雞胚細胞的傳代培養和麻疹病毒的增殖

張林亞，徐然，周旭，楊文震，朱為

1. 上海生物制品研究所有限責任公司研發部第三研究室，上海 200051； 2. 上海生物制品研究所有限責任公司，上海 201400

麻疹是由麻疹病毒(measles virus，MV)引起的一種急性呼吸道傳染性疾病，通過呼吸道分泌物傳播，好發于兒童，多見于冬春季，人群普遍易感。2019年，全球麻疹病例激增至 869 770 例，創23年來最高紀錄；死亡人數超過 207 500 例，較2016年上升了50%[1]。預防麻疹的最有效手段是接種麻疹減毒活疫苗，而麻疹減毒活疫苗生產用細胞基質為原代雞胚細胞。2020年版《中華人民共和國藥典》(三部)規定，原代細胞經原始培養或傳代少數幾代內(一般不超過5代)的細胞可用于病毒性疫苗的生產[2]。原代雞胚細胞在原代培養及早期傳代培養過程中成纖維細胞和上皮細胞同時出現，利用成纖維細胞和上皮細胞對胰蛋白酶的耐受性差異，將原代雞胚細胞進行傳代培養，可達到純化成纖維細胞的目的，提高疫苗用細胞基質的均一性[3]。另外，將原代雞胚細胞進行傳代可增加細胞外源因子的檢測次數，提高外源病毒的檢出率[4]，有利于實現對疫苗安全性的控制。

本研究將原代雞胚細胞進行連續傳代培養，采用不同代次雞胚細胞培養麻疹病毒滬191(Shanghai-191，S-191)株，并對病毒收獲物進行滴度檢測和基因序列測定，為傳代培養的雞胚細胞用于病毒性疫苗生產提供數據支持。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 細胞MRC-5細胞(人胚肺成纖維細胞)購自美國模式培養物集存庫(American Type Culture Collection，ATCC)，A549細胞(人非小細胞肺癌細胞)由上海生物制品研究所有限責任公司保存。……