超聲參數與卵巢癌病灶組織增殖、侵襲及血管生成基因的關系

楊弋弋 周新歡 鄒 科 吳佩蔚

卵巢癌早期癥狀不明顯，診斷率低，且缺乏準確判斷惡性程度無創檢查方式[1]。癌細胞增殖、侵襲導致浸潤性生長與腫瘤復發、轉移有關，病灶組織中癌細胞增殖、侵襲與新生血管形成密切相關。腫瘤病灶中新生血管形成是癌細胞進展基礎，對癌癥病灶中血管特點，評估其血流情況不僅能提供診斷依據，還可判斷惡性程度[2]。故早期準確判斷卵巢癌良惡性并及時治療對優化患者結局極為重要。超聲造影為臨床中新型超聲檢查方法，利用微氣泡造影劑可準確顯示局部組織中血流狀況并量化評估[3]。為明確超聲造影對卵巢癌進展程度的判斷價值，本研究通過比較卵巢癌惡性程度癌病組織超聲造影參數，并分析各參數與病灶組織增殖、侵襲與血管生成基因間的相關性，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

經醫院倫理委員會批準，回顧性分析2019年4月至2021年3月于我院行手術治療的132例 卵巢腫瘤患者資料。納入標準：具有手術指征；首次發??；預生存期超過6個月；臨床資料完整。排除標準：近期有腹部手術史患者；肝腎功能障礙患者；出現遠處轉移患者；精神疾病或意識障礙患者。術后按病理結果分為卵巢癌組與良性腫瘤。卵巢癌組共78例，年齡為42～65歲，平均(53.58±4.68)歲；絕經31例、未絕經47例。卵巢良性腫瘤組共54例；年齡為40～62歲，平均(52.73±5.12)歲；絕經20例、未絕經34例。兩組資料無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

超聲造影[4]：術前1周檢查，先常規超聲確定病灶部位后切換造影，經肘靜脈注入SonoVue造影劑2 ml，然后用5 ml生理鹽水沖洗管壁；探頭記錄動態影響，測定其基礎強度(BI)、峰值強度(PI)、達峰時間(TTP)，增強強度(EI)為PI與BI兩者之差。

分別取適量卵巢癌病灶組織與良性腫瘤組織，向其加入蛋白裂解液以得到組織的總蛋白，采用酶聯免疫吸附法測定增殖分子(FUNDC1、CyclinD1、P27kin1、ELF5)、侵襲分子(FN14、E-cadherin、ZEB1、IGFBP2)、血管新生分子(NFATc1、VEGFR1、CGB5、TNFSF15、Fibulin-5)蛋白含量。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組超聲造影參數指標比較

卵巢良性腫瘤組EI為(72.35±9.12)dB、TTP為(29.91±4.30)s，卵巢癌組分別為(89.23±11.29)dB、(22.12±3.82)s；卵巢癌組EI高于良性腫瘤組，TTP低于良性腫瘤組(P<0.05)。見表1。

表1 超聲造影參數指標比較

2.2 增殖分子蛋白含量比較

卵巢癌組FUNDC1、CyclinD1含量高于卵巢良性腫瘤組，P27kin1、ELF5含量低于卵巢良性腫瘤組(P<0.05)。見表2。

表2 增殖分子蛋白含量比較

2.3 侵襲分子蛋白含量比較

卵巢癌組FN14含量低于卵巢良性腫瘤組，E-cadherin、ZEB1、IGFBP2含量高于卵巢良性腫瘤組(P<0.05)。見表3。

表3 侵襲分子蛋白含量比較

2.4 血管新生分子蛋白含量比較

卵巢癌組NFATc1、VEGFR1、CGB5含量高于卵巢良性腫瘤組，TNFSF15、Fibulin-5含量低于卵巢良性腫瘤組(P<0.05)。見表4。

表4 血管新生分子蛋白含量比較

2.5 相關性分析

經Pearson相關性分析結果顯示，FUNDC1、CyclinD1、E-cadherin、ZEB1、IGFBP2、NFATc1、VEGFR1、CGB5與EI呈正相關，與TTP呈負相關；P27kin1、ELF5、FN14、TNFSF15、Fibulin-5與EI呈負相關，與TTP呈正相關(P<0.05)。見表5。

表5 相關性分析

3 討論

卵巢癌病灶中細胞生長快且浸潤性強，該情況與新生血管生成密切相關。癌組織中新生血管結構不同于正常血管，管壁中無平滑肌且只有內皮細胞，故血管走形彎曲、缺口多、阻力小、血流豐富，有助于為癌細胞生長提供養分，且能經癌細胞直接接觸血液以促進腫瘤轉移[5]。常規卵巢癌篩查為腹部超聲檢查，但該檢查方式受到環境、患者內分泌情況等因素影響，診斷準確性尚待提高[6]。超聲造影為臨床中新興檢查方式，通過微泡造影劑將病灶中血流特征顯示更清晰。微泡造影劑使用磷脂為微泡包膜，內部有高密度惰性氣體，可自由通過微循環將新生血管清晰顯示，動態記錄血流變化并定量測定參數可對新生血管特征有較好評估。TTP、EI為超聲造影常用參數，TTP反映血流阻力；EI評估血流豐富度。本研究中卵巢癌病灶組織TTP比良性腫瘤更低，EI高于良性腫瘤組織，表明病灶中造影血流表現為強度大且速度快，反映病灶中新生血管阻力小且血流豐富[7]。

增殖與侵襲為癌細胞主要特征，增殖可增加腫瘤體積，侵襲能誘導腫瘤向遠處轉移，是腫瘤惡變的根本，也能衡量腫瘤惡性程度。本研究通過檢測病灶組織內增殖基因表達，以研究較多的增殖基因有FUNDC1、CyclinD1、P27kin1、ELF5，FUNDC1與ELF5為細胞中調節抑癌活性的分子，FUNDC1經自噬關鍵蛋白和LIR保守結構域作用以介導線粒體自噬，可參與卵巢癌自噬過程，可拮抗P27kin1功能。研究實驗指出[8]，沉默FUNDC1基因表達可抑制卵巢癌細胞增殖活性。CyclinD1為細胞中重要周期調控分子，可與CDK4、6等形成復合物以加快細胞周期，對細胞增殖有促進作用。P27kin1作為抑癌基因能抑制細胞周期蛋白激酶活化，拮抗細胞增殖與其周期發展[9]。本研究中卵巢癌病灶組織中FUNDC1與CyclinD1含量上升，ELF5、P27kin1含量下降，說明促增殖分子呈高表達、抑制增殖分子呈低表達，該結果與卵巢癌發生發展有關。通過相關性分析結果顯示，卵巢癌病灶組織FUNDC1與CyclinD1蛋白含量與TTP呈負相關，與EI呈正相關；ELF5、P27kin1蛋白含量則相反。該結果表明卵巢癌病灶中造影參數變化、新生血管增加可導致細胞過度增殖，超聲造影參數能反映能反映卵巢癌腫瘤增殖活性[10]。

癌細胞浸潤生長過程伴隨細胞增殖、侵襲，侵襲分子異常與癌細胞侵襲有關。本研究以FN14、E-cadherin、ZEB1、IGFBP2等mRNA表達量為例，確定卵巢癌細胞侵襲活性。IGFBP2為細胞中調控蛋白，能結合IGF以延長細胞半衰期，提高對細胞侵襲功能的促進作用[11]。ZEB1為轉錄因子，能調控上皮間質轉化，可識別E-cadherin啟動區域并對基因表達有阻礙作用，提高細胞遷移、侵襲力[12]。FN14為I型跨膜受體，能抑制細胞中多種蛋白酶活化，阻礙細胞外基質水解及細胞侵襲[13]。本演技卵巢癌病灶組織FN14、E-cadherin含量下降，ZEB1、IGFBP2含量上升，提示促侵襲分子在癌組織中呈高表達，侵襲抑制分子呈低表達，該結果與卵巢癌發生發展密切相關。相關性分析顯示超聲造影參數的TTP與侵襲抑制分子呈正相關，EI與其呈負相關；促侵襲分子則相反，說明促侵襲及侵襲抑制分子與侵襲基因相關。該結果表明超聲造影參數變化、新生血管增加導致細胞過度侵襲，測定造影參數能反映卵巢癌細胞侵襲活性[14]。

卵巢癌病灶中新生血管為癌細胞發生增殖、侵襲的基礎，新生血管提供血供能調節增殖分子表達，對細胞增殖有促進作用。內皮細胞增殖、轉移為新生血管形成的關鍵環節，受到多種分子調控。監測血供是鑒別癌癥的重要方法，良性腫瘤病灶血管少、生長緩慢，可能因良性腫瘤向周圍生長而擠壓周圍血管，血管環繞周圍生長而使內部血管減少，生長較慢。惡性病灶新生血管管壁薄、阻力小、走形異常，周圍血管向中心深入內部病灶，生長快，以簇團狀為病灶提供養分[15]。故觀察血管參數有助于鑒別卵巢癌惡性程度。VEGF能促進血管新生，與內皮細胞膜上VEGFR1結合促進細胞增殖并形成血管樣結構。NFATc1為活化T細胞核因子，CGB5為β5亞基，均對VEGF生成有促進作用。TNFSF15、Fibulin-5為內源性血管新生抑制分子，對內皮細胞增殖、遷移有抑制作用。卵巢癌組病灶中NFATc1、VEGFR1、CGB5含量上升，TNFSF15、Fibulin-5下降，表明卵巢癌發生發展的病灶中促血管新生分子呈高表達、血管新生抑制分子呈低表達[16]。相關性分析結果表明，卵巢癌病灶血管新生過程異常會改變超聲造影參數，測定TTP與EI能反映血管新生狀況[17]。

綜上所述，卵巢癌超聲造影的參數TTP、EI與其病灶中細胞增殖、侵襲分子及血管新生分子表達水平有關，該參數能反映病灶中癌細胞浸潤生長活性與血管新生程度。