急性腦卒中患者外周血miRNA-602水平動態變化及臨床意義*

高 偉

福建省福州市第一醫院神經外科 350009

MicroRNA(miRNA)是一種由18～25個核苷酸組成的單鏈非編碼RNA。經內切酶作用后，一部分miRNA靶向調控mRNA轉錄物，進而調控下游RNA水平和/或蛋白質的表達[1]。每個miRNA可以針對多個下游基因。同時，也可由多個miRNA調控一個靶基因，這樣便形成了一個復雜的網絡并準確地調節功能基因的表達[2]。已有許多研究發現[3]，血漿miRNA水平的變化與心血管疾病的發病風險密切相關。有研究者在基于人群的前瞻性研究中確定了循環miRNAs與所有卒中類型發生風險之間的關聯，進一步對miRNA的靶基因進行了后續研究，發現了多種miRNAs可能在腦卒中的病理生理過程中發揮著重要作用[4]。miRNA-602是一種非組織特異性miRNA，有研究表明miRNA-602在顱內動脈瘤中發揮著重要作用[5]，但有關miRNA-602在腦卒中的作用研究較少。因此，本研究探討了急性腦卒中患者外周血miRNA-602水平動態變化及臨床意義，以期為腦卒中患者的早期防治提供更多依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2016年1月—2020年1月我院收治的80例急性腦卒中患者為研究對象。納入標準：(1)經影像學手段確診為腦卒中；(2)從卒中發作到入院的時間<6h；(3)年齡30～80歲；(4)臨床資料完整。排除標準：(1)院內死亡患者；(2)非首次發作，曾有腦卒中史；(3)合并其他重要器官的嚴重疾病，如嚴重心力衰竭、COPD等；(4)合并惡性腫瘤。同時，選擇同期在我院行體檢的80名健康志愿者為對照組。病例組中男52例，平均年齡(60.5±9.8)歲，女28例，平均年齡(61.3±8.7)歲；對照組中男49例，平均年齡(61.5±9.2)歲，女31例，平均年齡(62.3±10.5)歲。兩組年齡、性別資料比較無明顯差異(P>0.05)，有可比性。

1.2 RT-PCR檢測 所有受試者經肘靜脈采集靜脈血5ml，并立即離心。上清液轉移到無核糖核酸酶的EP管中，保存于-80℃冰箱。從血漿中提取總RNA，利用瓊脂糖凝膠電泳法測定RNA完整性。miRNA-602引物序列為上游5’-TTCGGGTGTGTGAGTGTTTCC-3’，下游5’-TGTCGGTACATTGTTGTGGA-3’。GAPDH引物序列為上游5’-GGAAGAGAGTCCTAGAGGG-3’，下游5’-GGGCTGGAAGACAAAGGTG-3’。RT-PCR反應條件如下：95℃預變性10min，然后95℃變性30s，50℃退火30s，40個循環，最后70℃延伸10min結束。

1.3 臨床資料收集 以患者入院后首次血液學檢查為基線資料，包括患者記錄中的血小板計數和HDL-C水平。通過電子病歷系統收集患者的基線資料，包括年齡、性別、身高、體重、既往病史(高血壓病史、高脂血癥、糖尿病病史等)及腦出血量。美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS量表)評判患者腦卒中后的神經缺損程度。量表包含對意識、語言、運動、感覺、共濟運動、眼球運動、視野等方面的評判，評分為0～42分，分數越高，神經缺損程度越嚴重。NIHSS評分≤4分為輕型卒中，4分

1.4 隨訪 利用電話或門診復查對患者進行隨訪。門診隨訪檢查項目包括體格檢查、血液檢查和腦部CT掃描，出院后前6個月，每個月都進行隨訪，之后每3～6個月隨訪1次。

1.5 統計學方法 采用SPSS20.0和 GraphPad Prism 5.0軟件進行數據處理。計數資料采用例數表示，計量資料采用均數±標準差表示。組間比較采用t檢驗或χ2檢驗。生存評估采用Kaplan-Meier分析，組間比較采用Log-rank檢驗。繪制受試者工作特征(ROC)曲線，并確定曲線下面積(AUC)。

2 結果

2.1 腦卒中患者與健康人群外周血miRNA-602水平比較 RT-PCR檢測結果顯示，病例組、對照組外周血miRNA-602相對表達水平分別為(26.74±3.52)、(5.52±1.03)，病例組顯著高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。

2.2 miRNA-602水平與患者臨床病理參數的相關性 病例組患者中位miRNA-602水平為(25.68±2.41)，以中位值為標準，將患者分為miRNA-602高表達組(n=40)與miRNA-602低表達組(n=40)。χ2檢驗顯示，miRNA-602水平與患者HDL-C水平、出血量及NIHSS評分顯著相關(P<0.05)，患者HDL-C表達水平越低、出血量及NIHSS評分越高，miRNA-602相對表達水平也越高(P<0.05)。見表1。

表1 miRNA-602不同表達水平與患者病理參數的相關性

2.3 miRNA-602水平與患者生存的相關性 隨訪至6個月時，19例患者死亡，總體生存率為76.25%(61/80)。存活組、死亡組患者的miRNA-602相對表達水平分別為(3.62±0.87)、(30.52±6.78)，差異具有統計學意義(P<0.05)。生存曲線顯示，miRNA-602低表達組患者的6個月生存率顯著好于miRNA-602高表達組(χ2=3.658,P=0.012)。

2.4 miRNA-602水平對患者生存的預測價值 ROC曲線顯示，血清miRNA-602對患者預后預測的靈敏度為67.8%，特異度為52.2%，AUC為0.66，這表明血清miRNA-602表達水平對腦卒中患者預有后較高的預測價值。見圖1。

圖1 miRNA-602水平對患者生存的預測價值

3 討論

腦血管病是世界上最嚴重的公共衛生問題之一，其發病率在越來越年輕的低收入人群中迅速上升。腦卒中是一種急性腦血管病，可導致局部神經系統突然受損[6]。其發生和修復是一個復雜多變的動態過程，受炎癥、血管生成、缺血再灌注損傷等多種生理病理因素的影響，但目前臨床尚無有效的藥物提前預防或治療缺血性腦卒中。

miRNA幾乎參與所有已知的生物調節過程，如細胞分化、凋亡等，其作用非常廣泛，miRNA作為一種生物標記物在人類循環血液系統中高度表達[7]。最新的研究表明，miRNA異常表達與腦卒中的發生密切相關。有研究者發現[8]，miR-148b、miR-27a、miR-29、miR-137等多種miRNA在腦卒中患者中表達顯著下調，而miR-497、miR-215、miR-324-3p等多種miRNA表達顯著上調。miRNA-602是最近發現的一種miRNA，在各種疾病中都有異常表達。本研究發現，病例組外周血miRNA-602相對表達水平表達水平顯著高于對照組。這表明，miRNA-602可能在腦卒中患者的病理生理過程中發揮著重要作用。炎癥反應是導致腦卒中進展的一個關鍵因素，可導致毒性酶的激活、自由基超載等[9]。由于炎癥細胞的激活和釋放以及炎癥細胞活性的調節引起腦組織結構的改變。有研究表明，在應激條件下，炎癥反應加劇，炎癥介質如IL-6、TNF-α、iNOS、COX-2和IL-10在腦卒中損傷中起重要作用，而miRNA在炎癥過程中發揮著重要作用。

2017年1月，中國腦卒中學組經過嚴格分層抽樣的全國疾病監測點開展，按照腦卒中患病率約1%的抽樣估算，確定調查人群60萬人，結果顯示，腦卒中死亡率為127.2/10萬，加權率為85.9/10萬，農村地區為116.8/10萬，顯著高于城市居民的74.9/10萬[10]。在本研究中，隨訪至6個月時，19例患者死亡，總體生存率為76.25%(61/80)。存活組、死亡組患者的miRNA-602相對表達水平分別為(3.62±0.87)、(30.52±6.78)。生存曲線顯示，miRNA-602低表達組患者的6個月生存率顯著好于miRNA-602高表達組。這表明，miRNA-602高表達可作為預測腦卒中患者預后不良的可靠指標。

綜上所述，血清miRNA-602表達水平對腦卒中患者預后有較高的預測價值。但本文為單中心研究，且樣本量較小，未來在多中心聯合的基礎上，實施更大樣本量的研究，或能得出更具說服力的證據。