同作用的結果，使陰道桿菌出現大量死亡，不僅損耗大量糖原等營養物質，還易引起陰道內酸堿失衡，使陰道上皮細胞失去保護作用，誘發白帶增多、陰道炎等常見婦科疾病，如果得不到及時治療，則會加重病情，限制生活質量[14]。所以，女性在日常生活中，為保持陰道內菌群正常與穩定，應保持良好的外陰清洗習慣。因此，選擇一種高效、合理的檢驗方法，對提升檢驗效果具有重要作用。

陰道分泌物作為婦科判斷女性陰道炎的主要診斷方法之一，是一種良好的輔助檢查手段，借助該檢查方式，不僅能全面了解陰道內膜炎性感染狀況與菌群失調狀況，還能幫助醫師準確評估陰道炎預后質量及治療干預方案[15]。所以，給患者尋求一種良好的檢驗方式，對判斷其感染情況、判定致病菌具有重要意義。

細菌培養法這一臨床常用檢驗方式，是當前臨床用于檢驗陰道細菌的金標準，但隨我國醫療技術水平不斷提升，該檢驗方式也暴露諸多缺點：①細菌培養法不僅需要一定培養條件，其操作步驟也較為復雜，如果培養環節存在污染，則會誘發交叉感染，除降低檢驗結果準確度，還會給醫務人員身體健康帶來嚴重影響。②細菌培養法培養時間較長，其培養時間一般需要＞48 h；③細菌培養法的陽性檢出率較低，且其檢測結果需要進行反復核實方可確診。

PCR檢驗法是一種陽性檢出率較高的熒光定量檢測法，在當前女性陰道細菌檢測中應用廣泛。和細菌培養法相比，PCR檢驗法更具檢測優勢：①PCR檢驗法操作步驟較為簡單，且對實驗室要求不高；②PCR檢驗法具有較高的特異性，整體檢驗時間也較短，且陽性檢出率更高。

研究結果表明，經PCR檢驗，觀察組陽性檢出率91.67%顯著高于對照組（P＜0.05）。這表明在陰道細菌檢驗中，PCR檢驗法的陽性檢出率，明顯優于細菌培養法。這與閆清[16]“研究組經檢驗，患者陽性率90%顯著強于對照組（P＜0.05）”的研究結果相一致。觀察組棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌檢出率分別為95.00%、90.00%、90.00%高于對照組（P＜0.05）。這提示PCR檢驗法應用于陰道細菌檢驗中，其檢出能力顯著強于細菌培養法。本研究結果表明陰道細菌檢驗中采取PCR檢驗法后，腸球菌、加特納菌、棒狀桿菌這3種菌陽性率得到了大幅提升，進一步表明PCR檢驗法的檢驗結果效率更高，具有較大的優越性。PCR檢驗法作為一項新型檢驗技術，其PCR靈敏性、DNA特異性雜交等特征更加明顯，作為一種DNA特異片段，通常是體外酶合成的，整個過程一般是由DND變形、退熱、延伸3個步驟構成的，經過這一循環過程，有助于增加標本中DNA含量，且PCR技術檢驗結果也較優，檢出率也較高，操作方法也較為簡便。和PCR檢驗法相比，細菌培養法陽性檢出率不高，是一種由人工培養方式開展的細菌生長繁殖方法，受陰道細菌種類多、數量大等因素影響，檢驗誤診率較高，且對光照、溫度、pH7.0等環境要求較高。細菌培養法受培養時間長、操作方法復雜、實驗室標準要求較高等因素影響，部分基層醫院難以開展此項技術，所以，通常被PCR技術所代替。這與楊宇[17]“患者經PCR檢驗組，棒狀桿菌、腸球菌、加特納菌檢驗準確性為28.87%、26.80%、34.02%高于細菌培養組（P＜0.05）”的研究結果相符合。PCR檢驗法可借助離心分離操作，對菌群進行隔離處理，可最大限度降低菌群狀態的擾亂情況，通過將菌群與其他物質進行分離，能夠準確檢測出患者菌群情況[18]。由于PCR檢驗法檢測過程并無復雜操作過程，且對設備要求不高，檢驗過程中僅需遵循無菌操作要求，不僅能避免發生細菌感染，還能防止檢驗結果出現異常情況。本研究受檢測時間等因素影響，尚未對其他檢驗方法進行深入分析與對比，所以仍需進行深入探索與研究。

綜上所述，陰道細菌檢驗中采取PCR檢驗法，其具有較高的陽性檢出率，取得了不錯的檢驗效果，具有較高的臨床檢驗價值。