miR-27a調控Sfrp1對腎小管上皮細胞EMT的影響*

田平平， 鄒琴， 盧雨微， 郭兵， 石明雋**

(1.新鄉醫學院 三全學院 護理學院， 河南 新鄉 453003； 2.貴州醫科大學 基礎醫學院 病理生理學教研室， 貴州 貴陽 550025)

微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是一類由內源基因編碼的、長度為19～25個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，能與mRNA 3′UTR區的靶序列特異性結合，抑制靶蛋白的翻譯[1-2]，miRNA異常與多種疾病的發生發展有關[3-4]。有研究報道，在高糖培養的腎小球系膜細胞和鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)大鼠腎組織中miR-27a表達增加，敲低miR-27a可以抑制高糖誘導的系膜細胞增殖，也可以抑制細胞外基質(extracellular matrix，ECM)相關促纖維化基因的表達[5]。分泌型卷曲相關蛋白1(secreted frizzled-related protein 1, Sfrp1)是分泌型卷曲相關蛋白家族(secreted frizzled-related protein family, Sfrps)成員之一，亦是miR-27a最主要的靶基因[6-7]，過表達miR-27a可以抑制Sfrp1蛋白的表達[8-9]。研究發現，Sfrp1誘導了腫瘤細胞的上皮-間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)表型[10]，EMT是上皮細胞向間質細胞轉變并執行間質細胞功能的一種形態學變化，也是促進腎纖維化進程的重要原因之一。因此，本研究擬從體外觀察過表達和敲低miR-27a后對Sfrp1及EMT相關分子表達的影響，探索在高糖環境下的miR-27a能否通過調控Sfrp1的表達影響EMT的發生，為DN的治療提供新的依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1細胞來源 大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52E細胞，購自美國菌種保藏中心，ATCC)。

1.1.2主要試劑 Trizol Regent(美國ambion公司)，Sfrp1和β-actin引物(上海生工生物技術工程服務有限公司)，Revert Aid TM Firststrand cDNA Synthesis Kit(美國Thermo公司)，2×SuperReal PreMix Plus(天根生化科技有限公司)，miR-27a、U6引物和Bulge-LoopTMmiRNA qRT-PCR Primer試劑盒(廣州銳博生物公司)，pMIR-REPORT-Sfrp1野生型和突變型質粒(上海毅樂生物科技有限公司)，抗col-Ⅳ抗體(美國Sigma公司)，抗β-actin抗體(武漢普美克生物技術有限公司)，抗α-SMA抗體(武漢proteintech公司)，抗Sfrp1抗體、抗E-cadherin抗體(北京博奧森生物技術有限公司)，DMEM培養基、胎牛血清(美國Gibico公司)。……