GC 法同時測定冰珍去翳滴眼液中冰片和苯氧乙醇的含量

陳玲玲，支榮榮，陳驍勇

1 鹽城市食品藥品監(jiān)督檢驗中心，鹽城 224000；2 江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院 藥劑科，鹽城 224000

冰珍去翳滴眼液（商品名白內停）是由珍珠層粉、冰片等組成的眼部制劑。具有去翳明目的功效，主要用于老年性白內障初發(fā)期的治療[1]。方中冰片有促進藥物滲透吸收、協(xié)同其他藥物增效兼具抗菌消炎等藥理作用[2，3]，也是滴眼液的重要組成之一。

為防止滴眼液在儲存及使用過程中被微生物污染，滴眼劑中添加一定量的抑菌劑。而抑菌劑具有一定的毒性，其加入量應加以控制，《中國藥典》四部“滴眼劑通則”明確要求，應在產品標簽標明抑菌劑種類和標示量[4]。冰珍去翳滴眼液現行標準對滴眼劑中珍珠層粉總氮量、葡萄糖酸鋅含量作定量控制[5]，未對抑菌劑苯氧乙醇進行質量控制，對具有揮發(fā)性成方的冰片采用薄層色譜進行定性鑒別。目前，冰片和苯氧乙醇的含量測定均有文獻報道[6，7]。本研究建立GC 法同時測定該滴眼液中冰片、苯氧乙醇含量，以便更好地控制其質量。

1 儀器與藥品、試劑

1.1 儀器

Agilent 8890 型氣相色譜儀；氫火焰離子檢測器；BP211D 電子天平（德國Sartorius）。

1.2 藥品與試劑

天然冰片（右旋龍腦）（批號：111688-201602，純度：99.6%）、苯氧乙醇對照品（批號：190242-202001，純度：99.1%）、龍腦（批號110881-201709，純度：99.6%）、異龍腦（批號111512-201904，純度：98.4%），均購于中國藥品食品檢定研究院；無水乙醇為分析純。

冰珍去翳滴眼液4 批，購自于市場及檢測留樣。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：安捷倫DB-WAX 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；進樣口溫度：200 ℃，檢測器溫度：250 ℃，程序升溫（起始溫度130 ℃，保持10 min以25 ℃·min-1升至200℃，保持5 min），分流比：10∶1；載氣為氮氣，流速：1 mL·min-1；進樣量：1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取天然冰片、苯氧乙醇對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每毫升含天然冰片0.577 2 mg、苯氧乙醇3.243 5 mg 的對照品貯備液。精密量取貯備液1mL，置10mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，混勻，制成每毫升含冰片57.72 μg 和苯氧乙醇324.35 μg 的對照品溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液 取本品1 mL 置10 mL 量瓶中，無水乙醇定容至刻度，混勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 按照本品處方工藝，制成缺冰片、缺苯氧乙醇的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.2.4 龍腦、異龍腦對照品溶液 取龍腦、異龍腦對照品適量，精密稱定，加無水乙醇制成每毫升各含60 μg 的混合溶液。

2.3 專屬性考察

精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液和龍腦、異龍腦對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。在供試品溶液中，冰片、苯氧乙醇出峰時間分別為8.7 min、15.2 min，與相應對照品一致；陰性溶液在相同保留時間處無色譜峰，色譜圖見圖1；龍腦、異龍腦對照品溶液中龍腦、異龍腦分離度為3.5，色譜圖見圖2。

圖1 冰珍去翳滴眼液GC 色譜圖

圖2 龍腦、異龍腦GC 色譜圖

2.4 線性關系考察

精密吸取對照品貯備液0.2、0.5、0.8、1.0、1.5、2.0 mL 置10 mL 量瓶中，加無水乙醇至刻度，制成系列混合對照品溶液。精密吸取上述溶液1 μL，注入氣相色譜儀，測得峰面積。以溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程分別為：天然冰片Y=1.63×103X-4.25，r=0.999 8，線性范圍0.011 54～0.115 4 mg·mL-1；苯氧乙醇Y=1.30×103X-17.82，r=0.999 9，線性范圍0.064 87～0.648 7 mg·mL-1。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，平行測定6 次，記錄色譜圖，天然冰片、苯氧乙醇峰面積的RSD 分別為0.94%、0.95%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一批號樣品適量（批號200801）按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在室溫下放置0、4、8、12、16、24 h，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，天然冰片、苯氧乙醇峰面積的RSD 分別為1.14%、0.93%，表明供試品溶液在24 h 內穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取同一批號樣品適量（批號200801），按“2.2.2”項下方法制備供試溶液，計6 份，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，天然冰片、苯氧乙醇峰面積的RSD 分別為1.89%、1.76%，表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取同一批號樣品0.5 mL（批號200801）計6 份，置10 mL 量瓶中，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密加入對照品溶液0.5 mL。按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，計算回收率，結果表明，天然冰片平均加樣回收率為100.4%，RSD 為1.09%；苯氧乙醇平均加樣回收率為100.9%、RSD 為1.33%，表明方法準確度良好。見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=6）

2.9 樣品含量測定

取4 個批號樣品，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，天然冰片、苯氧乙醇含量測定結果見表2。

表2 樣品中天然冰片及苯氧乙醇的含量測定結果

3 討論

3.1 樣品制備方法的改進

有關文獻[8，9]均采用乙酸乙酯萃取法進行冰片含量的測定，預實驗篩選以石油醚（30 ℃～60 ℃）、石油醚（60 ℃～90 ℃）、乙酸乙酯、正己烷作為溶劑，以1 mL∶10 mL（樣品∶試劑）進行萃取，結果冰片在所有溶劑中含量幾乎相同。由于滴眼液中苯氧乙醇濃度較高（3 mg·ml-1）且該物質極性相對于石油醚、正己烷較大，石油醚、正己烷萃取不完全；但是在乙酸乙酯中乳化現象太嚴重且供試品制備時間較長。

冰珍去翳滴眼液為水溶性制劑，被測成分及雜質均溶解其中。本實驗選擇了直接稀釋法，分別采用無水乙醇及甲醇作為稀釋劑，實驗發(fā)現，天然冰片及苯氧乙醇峰面積沒有差異；但是無水乙醇可將滴眼液中無機鹽沉淀，減少了對色譜系統(tǒng)的污染，故選擇其作為稀釋劑。比較了供試品稀釋倍數，當稀釋10 倍時，天然冰片峰型對稱且右旋龍腦和苯氧乙醇的信噪比均在10 以上，可以準確定量。

3.2 色譜條件優(yōu)化

根據天然冰片、苯氧乙醇極性及沸點采用鍵合交聯(lián)色譜柱DB-WAX，當柱溫為170 ℃，苯氧乙醇出峰時間大大延遲；柱溫為200 ℃時，合成冰片中龍腦和異龍腦分離不完全，故采用程序性升溫，天然冰片及苯氧乙醇均在20 min 內流出，龍腦與異龍腦基線分離，分離度3.5。

冰片有天然冰片與合成冰片之分，天然冰片中主要成分為右旋龍腦，含量96%以上，合成冰片成分為龍腦（消旋體）和異龍腦組成。在本色譜條件下，樣品圖譜中只有一個峰且與對照品天然冰片峰保留時間一致，確定冰珍去翳滴眼液中的冰片是天然冰片。該藥品的包裝及說明書上寫的成分為冰片，建議廠家修訂為天然冰片。

4 結論

冰珍去翳滴眼液中冰片與苯氧乙醇的含量差異較大，通過選擇合適的稀釋劑及稀釋倍數，經優(yōu)化色譜條件，實現了在同一色譜條件下同時測定兩種成分的含量，并通過方法學的驗證，證明該方法靈敏、準確、專屬性強，可作為滴眼液主藥冰片和抑菌劑苯氧乙醇的質量控制。